T细胞斑点试验.ppt

1、T-SPOT.TB,杨中平,结核感染T细胞斑点检测,T细胞斑点试验（T-SPOT），又叫作结核感染干扰素释放试验（Interferon Gamma Release Assays，IGRAs,结核的现状,结核病是全球严重的公共卫生问题之一。据WHO统计，全球约有20亿人感染结核分枝杆菌，每年有约200万人死于结核。 我国是世界上22个结核病高负担国家之一，结核感染导致的死亡人数是其他传染性疾病总死亡人数的2倍以上。,基于T淋巴细胞检测结核感染的原理,T-SPOT.TB在诊断结核感染方面具有良好的敏感性和特异性，在现有结核诊断方法存在缺陷的今天， T-SPOT.TB 可以给临床诊断提供参考。 基于

2、结核抗原特异性T细胞向病变部位集中的特点， T-SPOT.TB的检测物已不局限于静脉血，支气管肺泡灌洗液、痰液、胸腹水、脑脊液等也可用于对肺内及肺外结核的诊断。,T-SPOT的意义,1:菌阴，结核病患者的辅助诊断 2：肺外结合的鉴别诊断 3：免疫力低下/受抑制患者的结核诊断/感染筛查 4：儿童结核病的辅助诊断,T-SPOT注意事项,1:肝素抗凝全血，常温保存,不得冷冻或冷藏。 2:采血量：三岁以下2ML，3-9岁4ML，9岁以上6ML，免疫力低下或白细胞低下采6ML（本公司一律两管） 3:样本必须4小时内送达。 4：输血受试者或PET-CT受试者，两周后检测。 5：受试者需阅读知情同意书并填写

3、申请单。,基于T淋巴细胞检测结核感染的原理,结核的传统诊断手段,结核菌素皮试： 低敏感性：免疫力低下人群中其敏感性大大降低。 低特异性：与卡介苗接种和其他环境分枝杆菌有交叉，易造成“假阳性”结果。 细菌学检查：常规培养：2月；快速培养：1周； 阳性率取决于采集标本中细菌数量，不利于早期诊断。 病理学检查：阳性率低，对取材标本有较高要求，有创伤，对肉芽肿性病变需进一步鉴别。,基于T淋巴细胞检测结核感染的原理,结核感染的免疫应答反应以细胞免疫为主，结核感染后体内长期存在抗原特异性的记忆性T细胞 当再次遇到抗原刺激时，能迅速活化增殖，释放r干扰素 r干扰素是结核分枝杆菌感染后机体免疫应答中最重要的细

4、胞因子,基于T淋巴细胞检测结核感染的原理,T-SPOT.TB技术： 利用结核杆菌感染者外周血单个核细胞（PBMC）中存在结核特异性T细胞，这些淋巴细胞在受到结核特异 抗原刺激后分泌r干扰素而设计的T细胞免疫斑点试验。 检测外周血中受结核特异抗原刺激释放r干扰素的T淋巴细胞，经酶联免疫显色后，通过ELISPOT分析系统 对斑点进行计数，1个斑点代表一个细胞，计算出抗原特异性细胞的频率。,基于T淋巴细胞检测结核感染的原理,空白对照孔内斑点数小于10且阳性对照孔内斑点数大于20时视为试验有效 T-SPOT.TB试验结果用每106 PBMCs中斑点形成细胞（SFCs）的数目来描述，即SFCs/106 PBMCs,基于T淋巴细胞检测结核感染的原理,包,基于T淋巴细胞检测结核感染的原理,T-SPOT.TB的临床意义,T-SPOT.TB高灵敏度,提 问,出报告时间：一、三、五检测三个工作日出。 标本类型：肝素抗