《高三生物复习资料》二轮复习（选修1）.ppt

1、a,1,选修1 生物技术实践,a,2,细菌培养基 LB（Luria-Bertani)液体培养基,一、 培养基,LB固体培养基需加琼脂1克,a,3,1、培养基的配制原则,(1)目的要明确 根据种类、目的配制 (2)营养要协调 (3)pH要适宜 如细菌：pH6.57.5 真菌(如霉菌)：pH5.06.0,a,4,2、细菌培养基的制备：,培养基的配制,灭菌,搁置斜面,称量,溶化,调pH,分装,加棉塞,包扎,a,5,什么叫灭菌？什么叫消毒？为什么要灭菌？,若混有杂菌，将与菌种形成竞争关系，影响菌种的生长或不能分离到所需的微生物。,灭菌是指用物理或化学方法，杀死一定环境中所有微生物的细胞、芽孢和孢子的方

2、法。,二、 灭菌操作,消毒是指用物理或化学方法，杀死病原菌的方法。,在培养微生物时必须进行无菌操作,a,6,无菌操作的要求: (1)各种器皿必须是无菌的 (2)各种培养基必须是无菌 (3)转移操作及其它环境也应是无菌的,a,7,灭菌的方法,(1)干热灭菌(火焰灼烧) (2)高压蒸汽灭菌(在 1kg/cm2压力的高压蒸气锅中(121)灭菌15min。) (3)过滤灭菌法（G6玻璃砂漏斗） (4)紫外光灭菌法 (5)化学药剂灭菌法（如70%75%酒精等）,a,8,实验操作前，实验用具放在超净台上，以紫外灯和过滤风灭菌30min。,如果培养基中有葡萄糖，为防止葡萄糖分解碳化，可在90以上(500g/

3、cm2压力)的高压蒸气锅中灭菌30min。 有些不能加热灭菌的化合物，如尿素，可用G6玻璃砂漏斗过滤灭菌。,灭菌或消毒对象 接种环等金属或某些玻璃用具 手 培养基 试管、培养皿、三角瓶等 超净台,灭菌或消毒方法 火焰灼烧 70%75%酒精 高压蒸汽灭菌 高压蒸汽灭菌 紫外光和过滤风,a,9,三、 细菌的分离,1、划线分离法,方法：用烧红后冷却的接种环蘸取 带菌的培养物，在固体培养基的 平板上划线。,分离划线法,连续划线法,a,10,2、涂布分离法,方法：将培养的菌液稀释，通常 稀释10-510-7倍。取0.1mL稀释度 不同的菌液，加在培养皿的固体 培养基上，用玻璃刮刀涂布在 培养基的平面上，

4、然后进行培养。 在某个稀释度下，可培养得到 相互分开的菌落，通常以每个培养皿中有20个以内的单菌落最为合适。,划线分离法：方法简单。 涂布分离法：单菌落更易分开，但操作复杂些。,单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。,a,11,实验1 大肠杆菌的培养和分离,一、实验内容 1、用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌。 2、在固体平面培养基上划线进行分离。,a,12,大肠杆菌和革兰氏染色,大肠杆菌：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。,a,13,二、设备及用品 灭菌锅、三角瓶、封口膜和橡皮圈（或棉塞）、培养皿、接种环和玻璃三角刮刀、恒温培养箱、摇床、酒精灯和超净台、

5、一次性手套、酒精棉球、镊子、有棉塞的试管等。,a,14,三、实验材料 1、LB培养基（液体和固体） 2、大肠杆菌菌种斜面 3、空白斜面,a,15,将装有LB液体和固体培养基的三角瓶，加上封口膜（或棉塞）。将培养皿用牛皮纸包好，一起放入高压灭菌锅内，1kg/cm2压力（121），灭菌15min,四、实验步骤,1、为什么用棉塞而不用橡皮塞？,棉塞（封口膜）能防止杂菌污染， 又保证通气良好。,a,16,2、高压蒸汽灭菌以前，为什么要将灭菌锅内的冷空气排尽？,3、灭菌完毕后，如果压力未降至零，就打开气阀，会出现什么现象？为什么？,如果灭菌锅内的冷空气没有排尽，当压力上升至98kPa（1kg/cm2压力

