peg沉淀法-病毒提纯方法

1. Viruses such as baculovirus can be concentrated by polyethylene glycol precipitation. 2. Adjust the pH of the virus-containing supernatant to 7.2-7.5. Polyethylene glycol (PEG, MW 6,000) is added to a final concentration of 8% (w/v). 3. Stir at 4for 2 hours. 4. Centrifuge at 10,000 x g for 2 hours. 5. Resuspend the pellet in a small volume of appropriate buffer ( e.g., RNase-free ddH2 for virus RNA prep). 沉淀法-病毒提纯方法 主要是从稀的悬浮液中浓缩病毒，有中性盐沉淀法、聚乙二醇(PEG)沉淀法、有机溶剂沉淀 法、等电点沉淀法、 皂土法和鱼精蛋白沉淀法等。 1.中性盐沉淀法：病毒一般在 45%以上饱和度的硫酸铵溶液中沉淀，且保持其感染性。在含有病毒的组织培养液 中加入等体积的饱和硫酸铵，可以很容易地沉淀某些病毒如狂犬病毒、鸡新城疫病毒等。 2.聚乙二醇沉淀法：聚乙二醇(PEG)为水溶性非离子型聚合物，具有各种不同的分子量，用于病毒沉淀的主 要是 分子量为 2 0006000 的 PEG。将 PEG 配成 50%左右的溶液，或直接将固体 PEG 加于病毒悬液中，使其达到所需 浓度，通常在 4搅拌过夜，然后离心使病毒沉淀。Tanncock(1985 年) 成功地用 PEG 浓缩了禽脑脊髓炎病毒。 3.有机溶剂沉淀法：甲醇、氯仿、正丁醇、氟碳化合物等都可用于提纯病毒，但乙醚、氯仿等脂溶剂对于具有脂质 囊膜的病毒具有破坏和灭活作用，故不适于这类病毒的浓缩提纯。 4.等电点沉淀法：病毒粒子在等电点时，所携带的正电荷与负电荷相互中和，因而失去相互排斥的作用而发生沉 淀。多数病毒的等电点在 pH4.55.5 之间，因此在 pH3 6 范围内均可沉淀，由于一部分细胞成份在等电点时亦 发生沉淀，此法效果不太理想，但从感染的组织培养液中浓缩病毒，可以获得较好结果。应用酸性范围的等电点 沉淀或分级沉淀病毒时，必须注意 pH 对病毒活性的影响及病毒粒子电荷与组织蛋白电荷的差异。 5.皂土法：Girin(1989 年) 应用皂土在酸性条件下(pH44.5)吸附轮状病毒 SA-11，再在碱性条 件下（pH8.5） ，又 使其洗脱下来，从而达到纯化目的。 6.鱼精蛋白沉淀法：鱼精蛋白为碱性蛋白，具有携带其它蛋白质共沉淀的作用，能和直径大于 50nm 的病毒共同 沉淀而不影响病毒的感染力。当向这种沉淀物加入 1mol/LNaCl 时，病毒又重新释放到悬液中，而鱼精蛋白仍然沉 淀。直径小于 50nm 的小型病毒则不与鱼精蛋白共同沉淀。因此，可利用鱼精蛋白去除病毒材料中直径大于 50nm 的异种蛋白质。 聚乙二醇 HOCH2(CH2OCH2)nCH2OH(n4)( Polyethylene Glycol 简写为 PEG)，它的亲水性强，溶于水和许多有 机溶剂，对热稳定，有广泛围的分子量，在生物大分子制备中，用的较多的是分子量为 600020000 的 PEG。 PEG 的沉淀效果主要与其本身的浓度和分子量有关，同时还受离子强度、溶液 pH 和温度等因素的影响。在一定 的 pH 值下，盐浓度越高，所需 PEG 的浓度越低，溶液的 pH 越接近目的物的等电点，沉淀所需 PEG 的浓度越 低。在一定范围内，高分子量和高浓度的 PEG 沉淀的效率高。以上这些现象的理论解释还都仅仅是假设，未得到 充分的证实，其解释主要有：认为沉淀作用是聚合物与生物大分子发生共沉淀作用。由于聚合物有较强的亲 水性，使生物大分子脱水而发生沉淀。