鸡法氏囊卵黄抗体工艺规程(免费)

1、文件名称：鸡传染性法氏囊病精制蛋黄抗体工艺规程文件编号SMP-PMP05400批准人日期第 1 页共 12 页审核人日期生效日期起草人日期颁发部门生产部分发部门生产部1.本品系用鸡传染性法氏囊病强毒灭活油佐剂抗原高免健康产蛋鸡,从高免鸡蛋黄中萃取并采取灭活病毒细菌技术精制而成的透明水针剂,含有高效价鸡传染性法氏囊抗体,用于鸡传染性法氏囊病早、中期的治疗和紧急治疗。2. 产品名称：鸡传染性法氏囊病精制蛋黄抗体。剂型：水针剂。规格：500ml/瓶、250ml/瓶 2.本产品工艺规程制订依据鸡传染性法氏囊病精制抗体制造及检验试行规程3.工艺流程及区域划分(如图1)种毒制备免疫原制备灭活水相制备乳化免

2、疫鸡群收集高免蛋消毒蛋壳*打蛋分离蛋黄灭活萃提灭活过滤灭活组批*灌装压盖贴签成品检验入库注射用白油司本硬脂酸铝油相配制灭菌吐温灭菌种蛋整理检测检测包装标签纸箱疫苗瓶灭菌胶塞灭菌铝盖灭菌*灭活剂配制*灭活剂配制灭活检测检测检测鸡传染性法氏囊病精致蛋黄抗体工艺流程图负压10000级 *正压10000级 局部100级 负压区 图1 生物制品工艺流程及环境区域划分示意图4.工艺过程及操作4.1抗原（免疫原）的制备种毒制备：SNJ93株IBDV囊毒组织用生理盐水按1：00（W/V）比例之称组织匀浆，冻融3次，加等体积三氯甲烷处理，3500rpm离心30min，上清液经56度3h，0.22滤膜除菌，细菌和

3、外源病毒检验合格，种毒4-10度保存，不超过4周。.病毒增值：点眼、滴鼻接种4-8周龄SPF鸡，每只0.1ml，隔离饲养，接毒后24-72小时，试验鸡应陆续发病，并于48-96小时内陆续死亡，未死亡的鸡于96小时全部剖杀，采集具有典型IBD病理变化的法氏囊和脾脏，采毒时勿损伤消化道和输尿管，严防污染，病料-20度冻结保存期为1年。全部实验鸡应逐只剖检，记录病理变化。.无菌检验：按无菌检验操作规程进行，应无病原菌，非病原菌数不得超过14个细菌/克组织。组织匀浆及效价测定：病料（法氏囊和脾脏）称重，剪碎后按1：100（g/v）加入灭菌生理盐水，高速搅拌匀浆，组织悬液先冻（-20度）融35次，然后加

4、入等体积三氯甲烷，充分振摇处理15min，3500rpm离心30min，取上清液。.灭活 上清液中加入甲醛溶液，使其终浓度为0.3，密闭后充分振摇混匀，置37度温箱灭活48小时（期间振摇34次）。灭活检验： 抽样并接种9日龄非免疫鸡胚或SPF鸡胚（腔）5枚，连续观察7天，鸡胚应全部健活。抗原效价测定：采取琼扩试验检测，IBDV特异血清（中监所）检测，IBDV抗原效价应1：4。4.3乳化.油相准备 ：10号白油94份，司本-80 6份，硬脂酸铝2（W/V），硬脂酸铝与少量白油混合加热融化后，补足白油，加入司本-80，充分搅拌，分装，116度30min灭菌备用。.水相制备：按抗原96份、吐温-80