6、）时，锅内的温度就不会上升到应有的高度（121），导致灭菌不彻底。,如果压力未降到零就打开气阀，试管内的培养基就会冲出管口。这是因为高压蒸气灭菌锅内外压力不平衡的缘故。,a,17,4、固体培养基冷却至60左右才能用来倒平板。用什么方法来估计培养基的温度？,用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉有些热又不烫手时。,5、为什么需使锥形瓶瓶口通过火焰？,通过烧灼灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。,将三角瓶内的固体培养基倒入培养皿中，使之置于水平位置，并轻轻晃动，使培养基铺满底部，凝固后即可形成平面。,a,18,6、接种操作为什么要在火焰旁进行？,空气中存在有大量的微生物，而接种灯的火焰旁能形成一个无菌的区

7、域，在这里操作，可以避免杂菌的污染。,在酒精灯火焰旁，用灭菌的接种环将菌种接种到三角瓶内的液体培养基中，37摇床振荡培养12h。,7、如何使接种环冷却后再挑取 菌体？为什么要冷却？,让环先接触培养基上未长菌的部位， 使环冷却。,以免接种环温度太高,杀死菌种。,a,19,在酒精灯火焰旁，用灭菌的接种环蘸菌液一次，在固体培养基的平板上连续划线，将培养皿倒置，37恒温培养箱中培养24h。,8、为什么在操作的第一步要灼烧接种环？,为了避免接种环上可能存在的微生物造成污染。,a,20,9、若用分离划线的方法，为什么每次划线前都要灼烧接种环？,及时杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者。,1

8、0、为什么在划线操作结束时仍需灼烧接种环？,为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使一次划线时，接种环上的菌种直接来自上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目减少，以便得到单菌落。,a,21,11、进行恒温培养时为什么要将培养皿倒置?,恒温培养时，培养基中的水分会以水蒸汽的形式蒸发，倒放培养皿则会使水蒸汽所凝结的水滴留在盖上；如果正放培养皿，则水分形成的水滴会落入培养基表面并且扩散开。则菌落中的菌会随水扩散，菌落间相互影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的。,a,22,12、接种斜面画线时要注意什么？,(1)由里向外画，(2)线条要细且密； (3)不要重复划线，(

9、4)不要画破培养基， 不要接触到管壁或管口。,13、在什么条件下培养细菌？,恒温箱中，在37 下培养24小时。,在酒精灯火焰旁，将单菌落用灭菌的接种环取出，用划线法接种在斜面上，37恒温培养箱中培养24h后,置于4 冰箱中保存。,a,23,14、如何操作才可以尽量避免被杂菌污染?,(1)胆大心细，操作快捷。 (2)注意灭菌原则，灭菌彻底，降低环境污染几率，手和实验服要清洁，减少操作时间。 (3)注意微生物生长条件，如pH、渗透压、温度等。,a,24,15、培养后如何判断是否有杂菌污染?,(1)从菌落形态看： 细菌菌落：表面一般光滑而湿润，有黏稠性，多数透明或半透明。 放线菌菌落：表面是紧密的绒

10、状、坚实多皱，长孢子后就成粉末状，常有不同颜色，菌丝可深入到培养基内。 霉菌菌落：为绒毛状，孢子有各种颜色。 (2)用显微镜镜检，观察其形态、大小，看是否有菌丝、孢子等。,a,25,16、实验完成后，接触过细菌的器皿应如何处理?,所有接触过细菌的器皿都必须先高压灭菌后再洗涤，特别是培养基。使用后的废弃物也要高压灭菌后再抛弃。,17、如果分离的是转基因工程的工程菌，如何保证没有被普通的大肠杆菌污染?,因转基因用的质粒通常是经过改造的质粒，具有某种抗性基因。可用含某种相应抗生素的培养基培养。,a,26,实验4 果汁中的果胶和果胶酶,a,27,1、果胶,一、果胶和果胶酶的基础知识,果胶是植物细胞壁以

