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文档简介

1、胡萝卜的组织培养（一） 组织培养1 准备（1） 器具准备： 高压蒸汽灭菌锅： 培养基，接种工具，蒸馏水的消毒。手持喷雾器： 装70%的酒精，用于外植体，接种工具，操作人员的消毒。 超净工作台： 用于无菌操作。 设备：培养架，温度控制器，摇床，光照培养箱，烘干器，蒸馏水器，冰箱，电炉，天平，温度计，酸度计，显微镜，分注器，移液器，磁力搅拌器， 常用玻璃器具：量筒，培养皿，烧杯，50ml锥形瓶，容量瓶，广口瓶，滴管，移液管，试管，酒精灯，玻璃棒， 常用金属仪器：镊子，剪刀，解剖刀，解剖针，接种针，刀架 其他用品：滤纸，标签，消毒酒精棉球，封口用品（2） 试剂：MS基本培养基 2,4-D：生长素类似

2、物 NAA：生长素类似物 6-BA：细胞分裂素类似物 酒精（体积分数70%）：消毒次氯酸钠（体积分数20%）：消毒 无菌水2 .配制类别化合物称取量/mg扩大倍数体积/mL1L培养基的吸收量/mL大量元素储备液NH4NO3KNO3CaCl22H2OMgSO47H2OKH2PO433000380008800740034002020202020100050微量元素储备液KIH3BO3MnSO44H2OZnSO47H2ONaMoO42H2OCuSO45H2OCoCl26H2O166124044601720505520020020020020020020010005铁盐储备液FeSO47H2ONa2E

3、DTA5560746020020010005有机物储备液肌醇烟酸维生素B6维生素B1甘氨酸200001001002040020020020020020010005A. MS基本培养基配方：上述4种储备液+30g蔗糖+8g琼脂+蒸馏水定容至1000mL （pH5.65.8）B. 分别向MS基本培养基中加入植物激素：（pH5.65.8）诱导愈伤组织形成培养基：MS+0.5mg/L 6-BA+0.125 mg/L2,4-D诱导分化芽的培养基：MS+1.0mg/L 6-BA + 0.1 mg/LNAA诱导生根的培养基：MS+0.1 mg/L NAA3.灭菌：灭菌后冷却置于常温下观察3天，检查灭菌是否彻

4、底。4.取材接种：a将萝卜洗净削皮切段，擦手消毒。b在超净工作台上将萝卜用酒精消毒30秒，用无菌水清洗两到三次，用次氯酸钠溶液处理30min，用无菌水清洗两到三次。c用无菌滤纸吸取水分，在培养皿上用无菌刀将萝卜切成1cm厚的横切片，选取有形成层的部位，切取1cm2的小块。d将组织块接种到培养基上，封口。贴上标签，写明材料、日期、编号。e将培养基放在23-26C的恒温箱培养。4天后观察材料污染情况，14天后，观察愈伤组织生长情况。5观察记录：每天观察外植体的生长情况，记录愈伤组织的大小、质地、颜色等情况。6转接，培养：培养一段时间后，将生长良好的愈伤组织转接到分化培养基上，培养一段时间后，胡萝卜的愈伤组织就可以诱导出试管苗。（二）露地栽培1培育壮苗:添加一定数量的生长延缓剂（如矮壮素、PP333）同时打开瓶盖，

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