聚合物与生物大分子之间以氢键相互作用形成复合物，在重力作用下形 成沉淀析出。通过空间位置排斥，使液体中生物大分子被迫挤聚在一起而发生沉淀。 有机聚合物沉淀的优点是：操作条件温和，不易引起生物大分子变性；沉淀效能高，使用很少量的 PEG 即可 以沉淀相当多的生物大分子；沉淀后有机聚合物容易去除。 水溶性非离子型聚合物沉淀法常用的聚合物为聚乙二醇（PEG）及硫酸葡聚糖。水溶性聚合物沉淀蛋白质的机制 尚不清楚，大致有如下解释：聚合物与蛋白质形成共沉物；聚合物与蛋白质之间发生水的重分配；聚合物 与蛋白质形成复合物。此法受许多因素影响，主要是 pH、离子强度、蛋白质浓度和 PEG 的分子量等。分子量为 20006000 的 PEG 皆适宜于做蛋白沉淀用。如若使用得当，效果甚为满意。一般认为，PEG 浓度在 34时 沉淀免疫复合物，67可沉淀 IgM，812可沉淀 IgG，1215可沉淀其他球蛋白，25可沉淀白蛋 白。最突出的应用是用 34的 PEG 沉淀免疫复合物，未结合的抗原和抗体留在溶液中。按此原理设计了快速 测定法和循环免疫复合物测定法 从网上搜索到得关于 PEG 沉淀提纯病毒的方法，先汇总至此贴，希望大家支持本版 1、用超声波或冻融的方法使细胞破碎释放出病毒； 2、慢慢搅动并加入 NaCl 终浓度是 0.5mol/L,有助于病毒的沉淀，再等量加入 10PEG(一般使用的是 PEG6000 就可以了。如果对样品的纯度不是严格要求的话，可以建议使用 Millpore 公司的离心浓缩柱，Amicon 系列的可以 一次浓缩 15ml 样品。)； 3、4过夜或放置一段时间； 4、8000/min 离心 30 分钟，收集病毒沉淀； 5、将病毒沉淀加入适量的 pbs 中，4过夜； 6、10000r/min 离心 1 小时,沉淀即为浓缩的病毒。 还可以用梯度离心或其他方法进一步纯化 。 PEG 沉淀法提纯病毒 1、用超声波或冻融的方法使细胞破碎释放出病毒； 2、慢慢搅动并加入 NaCl 终浓度是 0.5mol/L,有助于病毒的沉淀，再等量加入 10PEG(一般使用的是 PEG6000 就 可以了。如果对样品的纯度不是严格要求的话，可以建议使用 Millpore 公司的离心浓缩柱，Amicon 系列的可以一 次浓缩 15ml 样品。)； 3、4过夜或放置一段时间； 4、8000/min 离心 30 分钟，收集病毒沉淀； 5、将病毒沉淀加入适量的 pbs 中，4过夜； 6、10000r/min 离心 1 小时,沉淀即为浓缩的病毒。 还可以用梯度离心或其他方法进一步纯化 。 Concentrating virus (PEG6000) - 1. Viruses such as baculovirus can be concentrated by polyethylene glycol precipitation. 2. Adjust the pH of the virus-containing supernatant to 7.2-7.5. Polyethylene glycol (PEG, MW 6,000) is added to a final concentration of 8% (w/v). 3. Stir at 4 0Cfor 2 hours. 4. Centrifuge at 10,000 x g for 2 hours. 5. Resuspend the pellet in a small volume of appropriate buffer ( e.g., RNase-free ddH2 for virus RNA prep). PEG-it慢病毒浓缩试剂 价 格： ￥3802.5 说 明： 欢迎询价详谈 货 号：LV810A-1 PEG-it慢病毒浓缩试剂 原理 PEG 是高分子聚合物，具有高亲水性，在溶液中会吸收大量水分，减少病毒之间的距离，使病毒与病毒能够很容 易的聚合在一起，病毒的相对浓度提高，达到沉淀浓缩的目的。 PEG-it中还含有特定的（SBI 专属的）缓冲液，它能够保持病毒的活性。