11、及胞间层的主要组成成分之一，起着将植物细胞粘合在一起的作用。它是由半乳糖醛酸聚合而成的一种高分子化合物(含半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯)，不溶于乙醇。会减少水果组织的分散性，故在果汁加工中，果胶不仅会影响出汁率，还会使果汁浑浊。,a,28,果胶酶并不特指某一种酶，而是分解果胶的一类酶的总称，通常包括果胶酸酶（多聚半乳糖醛酸酶）、原果胶酶和果胶甲酯水解酶等。,2、果胶酶,去掉果胶，植物组织变得松散，利于榨取果汁。,作用：果胶酶分解果胶，瓦解细胞壁和胞间层，使榨取果汁变得更容易，提高水果的出汁率。果胶分解成可溶性的半乳糖醛酸，也使浑浊的果汁变得澄清。,来源：有些微生物如黑曲霉、苹果青霉等都可用于生产

12、果胶酶。,a,29,二、实验内容 1、探究利用苹果匀浆制作果汁的最佳条件。 2、检测果胶酶的活性。 3、了解果胶酶对果汁形成的作用和收集果胶酶的应用材料。,a,30,三、设备及用品 匀浆机、小刀、烧杯、水浴锅或酒精灯、试管、移液管、量筒等。,四、实验材料 1、山楂或苹果 2、黑曲霉提取液或2%果胶酶溶液 3、95%的乙醇,a,31,五、实验步骤,1、将苹果洗净、切开，去皮、籽、柄，切成小块，将切成小块的苹果放入匀浆机中，榨取苹果汁 2、将榨取的苹果汁倒出，用双层纱布过滤后装入烧杯中备用。,a,32,+,4ml 苹果汁,+,45 保温15分钟,1,2,1ml 果胶酶,+,+,3,4,+,沸水浴,

13、4ml 苹果汁,+,45 保温15分钟,1ml 果胶酶,4ml 苹果汁,+,45 保温15分钟,1ml 蒸馏水,沸水浴,4ml 苹果汁,+,45 保温15分钟,1ml 蒸馏水,1 2 3 4,a,33,+,2ml 乙醇,+,静置 10分钟,1,2,1ml 1号管 上清液,+,+,3,4,+,1 2 3 4,2ml 乙醇,+,静置 10分钟,1ml 2号管 上清液,2ml 乙醇,+,静置 10分钟,1ml 3号管 上清液,2ml 乙醇,+,静置 10分钟,1ml 4号管 上清液,1 2 3 4,a,34,分层十分明显，沉淀浓缩成一小团，果汁澄清度(+ + + +),分层十分明显，不如1号试管澄清

14、度(+ + +),液体浑浊，比4号稍澄清度(+ +)。,液体浑浊，澄清度(+),果汁被稀释 沉淀物(+),果汁被稀释 沉淀物(+ +),产生絮状沉淀 沉淀物( + + +),产生大量絮状沉淀 沉淀物(+ + + +),1 2 3 4,1 2 3 4,六、实验结果,另 取 试 管 做,a,35,七、实验原理,1、果胶酶能使果胶完全水解成半乳糖醛酸，增加固形物的分散度，降低水果匀浆的黏度，使果汁澄清。,2、果胶不溶于乙醇，加乙醇能使果胶析出。,a,36,1.影响果胶酶降解果胶的因素,温度, pH值,酶作用时间,酶的用量,酶抑制剂等等,八、问题讨论,a,37,2.设计实验，探究果汁制作中果胶酶催化的

