医学精品课件肠道杆菌及检验

肠道杆菌及 检验 肠道杆菌 （ enteric bacilli） 的概念 : 肠杆菌科 （ Enterobacteriaceae） 共 30个属， 120个种，大多为肠道正常 菌群，少数为致病菌，一部分在发生移 位，或宿主免疫力低下时，可成为条件 致病菌。 第一节 概 述 正常菌群 致病菌 埃稀菌属 变形杆菌属 克雷伯菌属 肠杆菌属 沙雷菌属 枸橼酸菌属 致病性大肠埃稀菌 志贺菌属 沙门菌属 耶尔森菌属 大肠杆菌 肠外感染 普通变形杆菌： 肠外感染、食物中毒 医院感染 EPEC.ETEC EIEC.EHEC EAggEC 肠内感染 食物中毒 A群痢疾志贺菌 B群福氏志贺菌 C群鲍氏志贺菌 D群宋内氏志贺菌 急性菌痢 慢性菌痢 中毒性菌痢 伤寒沙门菌 甲、乙、丙 鼠伤寒沙门菌 猪霍乱沙门菌 肠炎沙门菌 肠热症 食物中毒 败血症 小肠结肠炎耶尔森菌 食物中毒 鼠疫耶尔森菌 鼠疫 肠道杆菌 共性 ： 1.形态染色：均为革兰阴性杆菌，无芽孢、有菌毛，部 分有荚膜或包膜，大多有周鞭毛（除志贺菌、克雷伯、鼠疫 耶尔森菌之外）。 2.营养要求：需氧或兼性厌氧。 3.生化反应：具丰富的酶，生化反应活跃 ,并各不相同， 为鉴定的主要依据。 致病性越强，生化反应能力越弱。 非致病菌（除变形杆菌外） 均分解乳糖产酸，致病菌不 发酵乳糖。 常用选择培养基： S S (Salmonella-shigella)。 EMB (Eosin-methylene-blue) MAC (Mac Conkey) 常用生化反应培养基： KIA MIU 定科试验 ：革兰阴性杆菌、触酶阳性、氧化酶阴 性、硝酸盐还原试验阳性 4、抗原构造：有多种抗原 菌体抗原（ O抗原） ：脂多糖，耐热（ 100 不 被破坏），有属、种特异性，又有类属抗原和特异性 抗原之分，类属抗原可引起交叉反应，凝集为颗粒状 。 H抗原 鞭毛蛋白，不耐热（ 60 30min 即可破 坏），特异性强，凝集为絮状。 表面抗原： 包绕于 O抗原的外面的多糖（不耐热），不同 细菌有不同的名称（如大肠杆菌及志贺菌的 K抗原，沙门菌 的 Vi抗原） 抗原是肠道杆菌血清学分群和分型的依据。 5、遗传变异 S-R变异 H-O变异 耐药性变异 6、传播途径 经消化道 以饮食、饮水为媒介 体内感染（免疫力下降、移位），为医院感染主要病原 菌群。 7.致病物质：菌毛、内毒素、肠毒素 8.检验方法 标本： 肠内标本：新鲜粪便 肠外标本：血液、体液、尿液等 分离培养 血液 肉汤增菌 血平板分离 尿液、伤口分泌物 MAC分离 粪便： SS 、 EMB分离 鉴定依据： 革兰染色 触媒、氧化酶、硝酸盐还原 KIA、 MIU、 IMViC ,其他生化反应 血清玻片凝集（鉴定到种、型或血清型） 第二节 埃希菌属 埃希菌属 （ Escherichia） 大肠埃希菌 （ E.coli） 蟑螂埃希菌 （ E.blattae） 格森埃希菌（ E.fergusonii） 赫尔曼埃希菌 （ E.hermannii ） 伤口埃希菌 （ E.vulneris） 分布及种类： 一、生物学性状 （一）形态染色： 革兰阴性短杆菌、大多有周鞭毛， 菌毛，少数有微荚膜。 （二）培养特性 普通平板：中等大小，圆形凸起，光滑灰白色 。 血平板：某些菌株呈 溶血 S S、 MAC平板： 分解乳糖产酸呈粉红色菌 落 EBM：兰紫色菌落，有金属光泽 液体培养基：混浊生长 S S 大肠埃希菌 中国蓝 产气肠杆菌 （三）生化反应 分解葡、乳、麦、甘，产酸产气，蔗糖因株而易 I M Vi C： + + ， 脲酶： 肠内感染菌株：不发酵 / 迟缓发酵乳糖， KIA, MAC中可 产碱。 （四）抗原构造： 有 O、 H和 K三种 O 抗原是血清学分型的基础，约 170种。 H 抗原大于 56种 血清型的表示式： O： K： H ， 如： O111： K58： H2； O157： H7 （五）抵抗力： 自然界水中存活数周或数月。 胆盐、煌绿可抑制其生长， 对氯霉素、链、庆大酶素敏感。 易产生耐药性： 出现了 产超广谱 - 内酰胺酶 （ Extended-Spectrum -lactamase ： ESBLs）菌株，则对第三代头孢菌素（ 头孢噻肟、头孢他定、头孢哌酮、头孢曲松等）耐药。 