5、 4份配制。 吐温-80加入带有玻璃珠的瓶中灭菌，吐温-80先与少量的抗原混合，然后与大量抗原混合，充分摇匀，使吐温-80完全溶解。.乳化： 按油相3份，水相1份配制，取水相加入高速组织捣碎机缸内，慢速搅拌，徐徐加入水相，加完高速搅拌25min，在终止搅拌前加入1硫柳汞溶液，使之终浓度为万分之一。.物理性状：油乳剂抗原应为乳白色带粘滞性的均匀乳状液，经3500rpm离心30min，无分层现象为合格。.无菌检验：按无菌检验操作规程进行，应无菌生长。.安全检验：油乳剂抗原接种2030日龄IBD中和抗体阴性，健康鸡10只，每只鸡颈背皮下注射3ml，设对照组5只，隔离饲养，观察15天后剖杀，两组鸡均无

6、肉眼可见异常病理变化，判为合格。.效力检验： 试验种母鸡在35日龄前经IBD弱毒疫苗基础免疫，于1820周龄接种油乳剂抗原，每鸡颈皮下注射1.5ml，2周后所产的蛋中IBD特异性抗体效价（AGID）1：32以上。.保存：在28度避光保存，保存期为6个月，不能冻结。.基础免疫：用IBDV弱毒疫苗，按常规接种，如B87滴鼻或饮水，10日龄首免，2325日龄二免。.强化免疫：于18周龄时胸部皮下注射1.5ml，IBDV灭活油乳剂抗原，38周龄二免。.高免蛋收集：强化免疫后第7天开始，每隔三天抽样测定高免鸡蛋黄中IBDV抗体效价，蛋黄与生理盐水按1：4（V/V）稀释后，加等体积三氯甲烷萃提，上清液琼扩

7、抗体效价1：32时收集高免蛋，高免鸡蛋1525可贮存3天，28度贮存期为一个月。.蛋壳消毒：蛋壳严重污染的，应事先选出进行单独消毒，用清水冲洗干净后与净蛋一同浸入水温42度的0.1新洁尔灭水溶液中消毒15min，随后浸入9095水浴中消毒5秒中，快速取出后晾干或吹干备用。.打蛋分离蛋黄：采取手工或机械打蛋，充分除去蛋清，胚盘和系带，收集蛋黄。.灭活I：充分搅拌使蛋黄呈均匀膏状，然后加入等体积经65 30min消毒并冷却的蒸馏水，搅拌混匀后，6065度加热灭活815min。.萃提：在隔层反应罐中先加入相当于原卵黄体积4倍，用盐酸调PH为4.2的蒸馏水，将水温降至14，加入灭活I的蛋黄液，边加边搅

8、拌，之后，48度保温静置4小时，管式高速（14000rpm）低温连续离心分离上清液并转入另一反应罐中。.灭活II：加入辛酸至终浓度为0.02，搅拌混匀，室温静置24h。.粗滤及深滤：用尼龙滤布过滤，再用K型多层滤板过滤澄清。.超滤浓缩：经截流量为100KD的超滤膜过滤浓缩，浓缩倍数为3。.灭活III：按终浓度为0.05加入甲醛溶液于浓缩液中，充分搅拌混匀，密封3060min。.超滤除病毒：用截流分子量为1000KD的超滤膜过滤除病毒。加入稳定剂：加入吐温-20至终浓度为0.02和防腐剂硫柳汞至终浓度为0.01除菌过滤：用0.22um微孔滤膜过滤除菌。.组批：无菌混合组批，混合时应多加入20抗体

9、。将混合好的抗体打入灌装间，疫苗瓶、胶塞分别灭菌后移入灌装车间，按产品规格定量灌装、加塞、轧盖。.2.将灌装好的产品贴上标签，连同说明书装箱。抽取样品，挂待检牌入成品库待检区.生产工序控制点控制内容和方法频次抗原（免疫原）的制备SNJ93株IBDV囊毒组织自制合格的囊毒4-10保存不超过4周每批病毒增值按程序免疫，无菌采集，-20保存1年每批灭活甲醛浓度3%，温度37，时间48小时每批油相制备白油：司本：硬铝=94：6：2， 每次水相制备抗体：吐温=96：4 ，吐温11630min灭菌每次乳化水：油=1：3，3500转/min，时间2-5 分钟每次鸡群免疫基础免疫程序10日龄首免，23-25日