15、最适温度。,3.设计实验，探究果汁制作中果胶酶催化的最适pH。,用滤出的苹果汁的体积大小或 果汁的澄清度来判断果胶酶活性的高低。,自变量、因变量、无关变量分别是什么？ 如何控制自变量和无关变量？,观察指标是什么？,混合苹果泥和果胶酶之前，要将果泥和果胶酶分装在不同的试管中恒温处理。,a,38,4.设计实验，探究果汁制作中果胶酶的最佳用量。,自变量、因变量、无关变量分别是什么？如何控制自变量和无关变量？,观察指标是什么？,a,39,5.果胶酶还可能有什么作用？,果胶酶除用于制备果汁外，还用于果酒澄清，还可作为洗衣粉的添加剂（除去衣服上的果汁、果酱等）。,6.果胶酶水解果胶的最终产物是什么？要使果

16、汁澄清，应该使用果胶酶和果胶甲酯酶中的哪一种？还是同时使用？为什么？,这样才能使果胶完全水解成半乳糖醛酸，增加固形物的分散度，降低水果匀浆的黏度，有利于过滤掉不溶物，使果汁澄清。,应同时使用。,果胶酶水解果胶的最终产物是半乳糖醛酸。,a,40,实验5 加酶洗衣粉的使用条件和效果,a,41,表面活性剂有离子型和非离子型两种类型。离子型又可分为阳离子型和阴离子型。,一、基础知识,一般的家用洗衣粉和其他各种家用洗涤剂的成分基本相同，主要含有表面活性剂、水软化剂、碱剂、漂白剂和香精等成分。,洗衣粉中主要含阴离子表面活性剂如 十二烷基硫酸钠，有的也加入非离子型表面活性剂如脂肪醇聚氧乙烯醚。,表面活性剂种

17、类,a,42,表面活性剂能优先吸附在各种界面上,起到降低表面张力、改变体系界面状态的作用。,表面活性剂中含有疏水基团和亲水基团，在洗涤过程中有乳化作用和通透作用，使衣服中的脂肪类物质进入水中。,表面活性剂作用,a,43,加酶洗衣粉就是在普通洗衣粉中，加入0.20.5的酶制剂制成的。在洗衣粉中添加的酶的种类很多，如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和纤维素酶等。其中蛋白酶多用枯草杆菌碱性蛋白酶。,加酶洗衣粉添加的酶,a,44,二、实验内容 1、探究加酶洗衣粉与普通洗衣粉洗涤效果的区别。 2、用加酶洗衣粉洗涤沾有鸡血的棉织品，观察不同温度下的洗涤效果。,三、设备及用品 三角瓶、镊子、水浴锅、沾有鸡血的棉布等。

18、,四、实验材料 加酶洗衣粉和不加酶洗衣粉,a,45,+,100ml 水,+,40水浴保温,1,2,0.5g加酶洗衣粉,3,摇匀,沾有鸡血的棉布,搅拌 或摇动,+,观 察 洗 涤 效 果,+,100ml 水,+,100ml 水,+,40水浴保温,摇匀,沾有鸡血的棉布,搅拌 或摇动,+,+,40水浴保温,摇匀,沾有鸡血的棉布,搅拌 或摇动,+,0.5g普通洗衣粉,不加洗衣粉,五、实验步骤,比较污物的残留状况，如：已消失、颜色变浅、面积缩小等。,判断洗涤效果好与差的指标是什么？,a,46,六、实验原理,衣服上的污渍，一般有血、汗、油、色素和食物的汁液等，它们无非是淀粉、蛋白质、脂质等物质。这些物质可

19、用淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶水解成为水溶性小分子物质。因此，加酶洗衣粉除了具有表面活性剂的作用外，还有各种水解作用，更有利于去除污渍。,a,47,1.设计实验，探究加酶洗衣粉在什么温度下洗涤效果最好？,自变量、因变量、无关变量分别是什么？ 如何控制自变量和无关变量？,观察指标是什么？,2.设计实验，探究不同种类的加酶洗衣粉洗涤效果的差别？,七、问题讨论,a,48,+,100ml 水,+,40水浴保温,1,2,0.5g加酶洗衣粉,3,摇匀,沾有鸡血的棉布,搅拌 或摇动,+,观 察 洗 涤 效 果,+,100ml 水,+,100ml 水,+,40水浴保温,摇匀,沾有鸡血的棉布,搅拌 或摇动,+,+,4