少量残留的 PEG-it还会提高感染效率， 使病毒更稳定。 图 1 使用简便快捷 只需将 5 倍的 PEG-it溶液与包含病毒颗粒的细胞培养基混合离心 30 分钟，即可得到 10-100 倍的病毒浓缩液 特点 快捷：全程只需 30min 高效：能使病毒颗粒浓缩 10-100 倍 安全：对所有靶细胞，包括胚胎干细胞是无毒的 使用方便：无需使用特别的仪器，避免了昂贵的超高速离心机的使用，只需普通离心机，低速离心即可 无残留：没有细胞残片的残留，避免对细胞的毒性和免疫原性 提高转导效率：为动物转导提供高滴度的病毒 特别适合大体积的病毒浓缩，解除了超滤管小量的限制 产品信息 货号 产品名称 包装体积 价格 （￥） 说明 LV810A-1 PEG-it Virus Precipitation Solution (100 mL aliquot) 100 mL 3802.5 适用于 400ml 慢病毒细胞上清液 浓缩 LV825A-1 PEG-it Virus Precipitation Solution (250 mL aliquot) 250 mL 8287.5 适用于 1L 慢病毒细胞上清液浓缩 纯化病毒用终浓度 10%PEG 处理后 8000g 离心，溶解于 PBS。这样的方法对吗？ PEG 沉淀的原理是什么啊？ 是这样的，纯化病毒和噬菌体都可以，原理就是 PEG8000 是一种高度的网状聚合物，很粘稠，可以把病毒沉淀下 来。 Catalog # Product Name+ Size Price Buy Now K904-200 PEG Virus Precipitation Kit 200 preparations $725.00 K904-50 PEG Virus Precipitation Kit 50 preparations $245.00 PEG Virus Precipitation Kit 中文名称 PEG 病毒沉淀试剂盒(200 次 ) 供应商 Biovision 产品货号 K904-200 产品报价 ￥11600/200 次分析 背景资料 包装出来的重组病毒常常含量很少，因此通常需要浓缩之后才能进行储存或其它应用。另外，在 病毒包装过程中，可能会产生有毒的蛋白或生物分子杂质。因此需要一种快速、简单而便宜的方 法来浓缩病毒，同时去除杂质。 产品描述 BioVision 的 PEG 病毒沉淀试剂盒提供了一种简单方便省时的方法来浓缩病毒，无需超速离心。本 试剂盒可用于小实验样品处理或者大规模高产出、高生物量病毒制备。本试剂盒可利用细胞培养 液或者环境样品浓缩逆转录病毒、杆状病毒、慢病毒、噬菌体等。浓缩倍数可达 100 倍以上。试 剂盒中还有一种优化的重悬溶液可最大化地进行病毒复苏，根据病毒类型和来源，复苏比例在 40- 100%不等。整个过程都使用无毒试剂，浓缩的病毒可用于感染实验、DNA 或 RNA 纯化等。 产品特点 1、一种快速简单便宜的方法浓缩病毒去除杂质；2、简单方便省时的方法浓缩病毒，无需超速离心；3、病毒可浓缩 100 以上；4、整个过程都使用无毒试剂。 保存建议 请在接收到该 Biovision 品牌的 PEG 病毒沉淀试剂盒(200 次) 产品后，置于-20保存。 PEG Virus Precipitation Kit 中文名称 PEG 病毒沉淀试剂盒(50 次) 供应商 Biovision 产品货号 K904-50 产品报价 ￥3920/50 次分析 超速离心法-病毒提纯方法 录入时间:2009-6-26 9:30:33 来源：青岛海博 病毒粒子经过初步浓缩之后，要进一步纯化，通常采用超速离心法，它是分离提纯不同大小的病毒的有效方法之 一。在应用超速离心法沉淀病毒时，必须了解所用离心机的离心力。离心机由于转头的回转产生了强大的离心力， 这种离心力是随转头的大小和离心管至转轴中心的距离而变化的。高速和超速离心机的离心条件，有的以每分钟 速度(r/min) 表示，有的则以离心力重力加速度 g(980cm/S2)为单位来表示。