妇科感染常见病原菌及检测方法ppt课件

1、,妇科感染常见病原菌及检测方法,1,妇科感染常见疾病,阴道病/阴道炎 尿道炎 子宫颈炎 盆腔感染 子宫内膜炎 输卵管卵巢脓肿 输卵管炎症,2,妇科感染实验室检查的意义,很多妇科感染症状、体征有很多相似之处。临床诊断本身既不敏感，也不特异。 实验室诊断可以： 明确病原微生物，使治疗更具针对性； 提高患者治疗依从性； 使患者更有可能遵从性伴侣告知。,3,病例一,患者，女性，24岁，已婚，孕25周。外阴瘙痒一周来就诊。妇检：宫高与妊娠月份相符,外阴潮红、充血，见大量黄色脓性分泌物。 考虑什么病？进一步做什么检查？,4,阴道炎,正常情况下阴道内寄居有大量需氧菌及厌氧菌，形成正常的阴道菌群。 任何原因将

2、阴道菌群生态平衡打破，可形成条件致病菌，引起阴道炎。,阴道粘膜生态系统,5,阴道炎,临床常见有：细菌性阴道病、念珠菌性阴道炎、滴虫性阴道炎。,吴文湘, 廖秦平. 阴道炎的诊治进展J. 中国实用妇科与产科杂志, 2009(12):949-952.,6,阴道炎相关病原实验室检查,7,病例1,患者，女性，24岁，已婚，孕25周。外阴瘙痒一周来就诊。妇检：宫高与妊娠月份相符,外阴潮红、充血，见大量黄色脓性分泌物。,医生： 根据病史及临床表现可初步诊断为阴道炎。取阴道分泌物拭子，嘱病人立即送检，以明确病原学诊断。,8,念珠菌性阴道炎,主要病原菌为： 白色假丝酵母菌 约占80%-90% 光滑假丝酵母菌 热

3、带假丝酵母菌 近平滑假丝酵母菌,约占10%-20%,9,念珠菌性阴道炎的实验室诊断,1. pH 4.5,2. 盐水湿片+10% KOH,3.培养,4. DNA杂交探针,10,盐水湿片和10KOH,检出孢子及假菌丝即可确诊。,11,培养,复发病例或有症状，但盐水/KOH 镜检阴性时考虑培养。,12,DNA 杂交探针,不需要活的微生物 需要特殊转运管 仅针对白色假丝酵母菌 FDA 批准仅用于有症状女性阴道分泌物,13,细菌性阴道病(BV),阴道正常菌群（乳酸杆菌）减少，而其他条件致病菌大量繁殖。 主要致病菌有：阴道加德纳菌、动弯杆菌、普雷沃菌等厌氧菌和支原体等。,Fredricks D N, Fi

4、edler T L, Marrazzo J M. Molecular identification of bacteria associated with bacterial vaginosis.J. New England Journal of Medicine, 2005, 353(353):1899-911.,14,阴道加德纳菌,为革兰阴性或染色不定的球杆菌，有细胞壁，无鞭毛，不形成荚膜和芽孢。 兼性厌氧 最适温度：时35-37 最适PH：6.0-6.5,15,阴道加德纳菌,革兰染色： 大小：0.5m 1.5 - 2.5m 形态：具有多形性，呈小杆状或球状 排列：呈单个或成双排列,16,

5、动弯杆菌,为厌氧菌 革兰阴性弧菌 形态：呈弧形，两端尖细 排列：呈单个或呈双排列,17,细菌性阴道病的实验室诊断,1. pH 4.5,2. 盐水湿片+10% KOH,3.定量革兰染色Nugent评分,4. DNA杂交探针,线索细胞,18,盐水湿片,线索细胞是诊断BV的最敏感特异的指标。,19,胺试验,将一滴阴道分泌物滴于玻片上，再加一滴10KOH，可闻到氨味或鱼腥样气味，即胺试验阳性。,20,定量革兰染色 Nugent评分,定量革兰染色是BV 诊断最特异的检查。,21,定量革兰染色 Nugent评分,乳酸杆菌革兰染色,22,定量革兰染色 Nugent评分,阴道加德纳菌革兰染色,23,定量革兰染