20、0水浴保温,摇匀,沾有鸡血的棉布,搅拌 或摇动,+,0.5g普通洗衣粉,不加洗衣粉,a,49,3.丝绸和毛织品能否用加酶洗衣粉洗涤？为什么？,加酶洗衣粉中，多数都加了蛋白酶，丝绸和毛织品都是由蛋白质纤维组成的织物，酶能切断纤维蛋白。因此，不能使用。,4.脂肪酶对沾有矿物油的棉布是否起作用？,脂肪酶水解的是酯键，只有对羟基和羧基形成的酯键起作用。但矿物油多为饱和链烃，没有酯键，不能将其水解。因此，不起作用。,a,50,实验6 -淀粉酶的固定化 及淀粉水解作用的检测,a,51,一、基础知识,固定化酶：是将酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。,优点：固定化酶固定

21、在一定的空间范围内，可以重复使用，且能及时与产物分离。,a,52,酶固定化的常用方法,1. 吸附法 (1)物理吸附法 (2)离子交换法,4. 包埋法 将酶蛋白包埋在凝胶交联后的“格子”中。,3. 交联法 酶蛋白的氨基以戊二醛与载体相连。,a,53,1. 吸附法 (1)物理吸附法：将酶蛋白分子吸附在惰性载体上。惰性载体指对蛋白质有高度吸附能力的活性炭、石英砂等。 (2)离子交换法：酶蛋白带有电荷的基团与离子交换剂形成离子键。,2. 共价偶联法 酶蛋白的一些基团与载体共价结合。,a,54,二、实验内容 1、用吸附法将-淀粉酶固定在石英砂上。,三、设备及用品 塑料注射器、烧杯、滴管、自行车用气门心和

22、夹子、注射器架、试管或微量离心管等。,四、实验材料 1、 -淀粉酶，石英砂， 2、可溶性淀粉溶液 3、5mmol/LKI-I2溶液,a,55,五、实验原理,一定浓度的淀粉溶液经过固定酶柱后，可使淀粉水解成糊精。用淀粉指示剂溶液测试，流出物呈红色，表明水解产物糊精生成。,淀粉,糊精,麦芽糖,葡萄糖,遇碘显蓝色,遇碘显红色,遇碘不显色,-淀粉酶,-淀粉酶,糖化淀粉酶,a,56,六、实验步骤,5mg -淀粉酶+4mL蒸馏水+5g石英砂（搅拌30min）,装入下端接有气门心并用夹子封住的注射器中,10倍体积蒸馏水洗涤注射器以除去未吸附的淀粉酶，流速1mL/min,用滴管滴加淀粉溶液，以0.3mL/mi

23、n流速过柱,流出5mL溶液后接收0.5mL流出液，加12滴KI-I2溶液，观察颜色,10倍体积蒸馏水洗涤注射器4保存,为什么要控制流速？,a,57,1 2 3 4,1、2mL水+12滴KI-I2溶液 、2mL淀粉液+12滴KI-I2溶液 、2mL淀粉滤液+12滴KI-I2溶液 、2mL淀粉滤液+12滴KI-I2溶液+稀释1倍,七、实验结果,a,58,1.冰箱保存后的固定化酶柱，重复实验，是否有相同结果？,2.如何证明洗涤固定化酶柱的流出液中没有淀粉酶？,八、问题讨论,a,59,实验8 果酒及果醋的制作,a,60,一、酵母菌的基础知识,形态结构 单细胞真菌，属真核生物，呈圆形、椭圆形等。 繁殖方

