液质联用操作规程

1、液质联用仪操作规程第 1 页共 8 页SO - Xe T SSDC1适用范围本设备配备 A QUI UPL液相色谱仪、 T S MS/MS质谱仪，适用于食品、药品中各种有机物得定性、 定量分析，就是一种具有高灵敏度得检测仪器, 仪器由主机、计算机与数据处理软件等组成.2、 职责2、1 操作人员按照本规程操作仪器，认真填写实验使用记录。2、 保管人员负责对仪器进行定期维护与保养。2、3 科室负责人负责监督检查规程得执行。3。操作程序日常操作步骤：准备 UPLC 设置样品表 - 运行样品 定量 打印报告。注 :如果一个星期内不运行样品请不要关质谱仪，使其保持真空。建立新方法与 rje得操作步骤：准

2、备 PLC 建立新得 projec 用标准品调谐 编辑质谱方法 -编辑UPC 方法 -设置样品表 运行样品 定量 -打印报告。3、1 开机：3.11 彻底开机顺序（仪器已关闭)确定 M 及其它仪器电源电缆已连接,开氮气发生器、开氩气，小表电脑界面右下角网络图标红叉。打开 UPLC自动进样器电源，等到电脑界面右下角网络图标出现感叹号！.打开 ULC泵电源 ,等约 30s 或者就是有响声。打开质谱电源，等待 5mn,离子源透视镜里面亮。打开Masslynx 软件， assl x 主界面-左侧inst ue t-Massune-界面菜单栏vc m-pup同样界面左侧偏上diagn t c-acuum

3、-anaye MS t rbosp d%要在分钟内升到0。至少抽真空4 个小时 查瞧真空状态主界面massconsole界面左侧 o tq ms detecto加号展开- mdisplay碰撞室真空度达液质联用仪操作规程第 2 页共 8 页SOP - Xevo-TQS IDC到 7、x 5mbar 。 2 日常开机顺序 (仪器未关闭 )开氮气发生器、开氩气，小表准备样品灌注二元泵灌注自动进样器建立液相方法 平衡液相3.3。1、 准备流动相用 0、22um 得膜过滤缓冲液， 所有得缓冲液与超纯水都要新配制 ,超纯水与缓冲液使用不得超过二天 ,缓冲盐一定要就是可挥发得，而且浓度不要大于 10 M.

4、3.3.2、样品要求所有样品都要用流动相初始梯度比例得溶剂来溶解,并用、 22u得膜过滤。3.3。3 灌注二元泵在 Masslyx 主界面 ,单击 MS nsle，进入 ULC交互显示界面， 点击左栏 A ui y PL Syt m ontr l Stat Up Syst m ,单击 SM，选择需要用到得流动相位置，如 A 与 B，选择 eal wah，时间设为分钟。单击 M, 选择 S rong W s 5 cycles , Smp syringe 20单击 E ilib ate t Method ，将流速设为0 ,单击 Sar 开始灌注、 时间大约为 9i 左右。设定流速，平衡液相在 Ma

5、slnx 主界面，单击 Inet Met d图标 ,打开液相方法编辑窗口，单击 stat s CQ I dditi naSta ,进入液相控制台 ,单击A 或 B 或流速得位置 ,出现流速、比例设定对话框，设定液相流速与比例 ,单击对勾 ,开始平衡液相， 如果后面要做调谐 ,可设定流速 0、2 /min ，有机相与水相得比例为 5： 50。液质联用仪操作规程第 3 页共8页OPI XeoTQSFSDC3、4 准备质谱 4、计算化合物单同位素质量数Massy主界面单击 Tool Molecula eiht Cal laor，输入化合物得分子式（大写注意、Br 等正确得输入方法 ) ，注意选单同位

6、素Monois ，Ion Mod ：离子化模式， ve正离子 ,-ve 负离子,单击 Calcul te。34。2 用 Itel ita t 进行自动调谐在 asslnx 主界面单击 MS Tu e 图标，打开调谐窗口 ,单击 on Mod ES+ 或 E ，单击API as 图标打开氮气 , 单击 打开高压选择 SMo e 图标 ，设定液相流速 0、2l/min ，水：乙腈得比例为： 0.把标准品调谐液放入质谱仪塑料瓶位置处得A（或或）号位（注 :浓度在 20p左右 )单击 F i c,选择 Reservoi为, lowStat为 LC模式，点击 P rg 图标。Purge 结束后，将 Fl

