复方南板蓝根片质量标准研究

本科毕业论文复方南板蓝根片质量标准研究二级学院 中药学院专 业 中药学（中药制药方向）班 级 2009 级（1）班学生姓名 *学 号 0906505148指导教师 黄*2013 年 4 月诚 信 声 明我声明，所呈交的毕业论文（设计）是本人在老师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我查证，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文（设计）中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。我承诺，论文（设计）中的所有内容均真实、可信。毕业论文（设计）作者（签名）： 年 月 日目 录摘要 .-1 前言 .12 材料与仪器 .22.1 实验材料 .22.2 仪器 .23 方法与结果 .33.1 薄层鉴别 .33.2 咖啡酸的含量测定 .74 讨论 .124.1 薄层鉴别 .124.2 含量测定 .12参考文献 .14综述 .15致谢 .221复方南板蓝根片质量标准研究摘要：目的 建立复方南板蓝根片的质量控制方法。方法 采用薄层色谱法（TLC ）对方中的南板蓝根、紫花地丁和蒲公英进行定性鉴别，采用高效液相色谱法（HPLC ）对方中蒲公英的指标性成分咖啡酸进行含量测定，色谱柱为菲罗门 Phenomenex C18（ 2504.60mm） ，流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液（23:77），柱温：30，流速：1.0mLmin -1，检测波长：323nm。结果 在 TLC 图谱中供试品和对照品溶液在相同位置显示同颜色的斑点，且阴性无干扰。含量测定结果显示，咖啡酸 0.150.75 g 范围内与峰面积积分值呈良好线性关系，回归方程为 y=4282300x+14400，R 2=0.9996，平均回收率为 98.85%，RSD 为 0.81%（n6） 。结论建立的方法简便可行，可用于复方南板蓝根片的质量控制。关键词：复方南板蓝根片；质量标准；TLC；HPLC1Study on the quality standard for South banlangen compound tabletsAbstract: Objective To establish the quality standard of South banlangen compound tablets. Methods The qualitative identification of South banlangen compound tablets, Herba violae and dandelion was conducted by thin layer chromatography (TLC). The content of Caffeic acid was determined by high performance liquid chromatography (HPLC). The chromatographic conditions were the Chromatographic column for the Phenomenex C18(2504.60mm), mobile phase of methanol-phosphate buffer(23:77). The detection wavelength was 323nm and the column temperature was 30C, flow rate at 1.0mL/min. Results The test sample and the control solution showed spots at the same position with the same color on the TLC plate, without negative interference. By accurate high performance liquid chromatography, a good linear correlation of Caffeic acid was shown in the range of 0.150.75g and the a regression equation was y = 4282300x+14400 (R2=0.9996), the average recovery was 98.85%, RSD=0.81% (n=6). Conclusion The established method is simple and feasible, which can be used as the basis for quality control of South banlangen compound tablets.Keywords: South banlangen compound tablets; Quality standard; TLC; HPLC11 前言复方南板蓝根片是部颁标准中药成方制剂2005 册收载品种，方中有南板蓝根、紫花地丁、蒲公英 3 味药，具有消炎解毒的功效，用于腮腺炎、咽炎、乳腺炎、疮疖肿痛。目前， 部颁标准中药成方制剂对该制剂的质量标准只有性状鉴别、紫花地丁和蒲公英的理化鉴别以及南板蓝根的薄层鉴别，存在局限性，并且南板蓝根的薄层鉴别方法不够理想，因此有必要对复方南板蓝根片进行定性和定量研究，以建立更高的质量标准，从而确保药品的质量，有效地控制其在临床应用的有效性和安全性。南板蓝根是复方南板蓝根片的君药，其作为清热解毒药物具有悠久的历史，自然资源十分丰富，化学成分比较复杂。其不同活性部位、化学成分显示出不同的药理活性，药理作用的研究大多处于体外实验和动物模型阶段，许多作用机理仍不清楚，作用靶标不明确，其药效的分子机制的研究更少，对南板蓝根的研究还需深入探索药理活性以及发挥各药效的活性部位或成分。随着现代化科技的进步，对南板蓝根的化学成分及其活性进行更深入的研究，南板蓝根将有更加广阔的应用前景 1。牛卫宁等 2对方中南板蓝根的薄层色谱鉴别进行研究，他们认为部颁标准中方法阴性有干扰，专属性不强；且点样量太大，耗费工时；检视也需喷显色剂加热，方法均较复杂；Rf 值也较大，分离效果不好；展开剂所用苯是一种毒性很强的有机物，为 I 类人类致癌物，美国早在 1992 年就禁止在学生试验中作用苯。