离心沉淀时，沉降速度与离心力 有关。当运转角速度为 ，运转半径为 R 时，则：JZ 离心力 g=2Rav，=(2r/min)/60，JZg=SX( 4r/min23600980SX)RavHT5”SSJZ图 13-2角转头的横剖面图JZ 表明从旋转中心到离心管 顶部、中部及底部的距离。HT5SS 上式中，Rav 为离心管中心至转轴中心的平均距离(如图 13-2)。从上式 可以作出 r/min、R 与 g 三者关系的贯线图(如图 13-3)。三者中如知其二，就可推算另一数值。如转速超过 7 万， 或 R 为英寸时，可参阅图 13-4。HT5”SSJZ 图 13-3推算转头离心力的贯线图JZ 图 13-4推 算转头离心力的贯线图 由此图可以获得与半径相关的相对离心力的值。将尺放在图左侧表示离心头中的离心管 距转轴中心的距离(即旋转半径的标尺 )上，然后使之与预选转速(即图右侧的离心速度标尺) 成一直线，在图中央的 标尺上即可读出相对离心力之值。图中点线表示测量一个相对离心力的例子。HT5SS 离心机转速在 4000r/min 左右的称为低速(普通)离心机；转速至 25000r/min 左右的 称为高速离心机；转速 25000r/min 以上的称为超速离 心机。高速和超速离心机装有冷冻装置和抽真空 装置，以保持离心腔中恒定的低温，并减少转头运转时空气的摩 擦力。超速离心机有制备和分析用两类，最近又生产出制备、分析及区带连续离心三用装置在一起的离心机，有 的还带扫描装置。 使用超速离心机的分离提纯方法有三种：(1)差速离心法；(2) 速度区带离心法；(3)平衡密 度梯度离心法(或等密度梯度离心法 )。 1.差速离心法 这是应用较早的简单方法，建立在不同大小和比重的粒子在沉降速度上存在差别的基础上。具体做法是将被分离 的样品交替进行低速离心与高速(或超速) 离心。沉降速度差别在一个或几个数量级的粒子，可用本法分离提取。粒 子大小、转速与离心沉淀时间的关系，如图 13-5。HT5”SSJZ 图 13-5病毒粒子大小、转速及离心沉淀 时间的关系图HT5SS 差速离心适用于从组织培养液、鸡胚尿囊液或经过红细胞吸附 释放的病毒 悬液中提纯 病毒。在由感染细胞或组织匀浆中提取病毒时，由于与病毒大小相近的细胞亚单位及碎片的存在，提纯效果不理 想。差速离心法的优点是能迅速处理大量样品，故常作为病毒精制的第一个阶段，或者用于病毒样品的浓缩和粗 提。 以差速离心法分离提纯病毒时，经常以低速 (20003000r/min，2030 分钟)及中 速(10 000r/min，2030 分钟)去除较大的宿主细胞碎片、污染的细菌及其他较大的杂质。然后，选择在 60 分钟内能够 沉淀 80%以上的病毒粒子的较高速度，离心 12 小时，使病毒沉淀 。对中、大型病毒如流行性感冒病毒，在经 红细胞吸附 释放后，于 25000r/min 离心 60 分钟，即可达到目的。小型病毒如脊髓灰质炎病毒、披膜病毒，则 需以 3500045000r/min 离心 12 小时。高速或超速离心沉淀物，可用研磨和超声波振荡等方法打碎后悬浮于缓 冲液中。对于非病毒杂质较多的样品进行差速离心，由于病毒对沉淀物的非特异性吸附而有较多损失。 2.速度区带离心法 是根据被分离物质在强大离心力中沉降速度不同而进行的分离方法。该法使用的介质密度应该小于被分离物质的 密度。介质可以为均一密度，也可以为梯度密度。当被分离的物质沉降到与介质密度相等的区域时就不再沉降。 不同分子形成不同的区带，而称为速度区带。该法要求样品浓度为顶端浓度梯度的 1/10，样品体积为离心管体积 的 5%。常用的介质有蔗糖、甘油、聚蔗糖等。在病毒纯化时，将病毒样品溶液层加于密度梯度层的顶部，借助病 毒粒子或其亚单位成分本身的浮密度差别，在离心力作用下降到密度相等的介质层内，最后排列成带状停留不动。 密度较小的粒子或成分停留在上面的几层内，密度较大的粒子或成分沉降于下面几层内。应用密度梯度法，可以 获得相当纯净的病毒样品。