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文档简介
1、第七节 双向电泳,定义：将样品进行电泳后，为了不同的目的在它的垂直方向再进行一次电泳的方法。 双向电泳的种类： 第一向等电聚焦，第二向SDS电泳 第一向SDS电泳，第二向等电聚焦。 常用的双向电泳为第一向等电聚焦，第二向SDS电泳。,第一向：等电聚焦,载体两性电解质PH梯度 固相PH梯度（IPG）：,固相pH梯度,为拥有CH2=CH-CO-NH-R结构的8种丙烯酰胺衍生物系列，其中R包含羧基或叔氨基团，它们构成了分布在pH310不同值的缓冲体系。,不产生阴极漂移、PH梯度稳定、分辨率高、重复性好。,第二向：SDS-PAGE,同普通SDS-PAGE类似。 一般在垂直电泳系统中无需浓缩胶，因为在I
2、PG胶条中蛋白质区域已得到浓缩，可以认为非限制性IEF胶（低浓度丙烯酰胺胶）充当了浓缩胶。,双向电泳在在制药工程中的应用,药物及药物靶点的识别 疾病标记蛋白的识别 药物毒理学研究 药物合成过程中相关酶系的研究 蛋白质间的相互作用,IPG胶条的蛋白质大约载样量,IPG IEF 中pH梯度的选择,常用方法： 先宽后窄 先线性后非线性 先短后长,凝胶的图像处理分析和典型流程,凝胶图像的扫描： 图像加工： 斑点检测和定量： 凝胶配比： 数据分析： 数据呈递和解释： 2-DE数据库的建立：,LCM-DIGE (cy3-Lgreen, cy5-Kred),A E6 Cy3,B E6+SARS Cy5,C E6 Cy5 E6+SARS Cy3,复习题,1.影响电泳分离效果的主要因素有哪些，分别是如何影响的? 2. SDS-PAGE测定蛋白质分子量的原理?,测试题,1. 抗原与抗体反应具有_、_、_及_等性。 2. 对于某一抗体而言，其质量衡量指标主要有_、_和_。 3.免疫分析法利用_反应检测各种物质（药物、激素、蛋白质、微生物等）的方法。 4. RIA 是以放射性核素标记_ ，使标本中_与试剂中_竞争结合_ ，通过测定结合相的放射性强度，推定标本含量。 5. 生物素-亲和素系统中的 ABC复合物是指 _ 。 6. 聚丙烯酰胺凝胶制备时，聚合反应所使用的化学催化剂是_，
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