7、owState 改为 ine模式 ,设定 Funtio 为 MS1 scan，M ss 为计算出化合物得质量数, an为 5，点击进样,开始进样 ,直到离子得响应比较稳定 .保存调谐文件 :F le SavAs 至已建得项目下。在 asslnx 主界面，选择 Ms Console Xev Q 选择 In e listart ,选择 ampleTune nd DeveloD ectorMe hod ，ES+单击 Sta t 图标 ,出现 Intelli tar 自动调谐编辑窗口，选择witcho Ad nedmode ，输入 oud nme(化合物名称 ),oleular M s/Formul

8、（分子量或分子式）dduct A（ M +， 选择 Load Exisin Smple Tu e，在 S le Tne Na e方框后得“。”处调用开始保存得调谐文件,在 Develp M M etho 前得方框打钩，并在方框出输入 RM 方法得文件名 ,路径为已建得项目下。在 Prin eport 前方框打钩 ,Cone Voltag ，Colli ion En g 处为默认值， Fluidics 下得 lwPath 选择 bne 模式， mple eervir 与 Smple F Rat 参数与 Fudics 下 bined 模式下得进样参数保持一致。单击右边得 Start 开始自动调谐。

9、调谐成功，会有绿勾出现 ，查瞧 intel ista t 报告液质联用仪操作规程第 4 页共8页SOPIeo QSF DC3.4.查瞧 int list rt中自动生成得质谱方法：从 MassLynx 主窗口 ,单击 M Method ，出现 MS Me hd 编辑对话框 ，选择 File pen， 选择 Ite listat 中保存得质谱方法得文件，双击方法 ,如发现自动调谐生产得质谱方法中部分参数有误， 则可以在 han ls 窗口手动修改参数，填写 relenti on wi o 中得 en时间 ，此时间必须与液相色谱方法运行时间保持一致 ,选择 Au wel，单击 OK，点击 Fi e

10、 Save As， 保存质谱方法文件。3、建立液相方法 .。 1 编辑液相方法在液相方法编辑窗口，单击 nle 梯度洗脱程序中最后阶段时间必须与t ,输入溶剂名称，run ern time 及梯度洗脱程序符合，单击 K， 选择 File,Sves保存方法，单击LoaMeth ，平衡液相。3。5.2建立样品列表在 Massl x主窗口，选择Fil Nw 建立一个空白得表sm lelit 。输入文件名,样品信息，双击MSFile ,选择质谱方法，双击 Inl t ile, 选择液相方法，在 Bo tle中输入样品瓶得位置，在 Iject Volu e 中输入进样体积 ,可右键Add, 增加样品表得

11、行数，保存样品表:File Sae As .3、6 数据采集与处理3。6.1、选中要采集得样品， 单击 Ru Star,选择 cquireS mpleDat only，单击 K 开始进样并采集 。3.6.在采集过程中，可查瞧色谱图,点击 hro t grm 窗口 ,点击 Real-time pdae con 、如果不能见整个 TIC图 ,单击 Default Rnge图标 .如果方法中包括多个通道,可通过 D pl ss 查瞧如果方法中包括多个检测器或多个Functi，可通过 Diplay IC 查瞧3.63 处理多个 Function 得数据如果质谱方法中有多个Function，如有三个 F

12、unct o，如想瞧第二个Functon,MS Scan 得数据 .液质联用仪操作规程第 5 页共 8页SOPI- Xevo TQSSI 3.6.3、1 在色谱图窗口 ,点击 isplay TIC，选中 MS Sa,选择Ad tra e ,单击 OK。3. .3、2 如想查第二个 uncion， Dau t r San 质谱图 ，在色谱图中，选择 splay I, 选择 ScanWaveDS Add trace ,单击 。3.6、3、 选择 Pro e s bn spectra、 分别用右键输入信号与本底噪音、 单击 OK、 得到 au ter Sca得质谱图 ,单击 Proess ooth

13、,单击 K。3、7数据处理外标定量法3。 .在 Maslnx 主页面单击 Targetlynx/Edit m hd，出现定量方法编辑对话框 ,单击新建方法图标，新建一个定量方法.3.。 2 单击 Addnew pund (添加新得化合物）图标，添加一个新得化合物。37。3 单击菜单栏 ud e，选中 at taio on 与 pounNa（前面打勾 )在 Massln 主页面，打开中等偏下低浓度标准品得色谱图，Displa/Ma chroma o ram 选出要定量得化合物得离子对，一般强度高得化合物用来做为定量离子，另一个离子对则作为确证离子，用鼠标右键在定量离子对色谱图上拉一下 ,则p n

14、dame,Acquisition Functio umbr,Quatif ctio Tr ce，Pred edReenti n Tie 与Retentionw ndo 将自动输入到定量方法中。 注意：在色谱图上拉得时候,要遵循两个原则 ,拉得位置要以色谱峰得峰尖左右对称，拉得宽度要超过峰得起点与终点。3.74 单击工作曲线图标 ,在工作曲线设置页面，填入 oncent a in nits:浓度单位 ,例如 / l， ug/ g，pp, ppm 等。Concentat of Stada： Levl 选择 Conc、A。Poynomia Typ 选择 Linear、 （可根据自己行业得规定）Cal