6、色 Nugent评分,动弯杆菌革兰染色,24,定量革兰染色 Nugent评分,线索细胞革兰染色,25,定量革兰染色 Nugent评分,分数解释标准： 0-3 分 正常 4-7 分 中介 7-10 分 细菌性阴道炎,26,定量革兰染色 Nugent评分,乳酸杆菌0分，上皮细胞周围非常清楚。 评分：0分,27,定量革兰染色 Nugent评分,乳酸杆菌0分，少量杂菌，见白细胞和菌丝。 评分：1分 诊断：BV阴性，但诊断为VVC,28,定量革兰染色 Nugent评分,乳酸杆菌2分，加德纳菌/普雷沃菌等 3分，动弯杆菌 1分。 评分：6分 诊断：BV中间型,29,定量革兰染色 Nugent评分,乳酸杆菌

7、3分，加德纳菌/普雷沃菌等 3分，动弯杆菌 4分。 评分：10分 诊断：BV,30,阴道毛滴虫,阴道的致病性厌氧寄生原虫，虫体为 8-45m，呈梨形或椭圆形，无色透明，大小为白细胞的2-3倍。,31,毛滴虫性阴道炎的实验室诊断,1. pH 4.5,2. 盐水湿片,3.快速抗原检查,4. DNA杂交探针,5. 培养,6. 核酸扩增实验,32,盐水湿片,33,革兰染色,34,快速抗原检查,检测阴道毛滴虫特定的抗原 已有商品化试剂 最优试验条件并不需要活的微生物,35,培养,36,核酸扩增试验,APTIMA Trichomonas vaginalis (ATV) test（Gen-Probe, In

8、c. San Diego, CA）是近期FDA 批准的检查，既可用于女性TV 的筛检，也可用于诊断。 可以使用多种标本类型。 一些实验室也可通过比对，验证自己的PCR方法。,37,病例二,患者，女性，40岁，已婚，阴道分泌物增多，伴腰酸，偶有性生活后出血2年。检查外阴正常，宫颈肥大，度糜烂，接触性出血。 考虑什么病？进一步做什么检查？,38,子宫颈炎,子宫颈可因各种致病因素的侵袭而发生炎症，有急性和慢性两种。,39,尿道炎,是指尿道黏膜的炎症 。多为致病菌逆行侵入尿道引起。,40,尿道炎/宫颈炎相关病原实验室检查,41,尿道炎/宫颈炎相关病原实验室检查,42,病例二,患者，女性，40岁，已婚，

9、阴道分泌物增多，伴腰酸，偶有性生活后出血2年。检查外阴正常，宫颈肥大，度糜烂，接触性出血。,医生：根据临床表现初步诊断为宫颈炎。取宫颈内拭子，嘱病人立即送检（注意保温），以明确感染病原体。,43,淋病奈瑟菌,革兰染色 为革兰阴性双球菌，似肾形或咖啡豆状，常成双排列，凹面相对。 急性淋病患者的淋球菌常被吞噬于中性粒细胞内；慢性淋病患者的淋球菌多分布在细胞外。 简便、快速，可做出初步诊断。仅对男性患者进行涂片革兰染色。,44,淋病奈瑟菌,细胞内革兰阴性双球菌 对GC 特异性达95,细胞外革兰阴性双球菌 对GC 特异性达10-29,45,培养,诊断淋病的重要手段 接种到选择培养基，置于36、含5-1