24、式 酵母菌的繁殖方式有出芽生殖、分裂生殖和孢子生殖，常进行出芽生殖。 分布 自然界中，酵母菌分布广泛，多分布在含糖较高的偏酸环境中，如水果、花、树皮等。一年四季，土壤始终是酵母菌的大本营。,第一节、果酒的制作,a,61,需氧呼吸的反应式： 厌氧呼吸的反应式：,C6H12O6+6O2+6H2O 6CO2+12H2O+能量,C6H12O6 2C2H5OH+2 CO2+能量,酶,当乙醇浓度超过16时，酵母菌死亡。,代谢类型 异养，兼性厌氧,繁殖的最适温度：20； 酒精发酵的温度范围：1825。,影响酒精发酵的主要环境条件,酶,温度、氧气和pH,a,62,三、设备及用品 510L的大瓶、适合于瓶口的软

25、木塞或橡胶塞或压紧的一大团棉花、有弯曲的安全玻璃管、过滤器 、纱布 、多功能榨汁机或研钵及杵 、若干带瓶盖的小口瓶等,四、实验材料(葡萄酒的制作） 1、紫葡萄 2、新鲜酵母或干酵母,a,63,四、实验步骤,1、高锰酸钾溶液中浸泡5 min 的作用？,应该先冲洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗时引起葡萄破损，增加被杂菌污染的机会。,葡萄洗净高锰酸钾溶液中浸泡5 min冲洗后榨成浆状,2、你认为应该先冲洗葡萄还是先除去枝梗？为什么？,a,64,适量干酵母(每2.5kg葡萄约1g干酵母)加少量温水(小于40)在烧杯内调成糊状。为使其迅速发生作用，可加极少量蔗糖，混匀，放置片刻，出现气泡即可。,a,6

26、5,葡萄浆放入发酵瓶中，装量不超过2/3，然后加入酵母悬液，搅拌均匀。加上一个软木塞，塞内插入弯曲玻璃管。,3.为什么发酵瓶中的液体不能装满?,发酵过程中有气体产生，留有空间可暂时储气，起缓冲作用；否则液体装满后气体会使液体外溢，损失发酵液，且瓶口等处由于有发酵液易引起杂菌污染。,4.装水的弯曲玻璃管起什么作用?,既可防止氧气进入，又可排出二氧化碳，同时还能防止杂菌污染。,a,66,5.发酵完毕的标志是什么?,6.适宜温度是多少？高于30，为什么需要降温？,发酵瓶放在2530条件下23天，当停止出现气泡，表示发酵完毕。若温度偏低，则时间相对延长。若温度高于30，需要降温，否则酒的风味不佳。,a

27、,67,用两层纱布滤去葡萄皮和籽，将获得的滤液分装到12L的细口瓶中，加盖密封，静置。待沉淀后，上清夜即为葡萄酒。（可保存12年）,在发酵的过程中，随着酒精度的提高，红葡萄皮的色素也进入发酵液，使葡萄酒呈红色,7、葡萄酒呈红色的原因？,a,68,七、实验原理,C6H12O6 2C2H5OH+2 CO2+能量,酶,酵母菌在无氧条件下进行酒精发酵，将葡萄糖氧化成酒精,a,69,八、问题讨论,1.葡萄或其他果实上常有天然的野生酵母存在,为什么上述实验还要接种酵母?,为了加速反应，使观察更直观，需要较多数量的酵母菌；同时，加酵母后使酵母的酒精发酵占有优势，避免许多霉菌生长，出现异味。,2.制酒时必须保

28、证所有用具都是清洁的，为什么?,各种水果对微生物来说都是良好的培养基，特别是霉菌。如果用具不洁净，就可能有许多杂菌进入果汁，那制作的就不是果酒，而是杂菌培养液。,a,70,3、你认为应该从哪些方面防止发酵液被污染？,对发酵瓶、纱布、榨汁机、盛葡萄汁的器皿等实验用具进行清洗并消毒。先用温水反复冲洗几次,再用浓度为75%的酒精擦拭消毒，晾干待用。如果要快速可以使用吹风机吹干。,a,71,用果汁制作果酒,用葡萄制作的葡萄酒含糖较低，酒精含量也低（平均体积分数为8%）。 用果汁制作的果酒含糖量高，酒精含量也较高（可达）15%。,设备及用品,同“用葡萄制作葡萄酒”,材料,1.苹果（最好）、梨、柑橘或其他

