8人类免疫缺陷病毒抗体测定标准操作规程

滁州市第一人民医院（南区）检验科 标准操作规程 文件编号：CZYY-NQ-JYK-SOP-MY-008 版本：1 第 1 页 共 5 页 滁州市第一人民医院（南区）检验科 标准操作规程 项目 人类免疫缺陷病毒抗体测定 方法 （双抗原夹心法） 文件编号 CZYY-NQ-JYK-SOP-MY-008 版本 第 1版 文 件 分 发 部 门 和 /或 个 人 ： 医务科保管者 院长办公室保管者 院档案室保管者 检验科主任 临床免疫室 规 程 修 订 记 录 ： 修 订 号 修 订 内 容 修 订 人 修 订 日 期 编 写 者 ： 郑 昕 审 核 者 ： 陶 良 萍 批 准 者 ： 谢 瑞 玉 批 准 日 期 ： 20161101 本 规 程 自 2016 年 11 月 1 日 起 实 施 ， 每 3 年 复 审 一 次 复 审 人 ： 复 审 日 期 ： 滁州市第一人民医院（南区）检验科 标准操作规程 文件编号：CZYY-NQ-JYK-SOP-MY-008 版本：1 第 2 页 共 5 页 1.原 理 采 用 双 抗 原 夹 心 两 步 法 检 测 人 血 清 或 血 浆 中 的 HIV1/HIV2 型 抗 体 。 在 微 孔 板 预 包 被 基 因 重 组 HIV(1+2)型 抗 原 ， 当 加 入 的 待 测 样 本 中 存 在 HIV 抗 体 时 ， 将 反 应 形 成 抗 原 抗 体 复 合 物 ， 再 与 加 入 的 酶 标 记 基 因 工 程 HIV(1+2)型 抗 原 反 应 ， 最 后 形 成 “固 相 HIV 抗 原 -HIV 抗 体 -酶 标 记 HIV 抗 原 ”的 免 疫 复 合 物 ， 加 入 底 物 后 形 成 显 色 反 应 。 2.样 品 要 求 2.1 病 人 准 备 事 项 准备事项 具体内容 禁食/特种饮食 不要求禁食，但由于重度脂血可能干扰检测，禁食样品最佳。 病人的准备事项 安静状态下抽取静脉血， 样品采集特殊要求 采血时应一针见血，切忌反复穿刺，避免溶血 2.2 样品类型及处理方法 样品类型 血清或肝素、枸橼酸钠、EDTA 抗凝血浆 最佳量 5ml 样品量 最少量 3ml 收集容器 肝素抗凝管（绿帽） 运输要求 室温 室温 2小时 冷藏温度（2-8C） 4天 -20C 1月 稳定性及储藏要求 -70C 6月 标本制备 4000转/分离心 5 分钟制备血清/血浆 标本拒收 拒绝采集量不足、肉眼观察有溶血及抗凝剂类型不符的样品 滁州市第一人民医院（南区）检验科 标准操作规程 文件编号：CZYY-NQ-JYK-SOP-MY-008 版本：1 第 3 页 共 5 页 3.试剂 名 称 规 格 储 存 条 件 有 效 期 HIV 预 包 被 微 孔 板 （ 包 被 基 因 工 程 HIV 抗 原 ） 96 人 份 2 8 避 光 保 存 12 个 月 HIV 酶 标 抗 原 （ 含 HRP 标 记 基 因 工 程 HIV 抗 原 ） 1 支 2 8 避 光 保 存 12 个 月 HIV-1 型 阳 性 对 照 （ 含 HIV-1 型 抗 体 ） 1 支 2 8 避 光 保 存 12 个 月 HIV-2 型 阳 性 对 照 （ 含 HIV-2 型 抗 体 ） 1 支 2 8 避 光 保 存 12 个 月 HIV 抗 体 阴 性 对 照 （ 正 常 人 血 清 ） 1 支 2 8 避 光 保 存 12 个 月 浓 缩 洗 涤 液 （ PBS-T 缓 冲 液 ） 2 瓶 2 8 避 光 保 存 12 个 月 底 物 A(含 H2O2) 1 支 2 8 避 光 保 存 12 个 月 底 物 B（ 含 TMB） 1 支 2 8 避 光 保 存 12 个 月 终 止 液 （ 含 H2SO4） 1 支 2 8 避 光 保 存 12 个 月 4.