10、龄二免每群强化免疫程序1-8周龄首免，28周龄二免每群高免蛋收集抗体效价1：32，15-25存3天，2-8存30天每批精制抗体制造打蛋无菌操作收集蛋黄每批灭活1:1加水， 6065加热灭活815min。每次萃取盐酸调PH为4.2，4-8静置4小时14000rpm离心每次灭活辛酸0.02%，静置2-4小时每次粗滤、深滤灭菌尼龙布、k型多层滤板每次超滤浓缩无菌操作，3倍浓缩每次灭活3甲醛0.05%，密封30-60min每次超滤除毒截流分子量1000KD每次加稳定剂吐温0.02%，硫柳汞0.01%，0.22um除菌过滤每次组批无菌混合组批，混合时应多加入20抗体。每批灌装无菌操作，装量每批随时封口用

11、手拧盖不松动每批随时标签检查内容、数量、批号正确与否每批装箱核对说明书、装箱单、数量、印刷内容每箱4.5传染性法氏囊病精蛋黄抗体车间质量控制点及检测项目序号工序质量控制点控制项目频次一制水纯化水电导率1次/2小时中国药典全项1次/周注射水电导率、PH、澄明度1次/2小时中国药典全项1次/周二种毒制备种毒繁殖及鉴定无菌检验1次/批支原体检验1次/批外源病毒检验1次/批特异性1次/批病毒含量测定1次/批三抗原制备抗原灭活无菌检测1次/批灭活检测1次/批乳化效价检测（AGP效价）1次/批剂型检测1次/批离心检测稳定性1次/批无菌检测1次/批安全检验1次/批效力检验1次/批四种蛋整理高免蛋外观1次/批

12、蛋重1次/批IBD AGP抗体1次/批五精制蛋黄制备半成品无菌检测1次/批IBD AGP抗体1次/批六灌装分装量及装量检测装量1次/1000瓶外观随时5.成品5.1. 成品检验：按鸡传染性法氏囊病精制蛋黄抗体质量标准进行6.注意事项：本品一次注射的被动免疫期为57天。本品口服无效。本品可连续应用23次本品含有除IBD以外的多种病原体的抗体，用后5天内不可接种IBD、ND、IB等灭活疫苗。本品可与卡那酶素、庆大酶素混合一次注射。本品久置后瓶底有微量絮状沉淀，对疗效无影响7.贮藏：-20度冻存保存和28度冷藏保存，有效期为1年6个月。8.规格：100ml，250ml和500ml。9.原辅材料质量标

13、准高免蛋:鸡群健康，抗体检测：IBD AGP抗体效价256。高免蛋大小正常均一、蛋壳光滑无污物，卵黄IBD AGP抗体效价256。甲醛 参照甲醛质量标准SMP-QMP06000土温-80 参照土温-80质量标准SMP-QMP05900司本-80 参照司本-80质量标准SMP-QMP06100注射用白油 参照注射用白油质量标准SMP-QMP06300硬脂酸铝 参照硬脂酸铝质量标准SMP-QMP06200 硫柳汞 参照硫柳汞质量标准SMP-QMP06200.物理性状：溶液为略带棕色或淡黄色透明液体，久置瓶底有少量白色沉淀，PH值为6.87.2。.无菌检验：按无菌检验标准操作规程进行，应无菌生长。.

14、抗体效价测定：采取琼扩试验检测,8氯化钠溶液中加入1.0g优质琼脂粉，加热融化后，加入终浓度为0.01硫柳汞防腐，浇制凝胶板，按中央1孔外围6孔打孔，孔径3mm，间距4mm，加样量为1520ul，加样后置37度湿盒孵育24小时，在室温放置2448小时，观察判定结果：与标准抗原形成白色沉淀线的抗体最大稀释倍数即为蛋黄抗体的效价，半成品中IBDV抗体效价应1：32。高免蛋1525可贮存3天，28度贮存期为一个月。灭活抗体应立即混合分装或2-8贮存不超过一周。成品2-8 贮存不超过有效期一年。种毒-70以下冻干保存土温-80遮光，密封保存。甲醛密封，防冻保存。司本-80根据说明书说明保存注射白油根据