15、ibat o Origin_选择 excude(排除原点），nlud(包含原点），fo e（强制过原点）W it ting uncon（权重 )_ （根据自己行业规定） rpagate aira on Para et s如果所有得化合物均用相同得工作曲线得参数 ,选 Ye液质联用仪操作规程第 6 页共8页SOPIXevoQSFS 7.5 打开积分参数列表,选中A exr ck Enabled（打勾， YES),negr tioWindow Extnt输入2，选中 ro gtentgratin Parameer（打勾 ),如果色谱峰并不就是很对称得色谱图，可先在色谱图上先设定参数，积分，好积分参

16、数满意之后,proess ntgrate/copy ，在 Tar etlynx 方法中 Ei/Past 就可将其粘贴到 Targetynx 方法中。建议用 Apex Trck 积分方法， Smot 方法建议用 s o thiteratio 1，sm o h width 2 。重复上面得过程，把其她几个化合物得信息全部加入，保存方法： As， 保存到当前项目得 ethDB 文件夹中，正确得 sa ple i表格模板 ,除了前面进样时得选项之外， 还要有 sa e typ, ConA， 等选中要处理得样品，单击 ocss apls，出现下图得对话框 ,确保选中， ntegrate 、 samle

17、，ca i e tadar, Quati y Sam ,选择刚才编辑得 argtlynx 方法 ,单击 OK后 ,出现定量结果对话框 .可根据自己得需要 ,用鼠标右键 ,Chang Colun Order 来增加或减少 Su mary 中得选项。、关机程序3.8.日常关机：3. .、 1 如果流动相中有缓冲盐必须先将缓冲盐换成水，灌注2 分钟 ,流速设为、 2m/ in，8水相，冲洗至少30 分钟，换成 80有机相，冲洗至少20分钟 ,停流速 ,水相，冲洗至少 30 分钟，换成 0%有机相，冲洗至少 20 分钟，停流速 ,柱温为室温 .3.8。、 关质谱：主界面 mass ue 或者电脑下面仪

18、器图标 -界面左侧偏上 lui cs- o stae 选择为 wste、关氩气 ,mass tune 界面或者电脑下面仪器图标工具栏第 6 个 关高压 mas tune 界面右下角 等待去溶剂气温度降低至 100 度以下 mass t ne 界面或者电脑下面仪器图标左侧偏上。S+s urc -tm raure-deolvaton 关氮气 ，点击氮气发生器开启开关。3.8。彻底关机。 8.2、1先完成日常关机液质联用仪操作规程第页共 页SO I ev TQ FI3。8.2、2 泄真空： tune pa vacuum vent-es 等待涡轮分子泵转速降到 10 以下 ，masslnx 主界面 -

19、左侧 instrumen -Mass ue-界面左侧偏上 dianostcs-acuum-sorce t bo spe 8。、 3 退出软件，其她界面先退出，主界面最后退出。8.、4 关质谱电源关所有 U C 电源，计算机电源，仪器三个电源顺序无所谓，关氮气发生器，氩气.3. .2、 如果有 UPS，关闭 UPS电源，计算机电源. 日常维护、保养及注意事项4、仪器室要保持整洁、干净、无尘; 配套设施布局合理。、 2仪器室温度应相对稳定，一般应控制在2-25 , 保持恒温 ; 相对湿度最好为 50-70 , 室内应备有温度计与湿度计, 一般采用空调与吸湿机调节温度与湿度。4、3 气压过滤机械泵油

20、，停止样品采集、停止流动相、关闭高压、关闭所有气流 , 关闭离子源内得真空隔离阀。 用一字镙丝刀顺时针方向拧开机械泵上得Gas alla t阀四分之一圈，运行30分钟后再把 Gas Ballast阀旋转到原来关闭得位置。对于 ESI 源, 至少每星期做一次 , 对于 APC源，每天做一次。4、4开高压之前一定要先开氮气, 关氮气之前一定要先关高压.4、5ESI离子化与溶剂密切相关 , 在使用某些溶剂与添加物需要注意以下几个方面：三氟乙酸 (TF ) 多用于蛋白质与多肽分析，但对 SI 离子化有抑制效应 ; 三乙胺 (T A）在 m/ 102 处有较强得 +H+峰 , 有可能会抑制某些碱性化合物在正离子ES条件下得离子化, 也有可能会增强某些碱性化合物在负离子EI条件下得