因此，他们建立了一种新的南板蓝根薄层色谱鉴别方法，既解决了阴性干扰问题，又具有较好的分离效果。而本论文则进一步完善南板蓝根薄层色谱鉴别方法。紫花地丁性寒味微苦，有清热解毒的功效。主治黄疸、痢疾、乳腺炎、目赤肿痛、咽炎；外敷治跌打损伤、痈肿、毒蛇咬伤 3。紫花地丁所含黄酮甙类及有机酸对金色葡萄球菌、猪巴氏杆菌、大肠杆菌、链球菌和沙门氏菌都有较强的抑菌作用 4。所富集微量元素，对人体内多种酶的活性有作用，对核酸蛋白的合成、免疫过程、细胞繁殖都有直接或间接的作用，可促进上皮细胞修复，2使细胞分裂增加，T细胞增高，活性增加，从而对生物体的免疫功能起调节作用，通过酶系统发挥对机体代谢的调节和控制。所含锌可抗病毒，并能刺激抗毒素的合成，提高对传染病的抵抗力。是其：“清热解毒” 、 “治疽疗毒”的基础 5。而蒲公英具有清热解毒、消肿散结、利尿通淋之功效，该药对金葡萄、链球菌、卡他球菌均有效，并激发机体免疫功能，增强机体抗病能力，为常用中药，历代药典均有记载。近年来有关蒲公英制剂质量标准的研究报道较多 6-9。可见，紫花地丁和蒲公英两药在方中起着很大的功效作用，故有必要对该两药进行更高的质量控制，本论文参考2010年版中国药典，分别对方中的紫花地丁和蒲公英建立了薄层色谱鉴别方法。为提高复方南板蓝根片的质量标准，本论文除了对其进行定性研究，还进行了定量分析研究。许刚 10对方中的君药南板蓝根所含成分靛蓝进行了 HPLC含量测定，其流动相为：甲醇-水（55:45）,流速:1.2ml/min ,检测波长为294nm,测得的结果表明靛蓝在浓度为 0.06360.5088g 范围内线性关系良好。而赵红旗，李钦 11则对方中蒲公英中所含有效成分咖啡酸进行了含量测定。他们以甲醇-磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠 1. 56g,加水使溶解成 1000ml,再加 1%磷酸溶液调节 pH 值 3.84.0,即得） （23:77）为流动相，流速 : 1.0mLmin-1,检测波长：323nm,测得的结果为：咖啡酸对照品进样量在 0.1450.726g 范围内线性关系良好，平均回收率在 96.3%100.9%之间， RSD 为 1.76%（n=5） 。2 材料与仪器2.1 实验材料复方南板蓝根片三批（广东罗浮山国药股份有限公司，批号分别为：L13A022、L13A023、L13A024 ）；南板蓝根对照药材（中国药品生物制品检定所，批号：120971-200404） ；咖啡酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110885-200102） ；硅胶 G 板（自制，规格 1020cm，厚度 0.5mm） ；液相用的甲醇（色谱纯，天津市彪仕奇科技发展有限公司） ；其他试剂均为分析纯。2.2 仪器3AB135-S 型电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司，0.001g） ；JA5003B 型电子天平（上海精密科学仪器有限公司，0.01mg） ；DG200C 型二斤装中药材粉碎机（浙江省瑞安市春海药材器械厂） ；HH-6 数显恒温水浴锅（常州澳华仪器有限公司） ；SK250 型超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司） ；DHG-9070A 型电热恒温鼓风干燥器（上海精宏实验设备有限公司） ；ZF-90 型暗箱式紫外透射仪（上海顾村电光仪器厂） ；LXJ-IIB 型离心机（上海安亭科学仪器厂） ；LC-10AT VP 型高效液相色谱仪（岛津香港有限公司 ） 。3 方法与结果3.1 薄层鉴别3.1.1 南板蓝根的薄层鉴别（部颁标准法和新建方法比较）对部颁标准中的方法和新建的方法进行比较，以下将部颁标准中的方法简称标法，将新建的方法简称新法。3.1.1.1 溶液的制备标法和新法中溶液的制备方法比较结果如下。 （见表 1）4表 1 标法和新法中溶液制备的比较溶液的制备 标法 新法供试品溶液的制备取本品 5片，除去糖衣，研细，加乙醚30ml，冷浸 1小时，振摇，滤过，滤液置水浴浓缩至约1ml，作为供试品溶液取本品5片，除去包衣，研细，加三氯甲烷20ml，加热回流30min，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液对照药材溶液的制备另取南板蓝根对照药材5g，加水50ml，微沸30分钟，滤过，滤液放冷，置分液漏斗中，加乙醚30ml 提取，乙醚液置水浴浓缩至约1ml 作为对照药材溶液另取南板蓝根对照药材2g，加三氯甲烷20ml，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液阴性对照溶液的制备按处方除去南板蓝根，其余处方与工艺不变，制成缺南板蓝根的阴性样品。取阴性对照1g，按供试品溶液的制备法制成阴性对照溶液取按处方同法制备不含南板蓝根的样品粉末1g，按供试品溶液制备方法制备，作为阴性样品溶液3.1.1.2 薄层展开条件标法和新法薄层展开条件比较结果如下。 （见表 2）表 2 标法和新法中薄层展开条件的比较薄层展开条件 标法 新法薄层板 硅胶 G 板（自制） 硅胶 G 板（自制）点样分别吸取上述供试品、对照药材、阴性液各50L，点在同一薄层板上分别吸取上述供试品、阴性溶液各10L，对照药材4L，点在同一薄层板上展开剂 石油醚苯（9.5:0.5） 甲苯-三氯甲烷-丙酮（5:3:1）5检视喷以20磷钼酸乙醇液，在 105加热 10分钟置紫外光灯（365nm）下检视3.1.1.3 供试品的鉴别供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，标法中显相同颜色的主斑点（结果见图1），新法中显相同颜色的荧光主斑点（结果见图2） ，二者阴性对照色谱均无干扰。1.供试品溶液（50L） 1.阴性对照溶液（10L） 24.对照药材溶液（30L、40L、50L） 24.供试品溶液（10L） 5.对照药材溶液（4L）图 1 南板蓝根薄层鉴别图谱（标法） 图 2 南板蓝根薄层鉴别图谱（新法）3.1.2 紫花地丁的薄层鉴别