sod在食品应有中的三个问1

SOD 在食品应有中的三个问题？ 1、SOD 是活性酶，它可否口服？ 2、SOD 是酶，化学本质是蛋白质，经过肠胃会不会破坏？ 3、SOD 是生物大分子，如何通过细胞屏障进入体内？ SOD 口服有效性的研究： 目前，SOD 在临床上的应用研究多采用静脉或腹腔注射方式，关于 SOD 口服的报道 很少。Bernier M 等对小鼠口服 SOD 治疗局部缺血再灌流引起的心室纤维性颤动进行了研 究。结果表明，小鼠口服 SOD 后，分离的心脏因缺血再灌流引起的心室纤维性颤动的发生 率由对照组的 87%降至 27%。颤动发生率随口服剂量变化呈一条 U 行曲线，剂量为 810- 3 IU/L 时，颤动率最低。Marinv G 和 Pastori S 报道了口服 SOD 治疗睾丸变性的研究。服 用 SOD 的 90 名病人均疼痛感消失，且大部分人性功能恢复正常。Dcrevenco P 等的试验结 果说明，Wister 鼠口服 SOD 缓解了服用氯化锰引起的脑组织损伤。这些研究采用口服方式 治疗疾病均有明显的疗效，说明 SOD 口服后可被吸收进入血液起到治疗作用。 除临床外，SOD 越来越广泛的应用于日常生活，SOD 口香糖、SOD 片剂及口服液相 继问世，使口服成为一种重要的使用方式。SOD 这种大分子蛋白质经口服后能否被吸收进 入体内，以怎样的途径被吸收成了迫切需要解决的问题。强美玉等研究了 125I-SOD 灌胃后 在小鼠体内的分布情况。试验结果如下：小鼠灌胃 125I-SOD 后，在血液及肾、肝、脾、心 和肺各器官均有一定量的放射性出现。以 0.2mL125I-SOD 灌胃，血细胞中的放射水平在 3h 达到高峰，随后缓慢下降。各脏器中放射性分布次序为：肾肝肺脾心。肾脏在 高峰时放射性为肝的 8 倍、肺的 33 倍、脾的 72 倍、心的 73 倍。再灌胃 1h 内，残留在肠 胃中的放射水平很好，肠胃腔内容物残留的放射性约占给入量的 60%，随时间延长明显下 降。至 9h 只有 10%左右。这个结果表明，外源 SOD 可经肠胃吸入进入人体内。 药理学认为药物经口服后常发生首过效应，即药物在体内受到氧化、还原、酸解或形 成复合物、化合物等失活作用，从而减少原形药物的吸收量。另外，药物经肠胃道黏膜的 吸收要经过不流动水层、刷毛缘、细胞间隙和细胞基侧膜等几道屏障。药物的理化性质、 肠胃道的运动状态及表面面积、血流速度均影响到药物的吸收。人们对 SOD 在模拟小鼠肠 道环境中受到酸解、酶解等失活作用进行测定，进而研究不同剂量的 SOD 灌胃后小鼠血细 胞中 SOD 的活性变化及速度，并对牛内皮细胞对 SOD 的胞饮作用作了观察，结果如下。 SOD 在胃酸中的保存实验 SOD 在 ph 为 2.5 的盐酸生理水中在 37下保温 150min,残存活性为 84%；在含有 200u/mL 胃蛋白酶的 ph 为 2.5 的盐酸生理水中在 37下保温 150min,残存活性为 82%；通 常一般食物或药物在胃中停留时间为 120min 左右，人体胃酸分泌量为 2000Ml/天，试验条 件远比小树体内恶劣，故可认为 SOD 对小鼠体内的酸碱及胃蛋白酶解有较强的抗性。在肠 道中，SOD 主要受到小肠液中胰酶酶解作用。SOD 在含有 2mg/mL 胰酶的 ph 为 8.6 的磷 酸缓冲液中在 37下保温 210min，残存活性为 83%。实验中胰酶实际上是胰蛋白酶、糜 蛋白酶、羧肽酶 A 和弹性蛋白复合物。以上结果表明： SOD 经灌胃后能够耐受肠道中酸解 和酶解的作用。有 68%左右的 SOD 以活性形式存留下来，这为 SOD 的吸收提供了前提条 件。 SOD 在模拟小鼠肠道环境中稳定性研究 1、SOD 对肠胃的耐受力实验。10LSOD 在 1.2mL 的 ph 为 1.5 的生理盐水HCL 中在 37下保温，每隔 30min 侧其 SOD 活性。实验表明，SOD 在 ph 为 1.5 的生理盐水HCL 溶液中保温，其残存活性百分数随时间缓慢下降，保温 150min 后，残存活性为 84.0%。 2、胃蛋白酶对 SOD 降解试验。10LSOD 溶液和 200L胃蛋白酶溶液在 1.2mL 的 ph 为 1.5 的生理盐水HCL 中在 37下保温，每隔 30min 侧其 SOD 活性。SOD 在 37，ph 为 1.5 条件下与胃蛋白酶共同保温，SOD 残存活性百分比随保温时间而下降，保温 150min 后，残存活性为 82.3%。 3、胰酶对 SOD 的降解试验。10LSOD 溶液和 150L胰酶溶液在 1.0 mL ph 为 8.5 的碳酸 钠缓冲液中在 37下保温，每隔 30min 侧其 SOD 活性。SOD 在 ph 为 8.5 的胰酶溶液中保 温，其残存活性百分数随时间下降趋势。降解反应至 210min,残存活性为 83.1%。 