病毒粒子或成分的沉降速度取决于其大小、形状及比重，也取决于离心力及悬液介质 的密度和粘度。蔗糖是生物大分子粒子密度梯度分离时最常应用的材料，因其易溶于水，且对核酸及蛋白质呈化 学惰性。常用的梯度范围从 5%20% ：10%60% 。蔗糖浓度梯度离心后，蔗糖溶液的密度以折射法测定折射率， 按如下公式计算：JZ=2732920-26425 蔗糖溶液的折射率如表 13-2。 除蔗糖浓度连续梯度离心 外，近来有人在两层浓度梯度上层加病毒浓缩样品，经超速离心后将病毒收集于两层界面处；也有人在单层蔗糖 浓度溶液上层加病毒浓缩样品，经超速离心，使病毒沉淀于蔗糖溶液底部。这两种方法比较简单，但浓缩提纯的 效果远远不如多层连续梯度法。 3.平衡密度梯度离心法 平衡密度梯度离心法是根据粒子的浮密度不同而加以分离。所谓浮密度就是物质的质量减去在一定介质中所受的 浮力，亦称有效密度。JZ 浮密度(有效密度)=m-m(0/)m 为物质质量， 为物质密度，0 为介质密度。常 用的介质有氯化铯(CsCl)、氯化铷 (RbCl)、硫酸铯(Cs2SO4) 、溴化钾(KBr) 、酒石酸钾(K2C4H4O6) 等无 机或有机盐。病毒离心时，病毒粒子 比介质密度 0 大，即 0 病毒沉淀，0 时则上浮。制备梯度的 方法有两种：一种是在饱和的 CsCI 溶液上面层加病毒样品(容量比 14)； 另一种是将病毒样品与 CsCl 浓溶液均 匀地混合。一般用水平转头，经较长时间的超速离心，在离心管中形成 CsCl 的浓度梯度，并由于离心力的作用， 样品中的病毒粒子分布于相应密度的区域内。这种方法在分析离心中是最常用的。应用本法时，离心转头的回转 数越高，离心时间越长，越能接近平衡状态。 平衡密度梯度离心法广泛应用于病毒和核酸的提纯上。用平 衡密度梯度离心法提纯的动物病毒有多型瘤病毒、牛痘病毒、乙型脑炎病毒、狂犬病病毒和马传贫病毒等。有的 病毒在这些无机盐类溶液中被破坏，可加入 02%05% 牛血清白蛋白，或用 05%30% 甲醛先将病毒粒子 固定，然后进行平衡密度梯度离心，常能较好地回收病毒。大多数病毒的浮密度在 110140 范围内，见表 13- 3。所以制备密度范围为 1017 的悬浮介质，便可满 足大多数病毒密度梯度离心的需要。用 CsCl 溶液进行平 衡密度梯度离心时，以测定 25时 CsCl 溶液的折射率( 25D 的方法)，按照下列公式求得各梯度分层液的 密度： 密度范围为 100 138g/cm3 时，25=102402 25D-126423 (式 1)密度范围为 =13719g/cm3 时，25=108601 25D-134974 (式 2)25D 指各梯度分层液在 25时的折射率，25 指各梯度分层液在 25时的密度。 例以马传贫病毒在 CsCl 平衡密度梯度离心后 提纯于第 12 分段部位中，此部分 CsCl 溶 液折射率为 13510，求其密度： 将所得折射率代入式 1 中，则 JZ 25=10240213510-126423=11923 即马传贫病毒浮密度约为 119。 例急性传 贫马血清中游离铁蛋白在 CsCl 平衡密度梯度离心后提纯于第 18 分段部位 ，此部分 CsCl 溶液折射率为 13811， 求其密度： 将所得折射率代入式 2 中，则JZ 25=10680113811-134974=15014 即铁 蛋白浮密度约为 150。 各种无机盐溶液的密度与折射率的关系，一般以下列公式表示： JZ =an-b 如果知道各种盐类溶液的系数 a 和 b，即可按测定折射率的方法简单地求得其密度。由折射率计算密度时，常用溶 质的质数 a 和 b 值及其密度的适用范围如表 13-5。 4.