生物检测技术实验.ppt

1、生物检测技术实验,主 讲：郑 鸣 单 位：郑州牧专,实验一 培养基和常用试剂的配制,实验室注意事项 常用仪器的使用 实验器皿的准备 常用试剂的配制,实验室注意事项,熟悉并遵守实验室规章制度 遵守纪律，维护秩序，保持安静，按要求穿戴工作服。 掌握原理，搞清步骤，了解所用器材和试剂，逐步学会合理计划和安排实训时间，计算溶液用量和配制方法。 严格遵守操作规程，思路清晰，操作仔细，观察细致，记录及时，结果合理； 注意实验室卫生。保持操作台面整洁，实验室内严禁进食、喝水、吸烟，不得存放与实验无关的物品。 试剂药品等消耗品的使用要厉行节约，公用试剂药品用毕立即放回原处，应特别注意保持药品、试剂的纯净，用后

2、立即盖盖，严禁混杂。 对实验仪器应加倍爱护。精密及贵重仪器必须按操作规程使用，听从老师指导，做好仪器设备使用情况登记，若出现异常情况应及时向指导老师汇报；在使用易碎的玻璃仪器时应谨慎仔细，防止损坏，公用仪器一旦损坏，应填写破损纪录。,实验室注意事项,熟悉并遵守实验室规章制度 注意安全。乙醚、乙醇、丙酮等易燃物品，使用时必须远离火源；使用电炉、高速离心机等易出现危险的仪器，不得擅离岗位，用毕切记断电。 实验完毕后应将所用设备器具清洗干净，实验台面擦拭干净，并整理好桌面物品，经老师验收后方可离去。 值日生负责实验室卫生和检查是否关水、电、门、窗、电扇等，严防不安全隐患事故发生，经管理老师批准后，方

3、可离开实验室。 完成实验后按要求独立完成实验报告，报告内容要真实，字迹清楚，内容简明，数据完整真实，处理科学。若实验失败，需认真分析失败的原因。 进入实验室要穿工作服,注意个人和公共安全防护 眼、手、脸、皮肤、衣服 有机试剂、酸缸、紫外线 致癌、致畸物质(溴化乙锭、丙烯酰胺) 爱护仪器设备 不擅自启动/调节不熟悉的仪器 用过的仪器设备及时归回到原来状态 保持实验室卫生 及时清理工作台面 规范实验记录 实验步骤、实验结果和结果分析,实验室注意事项,常用仪器使用,电子天平 高压灭菌锅 超净工作台 培养箱 pH计 显微镜 离心机 移液器,电子天平,选择合适的天平 0.001g或0.0001g 要保持

4、水平、防振 称量时关闭仓门 放入器皿后归零 称量后清理洒落药品 定期校准天平 内置砝码、称量纯水,高压灭菌锅,使用前： 需要专用电源 用前务必检查水位和安全阀 确认物品是否耐高压 塑料、一次性用品 糖、培养基、血清,使用 向灭菌锅内加适量的水，最好是煮沸过的水，以减少水垢在锅内的积存。 将待灭菌物品放入灭菌桶内，注意不要装的太挤，要留有适当的空隙以利蒸气流通。 对角地、平衡地拧紧锅盖上的螺栓，切勿漏气。 打开电源，直至有大量蒸气从锅内排出时，再将排气阀关闭，锅内水沸腾，升温、升压。 待压力，温度达到要求（121.5，0.1MP）时，开始计算灭菌时间（2030min）。 达到规定的灭菌时间后，关

5、闭热源，让灭菌锅自然降压冷却。 待压力完全降至“0”时打开排气孔。 打开灭菌锅盖，取出灭过菌的物品。,高压灭菌锅,注意事项 普通高压灭菌锅需要先排气 待灭菌的物品放置不宜过紧； 必须将冷空气充分排除，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果； 不能过早打开排气孔，以免锅内压力快速降低，而温度不能很快下降，致使培养基剧烈沸腾，沾污棉塞，甚至冲出容器，造成污染，须待灭菌器内压力降至与大气压相等后才可开盖。,高压灭菌锅,超净工作台,超净工作台又称净化工作台或洁净工作台，是为实验室提供无菌操作环境的设施，是保护实验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供某些程度的保护，以防污染并保护操作者，主要有双开门

6、侧向通风型、双开门垂直通风型、双人单开门垂直通风型、垂直通风负压型（生物安全柜）等类型。,使用方法 每次使用超净工作台时,实验人员应先开启超净工作台上的紫外灯,紫外照射20分钟后使用。 开启超净工作台工作电源，关闭紫外灯，开启风机，并用75%的酒精或0.5%过氧乙酸喷洒擦拭消毒工作台面。 整个实验过程中，实验人员应按照无菌操作规程操作。 实验结束后，用消毒液擦拭工作台面,，重新开启紫外灯照射15分钟，关闭电源； 实验人员应注意保持室内整洁。,超净工作台,注意事项 对新安装的或长期未使用的工作台，使用前必需对工作台和周围环境先用超净真空吸尘器或用不产生纤维的工具进行清洁工作，再采用药物灭菌法或紫