29、水果 2.新鲜酵母或干酵母,a,72,实验步骤,1.为什么要加蔗糖?,向发酵瓶中先加一定量蔗糖，再倒入果汁，最后倒入酵母悬液，混匀，加盖。,2、发酵开始时，酵母菌的需氧呼吸会使发酵瓶内出现负压，为什么?,为了加速反应，使观察更直观，需要更多的底物参加反应。,a,73,3天后气泡冒出，10天后剧烈的发酵停止，取出过滤分装。 若3天后还没有气泡冒出，必须加入更多酵母，使发酵尽快发生。 静置56个月，酵母下沉，上清液即为果酒。可用虹吸法取出。,a,74,一、醋化醋杆菌的基础知识,形态结构 单细胞原核生物，椭圆、杆状等。 繁殖方式 分裂生殖,第二节、果醋的制作,代谢类型 异养需氧型,C2H5OH+O2

30、 CH3COOH+H2O,最适生长温度： 30 35。最适pH值为3.56.5。,在有氧条件下，能将乙醇氧化成醋酸,醋杆菌,醋酸含量可高达13。,a,75,二、设备及用品,5L的下口瓶2个 、500L锥形瓶1个、 直角玻璃管(长短不同)3根、 直玻璃管4根、单孔橡胶塞2个、 双孔橡胶塞1个、胶管约1m 、 锯末适量(足以装满1.5L的下口瓶 、 脱脂棉少量 、铝箔少量、水族箱 通气泵1、铁架及铁夹几副,三、材料,1.果酒 2.醋酸杆菌,a,76,四、步骤,1.装置连接,如图，甲内装入800mL酒-水混合物，铝箔盖住上口。乙瓶为发酵瓶，内填锯末至八分满；下口各插入一直角玻璃管(发酵液出口)和另一

31、直角玻璃管(内塞脱脂棉,用以过滤空气,另一端升至锯末之上),a,77,(2)将水族箱通气泵的出气管与乙瓶上塞棉花的玻璃管相连，通气。,2.醋酸发酵,(1)适量醋化醋杆菌的培养物或醋曲悬液加入200mL酒-水混合物中混匀，pH调至7.0后倒入乙瓶，使锯末均匀湿透。,2.为什么要向发酵瓶中通入空气?,3.为什么空气要用棉花过滤?,醋酸发酵为需氧发酵,可防止微生物进入,1.锯末的作用是什么?,使醋化醋杆菌附着在锯末上,a,78,(3)发酵48h，检测pH，若明显酸性，则进入下一步。,(4)调节甲到乙的流量为每5分钟1滴。乙到丙也同样速度。,2.醋酸发酵,(5)每天检测pH，等到流出液pH不再减少，或

32、甲瓶液体全部流入乙瓶时，停止实验。,a,79,2.醋瓶子、未喝干的啤酒瓶子放置久了，在醋和啤酒表面形成一层“白膜”。它是怎样形成的？,醋酸菌大量繁殖形成的。,1.影响醋酸发酵的环境因素有哪些？,3.你所得到的丙瓶中的液体是否就是市售的白醋,为什么?,不是，市售白醋除含有醋酸外还有丰富的不挥发性酸、糖、酯、醇等物质，这些多为酵母所产生。,温度、氧气和pH等,八、问题讨论,a,80,酒精发酵和醋酸发酵的比较,醋酸发酵,酒精发酵为醋酸发酵提供 。,酒精发酵,联系,氧气,微生物,区别,酵母菌,醋化醋杆菌,无氧,有氧,酒精,a,81,实验10 泡菜的腌制和亚硝酸测定,a,82,第一节 泡菜的制作,泡菜腌

