油菜苗期菌核病抗性鉴定.ppt

1、学习和初步掌握油菜苗期菌核病抗性鉴定技术方法。,一、目的,实验室苗期菌丝接种鉴定法方法简单易行，鉴定周期短，不受自然环境影响，适于对大量材料的筛选。 另据初步研究，苗期菌丝接种鉴定表现抗菌材料，在花期仍表现抗病。 在本实验中只学习和掌握苗期菌丝块接种鉴定法。,二、内容说明,（一）用品 油菜不同品种种子（包括抗病品种如中油821，感病品种如84039的种子）、生长室、平底塑料盘（60304cm）、园土、绿高一号液（北京北农绿高科技发展有限公司出产）、马铃薯、纱布、葡萄糖、琼脂胶、试管、三角瓶、解剖刀、接种环等。,三、所需用品和操作方法,（1）土壤准备：取较肥沃的菜园土，清除石块，晒干敲碎，然后装

2、入塑料盘中（需装满）。,（二）、主要作法1. 供试苗的种植,（2）油菜播种：保证出苗后能保留生长一致苗30株。每10个品种设对照。,（二）、主要作法1. 供试苗的种植,（3）土壤消毒：播种后用20003000倍的绿亨一号溶液浇透土壤进行消毒。,（二）、主要作法1. 供试苗的种植,（4）播后管理： 播后将塑料盘放于生长室内，在出苗期间，室内温度控制在20以下，在出真叶后，控制2024左右，每2天喷水一次。,（二）、主要作法1. 供试苗的种植,生 长 室,生长室外管理,（1）PDA培养基的制作： 取马铃薯200g，洗净去皮切碎，加水1000mL，煮沸30min，用纱布过滤，将滤液加水补足到1000

3、mL，加葡萄糖1020g和琼脂胶1720g，加热溶化，用纱布过滤。然后依需要，分别装入试管（用作贮藏菌种），或装入培养皿（用作培养菌丝接种菌），然后在高压灭菌锅内进行灭菌。,（二）、主要作法2.菌丝的培养,（2）菌丝的培养： 取贮存平板菌核病的菌丝，在无菌条件下移下装有PDA培养基的培养皿上，每皿一小块，放在培养皿中间，在2225下培养34天，以菌丝长满，而又没有结核为宜。,（二）、主要作法2.菌丝的培养,（1）接种： 待油菜苗35片真叶时，将菌丝平板以无菌解剖刀切成0.50.5cm小块，将有菌丝的一面贴于叶片上（注意不要贴在叶脉上），每株接种1片叶，每叶接种1小块。 见下图,（二）、主要作法

4、3. 菌丝块的接种与管理,（2）管理：接种后在2326温度和85%95%相对湿度下培养57天后即可调查（注意接种后前2天相对湿度应保持95%以上，以确保发病，后35天保持85%左右，使接种菌不致于腐烂）。,（二）、主要作法3. 菌丝块的接种与管理,在试验中当感病品种的发病率超过40%以上方为有效鉴定。 一般将病害等级分为5个等级，即： 0级：无病。 1级：病斑面积占接种叶面积10%以下。 2级：病斑面积占接种叶面积1030%。 3级：病斑面积占接种叶面积3050%。 4级：病斑面积占接种叶面积50%以上。,（二）、主要作法4. 病害等级调查,（1）计算发病率,（二）、主要作法 5. 统计方法和抗性分级标准,（2）计算病情指数,式中：Gi为病害级别；Ni为调查株数； i为0、1、2k,GK为最高级别。,（二）、主要作法 5. 统计方法和抗性分级标准,（3）计算相对抗性指数（RRI）,式中：m为供试材料；CK为对照。 RRI，即Relative resistant index,（二）、主要作法 5. 统计方法和抗性分级标准,（4）抗性分级标准：,（二）、主要作法 5. 统计方法和抗性分级标准,1、供