7、外灭菌法进行灭菌处理。 工作台面上，不要存放不必要的物品，以保持工作区内的洁净气流正常流动，不受干扰。 禁止在工作台面上记录，工作时应须尽量避免作明显扰乱气流的动作。,超净工作台,培养箱,培养箱是科研实验的必需设备，主要适用于医疗卫生、医药、生物、农业、科研单位等部门作储藏菌种、生物培养之用。现在主要有生化培养箱、二氧化碳培养箱、电热式和隔水式培养箱三种类型，每种类型都有其特点和独特的功用，可以根据自己的需求选择适合的培养箱。,使用方法 插上电源，打开培养箱的电源开关； 设置培养时所需的温度； 当温度达到设置温度时，打开培养箱内外门，将培养物放入培养箱内，关好内外门即可。,培养箱,注意事项 箱

8、内培养物不应太挤，以便箱内热空气对流； 放入或取出物品时应随手关门，以保持箱内温度恒定； 由于生化培养箱有压缩机制冷装置，注意保持电压稳定，不要过度倾斜，及时清扫散热器上的灰尘等。,培养箱,pH计,用前检查pH计 电极是否置于保存液 pH是否准确 pH计校准 尽管pH计种类很多，但其校准方法均采用两点校准法，即选择两种标准缓冲液：一种是pH7标准缓冲液，第二种是pH9标准缓冲液或pH4标准缓冲液。先用pH7标准缓冲液对电计进行定位，再根据待测溶液的酸碱性选择第二种标准缓冲液。如果待测溶液呈酸性，则选用pH4标准缓冲液；如果待测溶液呈碱性，则选用pH9标准缓冲液。,pH计校准 将“pH-mv”开

9、关拨到pH位置。 打开电源开头指示灯亮，预热30分钟。 调节温度补偿旋钮，使旋钮白线对准溶液温度值；同时把斜率调节到旋钮顺时针旋到底（即调到100%位置）； 把用蒸馏水清洗过的电极插入pH=6.86的标准缓冲液中，注意使玻璃电极端部小球和甘汞电极的毛细孔浸在溶液中，轻轻摇动小烧杯使电极所接触的溶液均匀。 调节定位调节旋钮，使仪器显示读数与该缓冲液当时温度下的pH值相一致（如用混合磷酸盐定位温度为10时，pH=6.92）； 用蒸馏水清洗电极，再插入pH=4.00（或pH=9.18）的标准缓冲液中，调节斜率旋钮使仪器显示读数与该缓冲液在当时温度下的pH值一致； 重复以上操作直至不用再调节定位或斜率

10、两调节旋钮为止； 校准后，切勿再旋动定位旋钮，否则需重新校整。取下标准液小烧杯，用蒸馏水冲洗电极。,pH计,pH计,附录：缓冲溶液的pH值与温度关系对照表,使用注意事项 取下电极套后，应避免电极的敏感玻璃泡与硬物接触，因为任何破损或擦毛都使电极失效。 测量后，及时将电极保护套套上，电极套内应放少量内参比补充液以保持电极球泡的湿润。切忌浸泡在蒸馏水中。 复合电极不用时，可充分浸泡3M氯化钾溶液中。切忌用洗涤液或其他吸水性试剂浸洗。 测量浓度较大的溶液时，尽量缩短测量时间，用后仔细清洗，防止被测液粘附在电极上而污染电极。 清洗电极后，不要用滤纸擦拭玻璃膜，而应用滤纸吸干, 避免损坏玻璃薄膜、防止交

11、叉污染，影响测量精度。 电极不能用于强酸、强碱或其他腐蚀性溶液。 严禁在脱水性介质如无水乙醇、重铬酸钾等中使用。,pH计,显微镜,结构 机械系统部分 光学系统部分 照明系统部分 图像分析系统,机械系统部分,操作,显微镜,取镜 放镜 对光 放片 调焦(粗调焦和细调焦),低倍镜的使用,定位 换镜 调焦(细调焦),高倍镜的使用,注意事项 整体保养：生物显微镜要放置在干燥阴凉、无尘、无腐蚀的地方。使用后，要立即擦拭干净，用防尘透气罩罩好或放在箱子内。 机械系统的维护保养：使用后，用干净细布擦净，定期在滑动部位涂些中性润滑脂。如有严重污染，可先用汽油洗净后再擦干，但切忌用酒精或乙醚清洗，因为这些试剂会腐

12、蚀机械和油漆，造成损坏。 光学系统的维护保养：使用后，用干净柔软的绸布轻轻擦拭目镜和物镜的镜片。有擦不掉的污迹时，可用长纤维脱脂棉或干净的细棉布蘸少些二甲笨或镜头清洗液（3份无水乙醇2份乙醚）擦拭，然后用干净细软的绸布擦干或用吹风机吹干即可。聚光镜和反光镜用后只要擦干净就可以了。,显微镜,离心机,确保离心机水平、平稳 确保离心管密封良好 不要装得过满 离心前切记用天平配平 误差0.1g 选择合适的转子、转速 离心后清理离心机转子和内腔 敞开离心机盖 避免水汽侵入电机,微量移液器的使用 首先按照实际的吸取液体的体积，选择合适量程的微量移液器。,移液器,一个完整的移液循环，包括吸头安装 容量设定