10、0% CO2 ，湿润环境中培养。 如果床边直接接种标本到选择培养基，加CO2 药片形成气体环境，培养敏感性会更好。,46,培养,初代培养生长缓慢，24小时后可形成灰色/湿润、半透明的小菌落（直径0.5-1mm）。 氧化酶阳性、触酶阳性、葡萄糖产酸试验阳性且仅分解利用葡萄糖。,图片by陈东科,47,核酸扩增试验,已有商品化试剂盒。 优点是快速、准确，缺点是试验设备要求高。 淋病奈瑟菌DNA 在感染成功治疗后，在标本中仍可保留3周之久，所以不能作为治疗评估指标。,48,杂交探针,目前FDA 已有批准的GC的杂交试验试剂盒。 不可针对尿标本。,49,病例三,病人，女，24岁，主诉为持续3天的轻度排尿

11、困难，化脓性阴道分泌物，发热，并伴有中度的双侧下腹痛。查体：子宫和附件压痛，化脓性宫颈分泌物。 考虑什么病？进一步做什么检查？,50,盆腔炎,盆腔炎症性疾病是女性上生殖道一系列疾病的总称。 包括： 子宫内膜炎 输卵管卵巢脓肿 输卵管炎症 盆腔腹膜炎,51,盆腔炎致病菌,盆腔炎,外源性病原体,内源性病原体,主要为性传播疾病病原体：淋病奈瑟菌、沙眼衣原体、支原体等,来自于原寄生于阴道的正常菌群，包括：需氧菌和厌氧菌,52,内源性病原体,需氧菌及兼性厌氧菌： 金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠埃希菌、 阴道加德纳菌等 厌氧菌： 脆弱拟杆菌、消化链球菌、普雷沃菌、真杆菌等 感染特点：容易形成盆腔脓肿、感染性

12、血栓静脉炎，脓液有粪臭并有气泡,53,盆腔炎相关病原实验室检查,54,病例三,病人，女，24岁，主诉为持续3天的轻度排尿困难，化脓性阴道分泌物，发热，并伴有中度的双侧下腹痛。查体：子宫和附件压痛，化脓性宫颈分泌物。,医生：根据临床表现初步诊断为急性盆腔炎。进一步送检至少一套血培养，抽取脓肿置于厌氧容器尽快送检，并取宫颈内拭子送检，必要时取子宫内膜活检，以明确感染病原体。,55,盆腔炎相关厌氧菌培养流程,分离培养,挑取菌落,需氧培养,厌氧培养,厌氧培养,生长,不生长,生长,专性厌氧菌：做第二次耐氧试验,形态染色 菌落特征 生化反应 药敏鉴定 气相色谱,厌氧（+）,需氧（-）,兼性厌氧菌,标本,肉

13、眼观察 染色镜检,56,直接涂片染色镜检,在接种时做涂片，革兰染色并镜检： 观察脓细胞的有无及特殊情况，细菌与细胞之间的相关性。 观察有无细菌，微生物的类型和大概的数量以及有无芽孢、形状和位置、着色及菌体特征。 大致推断微生物的种类，如梭菌、放线菌、拟杆菌、消化球菌和消化链球菌等。,57,常见盆腔炎相关厌氧菌形态特征,拟杆菌、普雷沃菌属,产气荚膜梭菌，破伤风梭菌,双歧杆菌属，真杆菌属 乳酸杆菌属，放线菌属,消化链球菌属，消化球菌属,58,常见盆腔炎相关厌氧菌形态特征,革兰阴性杆菌，两端钝圆着色深，中间着色浅不均匀，且有空泡，长短不一拟杆菌,59,常见盆腔炎相关厌氧菌形态特征,革兰阳性粗短两端钝圆杆菌，无芽孢，中性粒细胞也很少且变形破碎，标本来自战伤或肢体严重肿胀者产气荚膜梭菌,60,常见盆腔炎相关厌氧菌形态特征,革兰阳性杆菌，菌体有分枝，呈棒状或栅状排列放线菌,61,革兰阴性厌氧菌鉴定（CLSI M35-A2）,62,