两种超离方法的比较 速度区带离心法和平衡密度梯度离心法各有特点，现将这两种超离方法加以比较，具体见表13-6JZHT5”H 表 13-6速度梯度离心法与平衡密度梯度离心法的特点 HT6SSBG(! BHDFG2，WK11，WK20ZQ，WK20ZQW速度区带离心法平衡密度梯度离心法BHDG4原理 沉降与颗粒质 量成正比，以物质沉降速度的不同进行分离沉降与颗粒的密度成 正比，以物质的浮密度不同进行分离BHDG6 介质密度小，如蔗糖、甘油、聚蔗糖，蔗糖浓度 10%67%，密度 113286 预制梯度， 不连续密度大，如 CsCl,Cs2SO4，CsCl 浓度 01355 ，密度为 119025 ，自成连续梯度BHG4离心力场强，离心速度高， 使被分离物质易沉降稍强，速度相对低，使 CsCl 形成梯度，建立沉降扩散平衡BHG4离心过程样品向离心管 底沉降不论样品起始时在什么位置，离心中样品停留于介质 的等密度部位BHG2 离心时间 较短，一般为几小 时到几十小时较长，十几小时到数天BG)F 5.密度梯度离心法的操作程序 (1)密度梯度的制备：制备密度梯度的方法有不连续的(即人工操作)和连续的(即机械操作) 密度梯度两种。 不连续的或分层的密度梯度的制备 不连续的密度梯度是以人工操作法制备的，在一定温度下(一般在 20或 在 25)配制一系列浓度差为 5%的梯度溶液，例如蔗糖可配制成 5%、10%、15% 、20%、25%、30%、35% 、 40%(W/V)等溶液(用蒸馏水或适宜的缓冲液配制)，用皮下注射器或微量吸管，小心地先吸取浓度最大的溶液注入 离心管底，然后依次加入较低的各个浓度(40%5%)，一层覆盖着一层地层加于离心管中，注意避免产生气泡。假 如各层界面被冲动破坏，则应重新制备。也可以将长针头插入管底，依次从浓度低到高加入各溶液。 连续 的密度梯度的制备 为了产生一个连续的密度梯度，常用梯度混合装置来制备梯度。 HT5”SS JZ图 13-6简易的密度梯度溶液制备装置JZA 、B 为盛蔗糖溶液的玻璃管。JZ1 活塞双通；2 搅拌棒； 3活塞；4 连接处；5 聚乙烯小管HT5SS 梯度混合装置如图 13-6，由 A 和 B 管组成。两管之间用双通活塞 联结。在活塞关闭的状态下，向 A 管中加入低浓度蔗糖溶液，向 B 管中加入高浓度的蔗糖溶液，两管中容量要相 等。在 B 管出口处用一根聚乙烯小管连接到离心管。在给 B 管充液时，可将聚乙烯小管的流出口向上转动，使之 超过液体的水平面，从而阻止液体流出。充液后可将小管接到离心管中使之贴着管壁，然后开动小搅拌器，使搅 拌棒转动，同时打开两管间活塞。这三个操作要同时进行，以保证梯度的连续性。当梯度液体自 B 管流出时不允 许移动离心管，待离心管中所盛的梯度溶液的体积达到需要量之后，将离心管小心地静止于 412 小时，以平 衡之。 现在不少“制备用超速离心机”携带有“ 密度梯度制备自动装置 ”。按照这个方法制备的蔗糖浓度梯度，理 论上按下式计算：JZC=CA-(CA-CB)(1-V)-b/aA 管和 B 管的横断面积各为 a、b，其中所含蔗糖浓度 分别为 CA、CB ，两液开始混合以后流出 Vml 时流出液的浓度为 C。A 和 B 管的横断面积一般情况下相等， 故 a=b，这时获得的梯度为直线梯度。如果 ab 时，离心管中浓度梯度产生凸形和凹形梯度曲线。这些浓度梯度是 根据样品和实验目的而专门选用的。一般使用的浓度梯度范围为 20%5%，40%10% ，或 60%10%等。 (2)加入样品：用如上所述注射器或微量吸管吸取悬浮于适宜缓冲液中的病毒或核酸样品( 约梯度介质体积的 1/10 容 量)，从液面上方 1mm 处，紧贴着离心管壁轻轻层加于梯度介质面上。 (3)高速或超速离心：将加入样品的离心管装入套管内，也可将离心管置于转头的套管内，以免在装进套管时震动 液体。拧紧套管螺帽，将套管吊在水平转头上，置于离心机内。梯度离心一般用高速或超速离心机。离心速度和 时间，根据所分离的样品选定。离心开始，样品中各种粒子逐渐分离，分布于相应的密度梯度层中成为带状(如为 透明的聚碳酸酯离心管，则可以清楚地见到带状分离，并拍照)。离心时间到时，使离心机自然停止，不许制动， 以免破坏梯度。 (4)梯度的分段收集(取样)：在离心完了以后，为了把已分离物质的各条带分开，必须取出梯度溶液。梯度溶液的分 段收集方法有如下几种。 取代法：从离心管底部穿刺或将带长针头的注射器插入