由以上三组实验可知，SOD 是一种对胃酸和蛋白水解酶有较强耐受力的蛋白质，这与他含 有较多的链内二硫键及两个金属辅因子而具有较强的稳定性是一致的。通常情况下食物和 药物在胃和小肠中停留时间分别为 2h 和 4h 左右。SOD 在胃酸、胃蛋白酶的胰酶溶液中保 温相应长的时间，其残存活性分别为 840.%、82.3% 、和 83.1%。也就是说，口服后，大约 有 68%的 SOD 以活性形式参与吸收。这一结果为 SOD 口服经肠胃吸收提供了前提条件。 SOD 灌胃后在小鼠内的分布 SOD 经肠胃道进入后主要随粪便排除。 进入血液的 SOD 主要集中在血浆中，少量存留在红细胞中。 进入人体的 SOD 主要从肾中排出。 口服外源 SOD 完整分子的吸收实验 试验方法 1、小鼠灌胃及取血样。取 2gICR 小鼠，禁食 24h,每只灌胃 0.2ml,内含目标溶于 NaHCO3 溶液（ 1.5g/100Ml,ph=8.2）而 Cu2+溶于 PBS 缓冲液（NaCl8g,KH 2PO40.24g,NaHPO4 0.24g,KCL 0.2g,1000ml,ph=7.4）对照组灌胃相应的 0.2ml 缓冲液；每组 5 只。于灌胃后 一定时间眼眶放血，取血 0.8ml,肝素抗凝，加入预冷的 PBS 缓冲液，3500r/min,15min 离 心；然后 PBS 缓冲液洗三次，每次 1500 r/min，5min 离心.取血红细胞 0.3ml,加入等量去 离子水溶血，然后乙醇、氯仿沉淀，取上清液 SOD 活性及进行 SDS-PAGE. 2、小鼠抗单亚基 SOD 血清的制备。取一定量的 SOD,于变性缓冲液中 （50mmol/l,ph=6.8 TrisHCL,2%SDS, 10mol/l 二硫苏糖醇，20%甘油）混匀，沸水浴 35min,在 4下置 PBS 缓冲液透析液过夜，得到变形的单亚基 SOD。常规免疫小鼠，共 4 次，用免疫双扩散实验测得其对变性单亚基 SOD 的效价为 1：32，分装后于下 保存备用。 变性 SOD 的制备。取单亚基 SOD10mg 在人工胃液（胃蛋白酶 50mg、PH 为 1.52 的 稀 HCL 溶液 5ml）中降解 24h,用 1mol/LNaOH 调 ph 至 7.4 终止反应。 结果分析 1、Cu 2+灌胃对血红细胞 SOD 活性的影响。用含 Cu2+，0.110mol/L 的 PBS 缓冲液 0.2ml 给 ICR 小鼠灌胃，取红细胞上清液测 SOD 活性，未见其活性的显著变化。 2、降解的 SOD 对血红细胞 SOD 活性的影响。降解的 SOD 经测定证实无 SOD 活性， 而且 15%的 SDSPAGE 凝胶已显示不出降解 SOD 片段的大小，可见 SOD 被降解成小分 子的肽段。按每只鼠以 0.5ml 灌胃，以时间对 SOD 的活性变化的百分数作图，降解的无 活性 SOD 可引起细胞内 SOD 活性升高。 3、灌胃完整 SOD 对血红细胞 SOD 活性的影响。分别用每只 0.5mg、2 mg 、5 mg 和 50 mg 的量给小鼠灌胃，侧其 SOD 的活性，了解其对血红细胞的影响。口服完整 SOD 能使血 红细胞中的 SOD 活性随时间变化渐渐升高，然后达到高峰，再慢慢恢复到原有水平。而且 随 SOD 剂量的不同其到达活性最高峰的时间和变化程度略有不同。 结果分析 SOD 生物大分子，M r 为 32kD.虽然实验表明其免疫原很低，但有报道，多次注射 仍有抗体产生，所以口服不仅是一条方便而简单的途径，而且可以避免免疫反应的残存活 性均超过 80%，小鼠口服 10100u/g（体重）SOD 后，12h 内血红细胞中 SOD 活性均呈峰 型增加，峰值变化为 44%100%；吸收的动力学曲线符合 Michaelis-Menten 方程。此外， 牛主动脉内皮细胞培养实验表明：细胞对荧光标记 SOD 有透过作用。黄维华等从放射性标 记的 125I-SOD 和酶活性两方面证实：口服 SOD 后，提高了红细胞内 SOD 的活性，并探究 了其可能的作用机制。Regnault 等研究了小鼠口服 0.520mgSOD/kgSOD 和脂质体包裹的 SOD 以及在脂质体中含 N-脂酰鞘氨醇包裹的 SOD，其生物利用度分别为 14%、22%、51%。 口服 SOD 可能通过降解的外源 SOD 诱导内源 SOD 产生和完整生物大分子进入的途径使血 红细胞的活性升高，进一步证实了 SOD 口服的有效性和持久性。但是降解片段的哪一部分 诱导内源 SOD 的合成以及完整 SOD 大分子进入细胞膜的这种机制是否与报道的特异性 SOD 受体有关等，都还有待进一步的研究；另外，口服吸收的生物利用度也有待通过添加佐剂、 降低肠胃道消化酶的影响等方法来提高。 口服吸收试验一般用放射性标记或荧光标记，事实上，如果 SOD 在肠胃道降解成小分子 进入血液循环，其放射性强度和荧光仍然可在血液中检测出来；另一方面，SOD 降解的某 一些小胎段能穿过细胞膜，也许仍有 SOD 的部分活性，因