33、制过程中起作用的主要是假丝酵母和乳酸菌。,无氧条件下，微生物利用菜中的糖和其它营养物进行发酵，发酵产物有有机酸和醇类物质等，其中也有亚硝酸盐。,泡菜是一种以湿态发酵方式加工制 成的浸制品，是一种发酵食品。 泡菜制作容易，成本低 廉，风味可口，利于贮存。,一、基础知识（泡菜的制作）,a,83,三、设备及用品 泡菜坛、菜刀、菜板；,四、实验材料 各种蔬菜均可，一般用白菜、洋白菜、黄瓜、柿子椒、胡萝卜、 白萝卜等； 添加的调味品，如花椒、大蒜、 辣椒等； 白酒； 食糖和盐。,二、实验内容,制作泡菜并对亚硝酸盐进行测定,a,84,五、实验步骤,1.起发酵作用的主要菌种是什么？来自哪里？,假丝酵母和乳酸

34、菌，主要来自蔬菜等自然环境。,2.加入白酒起什么作用？,可抑制泡菜表面杂菌的生长，它也是一种调味剂，可增加醇香感。,a,85,创造无氧环境，使乳酸菌进行乳酸发酵。 如不封闭，则会有许多需氧细菌生长，蔬菜会腐烂。,3.用水封闭坛口起什么作用？不封闭有什么结果？,a,86,无氧环境，使许多需氧菌不能生存。 乳酸菌产生的乳酸及某些代谢产物能抑制细菌的生长。,4.为什么泡菜较耐贮存？,5. 有时要加一些“腌制过的泡菜汁”，有什么作用?,腌制过的泡菜汁中有较多假丝酵母和乳酸菌等菌种，可减少腌制时间。,a,87,第二节 亚硝酸盐含量的测定,一、实验原理 亚硝酸盐可与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，这一产物再

35、与N-1萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物。可用光电比色法定量。 （将经过反应显色后的待测样品与标准液比色，即可大概算出样品中的亚硝酸盐含量。）,a,88,a,89,二、材料与器具 泡菜 N-1萘基乙二胺溶液、对氨基苯磺酸、硫酸锌溶液、氢氧化钠、亚硝酸钠、氯化铵缓冲液等 蒸馏水、移液器、容量瓶、榨汁机、分光光度计等,a,90,亚硝酸钠标准溶液(测定时用)： 取1mL亚硝酸钠储液，移至100mL容量瓶中，加蒸馏水定容，即制得5g/mL亚硝酸钠标准液。,显色液：将N1萘基乙二胺溶液与对氨基苯磺酸溶液(上清液)等体积混合。,试剂的配制,a,91,取25g泡菜，打成匀浆，过滤，洗涤，用NaOH调pH至8，

36、加25mLZnSO4，60水浴，过滤，洗涤，定容于500mL容量瓶中。,a,92,用移液器吸取10mL样品溶液，加入4.5 mLNH4CL缓冲液，2.5mL60%乙酸和5mL显色液，加水定容于25mL的容量瓶中。混合均匀，暗处静止25min ，测光密度值。以10mL水为空白对照。,a,93,用移液器先吸取0，0.5，1.0，3.0，5.0mL的亚硝酸钠标准溶液，分别置于25mL容量瓶中。 再各加入4.5 mLNH4CL缓冲液，2.5mL60%乙酸和5mL显色液，加水定容至25mL，混合均匀，暗处静置25min，测光密度值。 以亚硝酸钠质量为横坐标，以光密度值为纵坐标，绘标准曲线。,a,94,若通过标准曲线，查出10mL样品中含m2(g)的亚硝酸盐，则每千克样品中含亚硝酸盐多少mg?,a,95,实验11 植物的组织培养,a,96,1、植物组织培养的过程,外植体,愈伤组织,胚状体 或根、芽等,植物体,脱分化,再分化,愈伤组织,一、基础知识,a,97,你认为培养基应有哪些成分?,2、植物组织培养的培养基,培养基的成分 矿质元素 蔗糖 植物激素 维生素 有机添加物 琼脂等,a,98,MS培养基,MS培养基含有十几多种化合物，配制不方便也难称量准确，可将培养基中的各种成分扩大一定倍数分别称量，配