13、预洗吸头 吸液 放液 卸去吸头等六个步骤。每一个步骤都有需要遵循的操作规范。,微量移液器的使用,吸头安装：正确的安装方法叫旋转安装法，具体的做法是，把移液器顶端插入吸头，在轻轻用力下压的同时，把手中的移液器按逆时针方向旋转180度。切记用力不能过猛，更不能采取剁吸头的方法来进行安装，因为那样做会对您手中的移液器造成不必要的损伤。 容量设定：正确的容量设定分为两个步骤，一是粗调，即通过排放按钮将容量值迅速调整至接近自己的预想值；二是细调，当容量值接近自己的预想值以后，应将移液器横置，水平放至自己的眼前，通过调节轮慢慢地将容量值调至预想值，从而避免视觉误差所造成的影响。,预洗吸头：在我们安装了新的

14、吸头或增大了容量值以后，应该把需要转移的液体吸取、排放两到三次，这样做是为了让吸头内壁形成一道同质液膜，确保移液工作的精度和准度，使整个移液过程具有极高的重现性。 吸液：先将移液器排放按钮按至第一档，再将吸头垂直浸入液面，将枪头插入液面下23毫米。平稳松开按钮，切记不能过快。 放液：放液时，吸头紧贴容器壁，先将排放按钮按至第一档，略作停顿以后，再按至第二档，这样做可以确保吸头内无残留液体。如果这样操作还有残留液体存在的话，您就应该考虑更换吸头了。,微量移液器的使用,反向移液法：以上为前进移液法。另外用于转移高粘液体、生物活性液体、易起泡液体或极微量的液体时，最好采用反向移液法，就是先吸入多于设

15、置量程的液体，转移液体的时候不用吹出残余的液体。先按下按钮至第二停点，慢慢松开按钮至原点。接着将按钮按至第一停点排出设置好量程的液体，继续保持按住按钮位于第一停点（千万别再往下按）。,卸去吸头：卸掉的吸头一定不能和新吸头混放，以免产生交叉污染。,微量移液器的使用,吸头安装,容量设定、预洗吸头和吸液,放液,卸去吸头,保养和注意事项： 使用完毕，可以将其竖直挂在移液枪架上，但要小心别掉下来。当移液器枪头里有液体时，切勿将移液器水平放置或倒置，以免液体倒流腐蚀活塞弹簧。 如不使用，要把移液枪的量程调至最大值的刻度，使弹簧处于松弛状态以保护弹簧。 最好定期清洗移液枪，可以用肥皂水或60 的异丙醇，再用

16、蒸馏水清洗，自然晾干。,移液器,常见的错误,移液器,常见的错误,移液器,常见的错误,移液器,实验器皿的准备,试管 平皿 离心管 培养瓶 吸管 枪头,清洗 烘干、风干 包扎 牛皮纸、锡纸 高压灭菌、干烤 烘干,玻璃器皿的清洗 清洁的玻璃器皿是实验得到正确结果的先决条件，因此，玻璃器皿的清洗是实验前的一项重要准备工作。清洗方法根据实验目的、器皿的种类、所盛放的物品、洗涤剂的类别和沾污程度等的不同而有所不同。,实验器皿的准备,玻璃器皿的清洗 玻璃器皿经洗涤后，若内壁的水是均匀分布成一薄层，表示油垢完全洗净，若挂有水珠，则还需用洗涤液浸泡数小时，然后再用自来水充分冲洗。,实验器皿的准备,试剂纯度等级,

17、实验用水等级,常用计量单位,质量 gmg g ng pg 分子数 molmmol mol nmol pmol 体积 LmL L nL pL 时间 d、h、min、sec,溶液浓度表示方法,质量浓度 (%，m/V):0.85%NaCl 质量体积百分比浓度 100mL溶液中含溶质的质量(g) 体积分数(%，V/V): 75%酒精(v/v) 体积百分比浓度 100ml溶液中含液体溶质的体积(mL) 摩尔浓度(mol/L,M): 1 mol/L Tris-HCl 1L溶液中含溶质的摩尔数(mol) 当量浓度(N): 1N HCl 1L溶液中含H+或OH-的摩尔数(mol) 按比例配制:氯仿:异戊醇(24:1) 数字代表各组分体积,试剂/培养基的配制程序,计算 摩尔数、H2O 称量 1/1000-1/1000电子天平 溶解 搅拌、加热、pH 调pH值 pH计、精密pH试纸 定容 容量瓶、量筒 标签 溶液名称(浓度、pH)、配制人、日期 灭菌 高压、过滤,试剂的配制,0.85% NaCl(w/v) 75%酒精(v/v) 1 mol/L Tris-HCl (pH8.0) TE(10