产 ESBLs的革兰阴性菌除了大肠埃希菌之外，常见 的还有阴沟肠杆菌、粘质沙雷氏菌、弗劳地枸橼酸菌、铜 绿假单孢菌 （一） 致病物质： K抗原 菌毛 ETEC的菌毛称 定植因子 (CFA) 毒素：括内毒素和外毒素（肠毒素） 肠毒素 不耐热肠毒素（ heat labile toxin, LT） ,65 30min可破坏耐热肠毒素（ heat stable toxin, ST） （二）所致疾病 1、机会感染：移位到肠外组织、器官，引起化脓性 感染，如泌尿系统感染、胆囊炎、腹膜炎等。 2、肠内感染： 腹泻（轻微腹泻 霍乱样腹泻） 二、致病性 肠产毒型大肠埃希菌 （ entertoxigenic E coli, ETEC） 肠致病型大肠埃希菌 (enteropathogenic E. coli, EPEC) 肠侵袭型大肠埃希菌 （ enteroinvasive E. coli, EIEC） 肠出血型大肠埃希菌 (enterohemorrhagic E.coli EHEC) 肠聚集型大肠埃希菌 (enteroaggrehative E coli EAggEC) 致病性大肠杆菌： 引起腹泻的大肠杆菌种类及主要特征 菌株 侵袭部位 疾病与症状 致冰机制 旅行者腹泻，婴幼儿腹泻，水样， 伴恶心呕吐、腹痛、脱水、低热 肠毒素致大量分泌液体、电解质 婴幼儿腹泻，水样或粘液便，发 热， 恶心呕吐 粘附、破坏上皮细胞 志贺样腹泻，水样致脓血便，含红、 白细胞、黏液，发热腹痛 侵袭和破坏肠粘膜 上皮细胞 出血性结肠炎，水样便以血便， 剧烈腹痛，低热， HUS等 溶原性噬菌体编码 SLT- I或 II中断肠黏膜上皮细 胞蛋白质合成 婴儿腹泻，持续水样便，呕吐 ，低热，脱水 聚集性黏附上皮细胞 ，阻断液体吸收 小肠 小肠 结肠 结肠 小肠 ETEC EPEC EIEC EHEC FAggEC 三、微生物学检验 （一）标本采集 （二）检验程序及方法 麦康凯琼脂 蛋白胨 20g 氯化钠 5g 琼脂 20-25g 蒸馏水 1000ml 乳糖 10g 1%中性红水溶液 5ml 胆盐 5g （ 或牛 胆酸钠 4g与去氧胆酸钠 1g） 肉膏汤琼脂 （ pH7.4） 100ml 乳 糖 1g 1%中国蓝水溶液 （灭菌） 0.5-1ml 1%玫瑰红酸乙醇溶液 1ml 注 1.中国蓝与玫瑰红酸在酸碱溶液中的反应（见表）；此培养基 pH约为 7.4，制 好后应呈淡紫红色。过碱呈蓝色，均不适用。 指示剂 酸性 碱性 中国蓝 蓝色 微蓝至无色 玫瑰红酸 黄色 红色 2.玫瑰红酸能抑制革兰氏阳性细菌的生长，但对大肠杆菌没有抑制作用， 故粪 便标本接种量不宜太多。 3.多数肠道致病菌不分解乳糖，其菌落为透明或半透明、淡红色；大肠杆菌分解 乳糖产酸，形成大而浑浊的蓝色的菌落。 4.中国蓝水溶液需煮沸或高压灭菌 0.7kg15分钟后应用；玫瑰红酸是乙醇溶液， 无需灭菌，但加热应避开火焰。 中国蓝琼脂 MAC 不长 伊红美蓝琼脂 (EMB琼脂） 肉膏汤琼脂 （ pH7.4） 100ml 乳 糖 1g 2% 伊红水溶液 （灭菌） 2ml 0.5% 美蓝水溶液 （灭菌） 1ml 配方一 配方二 配方三 配方四 牛肉膏 5 5 牛心浸液 1000 肉膏液 850 胨 5 7.5（胨） 5 乳 糖 10 15 10 10 胆盐 10（粗制 ） 10（透析 ） 150（ ml）（ 牛 胆汁） 8.5（混合） 硫代硫酸钠 12 5 11 8.5 枸橼酸钠 12 15 11 8.5 枸橼酸铁 0.5 1 枸橼酸铁铵 1 4 磷酸氢二钠 5 4 琼 脂 25 18 20 13.5 煌 绿 0.33 0.33 1.0 0.33 中性红 22.5 37 70 25 水 1000 1000 SS琼脂 (四种配方 ) 蛋白胨 10g 葡 萄 糖 1g 氯化钠 5 g 乳 糖 10g 牛肉膏 3 g 硫代硫酸钠 0.2g 琼 脂 16g 硫酸亚铁 0.2g 水 1000ml 0.4%酚红 6ml 双糖铁培养基 血 液 肉糖增菌 血平板分离 脓汁、痰、分 泌物、尿 粪便、直肠拭子 MAC、 EMB分离 37 1824H 可疑菌落涂、染、检 肠道外感染 肠道感染 初步鉴定 菌落特征、革兰染色 KIA、 MIU