仪 器 名 称 厂 家 型 号 全 自 动 酶 标 分 析 仪 北 京 天 石 SM-3 5.方 法 性 能 5.1 特 异 性 ： 阴 、 阳 性 参 考 品 检 出 情 况 符 合 要 求 。 5.2 灵 敏 度 ： 各 亚 型 的 最 低 检 出 量 符 合 要 求 。 5.3 精 密 性 ： 检 测 精 密 性 参 考 品 ， CV 15%（ N=10） 。 5.4 稳 定 性 ： 试 剂 盒 内 各 组 分 ， 37 放 置 6 天 ， 产 品 性 能 仍 符 合 1-3 项 标 准 。 6.质 量 控 制 滁州市第一人民医院（南区）检验科 标准操作规程 文件编号：CZYY-NQ-JYK-SOP-MY-008 版本：1 第 4 页 共 5 页 6.1 设 置 阴 、 阳 对 照 6.2 失 控 规 则 ： 阴 性 对 照 OD 均 值 0.1 或 者 阳 性 对 照 OD 均 值 0.6 7.操 作 步 骤 7.1 平 衡 ： 将 试 剂 盒 各 组 分 从 盒 中 取 出 ， 平 衡 至 室 温 ， 微 孔 板 开 封 后 ， 余 者 即 时 以 自 封 袋 封 存 。 7.2 配 液 ： 浓 缩 洗 涤 液 配 制 前 充 分 摇 匀 ， 浓 缩 洗 涤 液 和 蒸 馏 水 或 去 离 子 水 按 1:19 稀 释 后 使 用 。 7.3 编 号 ： 取 所 需 数 量 微 孔 条 固 定 于 支 架 ， 按 顺 序 编 号 。 7.4 加 样 ： 分 别 在 相 应 孔 中 加 入 50ul 阴 、 阳 性 对 照 血 清 和 待 测 样 本 50ul。 7.5 温 育 ： 封 板 后 ， 置 37 温 育 60 分 钟 。 7.6 洗 涤 ： 用 洗 涤 液 充 分 洗 涤 5 次 ， 洗 涤 后 扣 干 。 7.7 加 酶 ： 分 别 在 每 孔 中 加 入 酶 标 记 抗 体 100ul。 7.8 温 育 ： 封 板 后 ， 置 37 温 育 30 分 钟 。 7.7 洗 涤 ： 用 洗 涤 液 充 分 洗 涤 5 次 ， 洗 涤 后 扣 干 。 7.8 显 色 ： 每 孔 加 入 底 物 A、 B 各 50ul， 混 匀 ， 置 37 温 育 30 分 钟 。 7.9 终 止 ： 每 孔 加 入 终 止 液 50ul， 混 匀 。 7.10 测 定 ： 用 酶 标 仪 双 波 长 450nm/630nm 测 定 各 孔 OD 值 ， 并 记 录 结 果 。 8.结 果 判 定 样 本 OD 值 S/C.O. 1 者 为 HIV 抗 体 反 应 初 筛 阳 性 样 本 OD 值 S/C.O. 1 者 为 HIV 抗 体 反 应 阴 性 初 筛 阳 性 者 应 重 新 取 样 进 行 双 孔 复 试 ， 复 试 阳 性 者 应 按 照 “全 国 HIV 检 测 管 理 规 范 ”送 HIV 确 认 实 验 室 进 行 相 关 确 认 试 验 。 9.危急值及处理 无。 10.临床意义 适用于 HIV(1+2)型抗体的辅助诊断及献血员筛查。可以有效的减少疾病的传播扩散。 滁州市第一人民医院（南区）检验科 标准操作规程 文件编号：C