15、说明书说明保存硬脂酸铝根据说明书说明保存硫柳汞根据说明书说明保存辛酸根据说明书说明保存10.主要设备一览表及主要设备生产能力：设备名称生产用途设备数量生产能力湿热灭菌柜疫苗瓶、胶塞、生产工器具、废弃物等灭菌48.5m3干热灭菌柜玻璃器皿、金属等灭菌102m3离心机抗体萃取120万毫升打蛋机打蛋1100万毫升灭活罐抗体灭活6210万ml 灌装机定量灌装140瓶/分钟压盖机自动压盖140瓶/分钟贴签机自动贴签140瓶/分钟11.技术安全、工艺卫生和劳动保护11.1 技术安全 防火：各车间严禁动用明火，并设安全保卫人员，配备消防器材。安全用电：所有生产照明用电的线路、开关和电机的安装，必须符合电工规

16、程，并避开水源，有问题及时找电工检查，不得擅自处理。 安全用气（汽）：使用蒸汽、压缩空气生产时，必须按规定的安全操作法操作机器，设备的气（汽）压、温度不得超过规定范围，定期校验仪表，并建档,保证仪表灵敏、准确、可靠，确保生产安全。 安全使用机器设备：所用设备的使用、维修、保养必须按公司设备部所订的生产设备操作程序执行。对于转动部分、传动部分等应装防护罩，在使用过程中出现问题要及时停车检修。11.2 工艺卫生要求 厂房设施、内部装修必须符合GMP要求。11.2.2 所有设备应保持清洁完好，每次使用后立即擦拭干净，仪表灵敏，机器运转正常，无跑、冒、滴、漏等现象。 一切生产工具都应保持洁净无污染，对

17、于直接接触药品的工具，在生产前都应用纯化水洗刷干净后，再用注射用水冲洗三次。所有生产工具，不准拿出车间外使用，运输工具必须干燥、洁净、无异味,不得与腐烂、有异味、剧毒、潮湿的货物放在一起运输，运输途中防水、防挤压、防剧烈震动。 一切操作人员进入岗位前，按照岗位洁净级别进行相应级别要求的洗手、更衣、洗澡和消毒，日常养成良好的卫生习惯，做到勤洗澡、勤剪指甲、勤理发、勤换衣服，任何人不准在生产场所吃食物、吸烟、吐痰。物流程序：原辅料 半成品（中间体） 成品（单向顺流，无往复运动）。 物净程序：物品前处理消毒洁净区。 空气净化：整个车间密闭，进入车间的空气须经过过滤，冬季送净化热风，夏季送净化冷风，车

18、间内洁净度按照应达到规定的级别，温度1826,相对湿度3065%，并按规定对空气进行消毒。洁净室（区）空气洁净度级别表洁净度级别沉粒最大允许数/m3（静态）微生物最大允许数（静态）换气次数0.5m5m浮游菌/m3沉降菌/90皿0.5h100级3 500050.510 000级350 0002 000501.520次/h100 000级3 500 00020 000150315次/h 具有产汽的蒸气灭菌柜、制水间、乳化间、灭活间要有排汽设施。 人净程序： 人门厅更鞋（一）更衣（一）更鞋（二）更衣（二）缓冲（气闸）洁净区。 人净标准：区域清洁标准清洁更衣要求一般区常规清洁常规蓝色工作服十万级无沉粒无污垢每周清洗2次/周必需更换洁净服戴口罩、口罩万级正压区无沉粒无污垢每周清洗2次/周穿2层洁净服戴2层帽、口罩万级负压区无沉粒无污垢出负压区洗澡/每次穿无菌服戴2层帽、口罩工作服标准：区域级别工作衣服帽鞋处理方法颜色样式一般区上、下两件蓝色蓝色深色胶底清洗、烘干十万级上、下两件白色白色医士帽稍深色胶底清洁、烘干、灭