奥氮平有关物质usp方法确认

摘 要 奥 氮 平 主 要 适 用 于 各 种 精 神 分 裂 症 及 其 相 关 障 碍 的 急 性 期 治 疗 和 巩 固 治 疗 ， 对 阳 性 症 状 （ 妄 想 、 幻 觉 、 思 维 障 碍 、 敌 意 和 猜 疑 等 )和 阴 性 症 状 （ 情 感 淡 漠 、 情 感 和 社 会 退 缩 、 言 语 贫 乏 )均 有 肯 定 的 疗 效 5。 奥 氮 平 亦 可 缓 解 精 神 分 裂 症 所 继 发 的 情 感 症 状 6。 对 于 治 疗 有 效 的 病 人 ， 奥 氮 平 可 用 于 巩 固 治 疗 ， 保 持 其 临 床 缓 解 状 态 7。 奥 氮 平 杂 质 方 法 被 USP36 版 所 收 载 ， 使 用 HPLC 方 法 检 测 药 物 的 有 关 杂 质 1。 药 品 作 为 一 种 特 殊 的 商 品 ， 药 品 质 量 的 优 劣 性 直 接 关 系 到 用 药 者 的 健 康 与 生 命 安 全 2。 因 此 ， 必 须 对 药 品 质 量 实 行 全 面 的 控 制 ， 以 确 保 人 们 用 药 的 安 全 、 合 理 和 有 效 4。 药 品 确 认 的 项 目 一 般 包 括 专 属 性 ， 系 统 适 用 性 ， 重 复 性 （ 包 括 精 密 度 和 中 间 精 密 度 ） ， 定 量 限 ， 检 测 限 ， 溶 液 稳 定 性 ， 耐 用 性 等 。 根 据 日 常 使 用 的 要 求 ， 需 要 对 实 验 中 使 用 到 的 一 些 溶 液 的 稳 定 性 进 行 考 察 3。 当 所 有 的 确 认 都 符 合 接 受 标 准 的 情 况 下 ， 我 们 认 为 该 药 典 方 法 适 用 于 应 用 实 验 室 的 检 测 ， 并 用 于 控 制 产 品 质 量 12。 关 键 词 ： 奥 氮 平 方 法 确 认 2 目 录 一 、 所 用 试 剂 及 样 品 4 二 、 方 法 描 述 4 （ 一 ） 色谱条件 4 （ 二 ） 溶液配制 5 （ 三 ） 系统适应性及操作步骤 5 （ 四 ） 计 算 公 式 6 三 、 验 证 内 容 6 （ 一 ） 专属性 6 （ 二 ） 系统适应性 7 （ 三 ） 精密度 7 1、重复性（精密度实验 1） 7 2、中间精密度（精密度实验 2） 8 3、中间精密度（精密度实验 3 ） 9 （ 四 ） 定量限/检测限（LOQ/LOD） 10 （ 五 ） 溶液稳定性研究 13 （ 六 ） 耐用性 15 四 、 结 论 17 五 、 参 考 文 献 18 宜顺论文网 www.13LW.com 一 、 所 用 试 剂 及 样 品 名 称 级 别 批 号 /含 量 （ 若 适 用 ） 来 源 磷 酸 分 析 级 20121212/T20100318 国 药 集 团 化 学 试 剂 有 限公 司 氢 氧 化 钠 分 析 级 20091110/20130111 青 山 化 工 试 剂 有 限 公 司 乙 腈 色 谱 级 I669430303/IB0IF60082 MERCK 分 析 级 20121030 国 药 集 团 化 学 试 剂 有 限公 司EDTA 二 钠 色 谱 级 K36473818646 MERCK 十 二 烷 基 硫 酸 钠 色 谱 级 026FC26F0512 GFCO Chemical 水 纯 化 水 每 日 新 鲜 海 正 药 业 制 备 奥 氮 平 氯 甲 基 氯 化 物 标 准 品 13-BHW-118-6/98% TRC 奥 氮 平 有 关 物 质 A 标 准 品 F0H156/GOK232 USP 奥 氮 平 有 关 物 质 B 标 准 品 F0H160/GOK318 USP 标 准 品 1301/99.2% 海 正 药 业 标 定 标 准 品 1001/99.8% 海 正 药 业 标 定 奥 氮 平 样 品 100801-B、 100802- B、 100803- B、 090921 海 正 药 业 生 产 METTLER XP205 已 校 正电 子 分 析 天 平 METTLER XP6 已 校 正 Agilent 1260/1100 已 校 正 Shimadzu LC-20A/LC-2010C 已 校 正高 效 液 相 色 谱仪 Waters 2695 已 校 正 pH 计 METTLER S20 已 校 正 色 谱 柱 信 息 Agilent ZORBAX SB-C8 4.6250mm 5mPN： 880975-906 二 、 方 法 描 述 1 （ 一 ） 色谱条件 缓冲液：取 13g 十二烷基硫酸钠溶于 1500ml 水中，加入 5ml 磷酸，用氢氧化钠 4 调节 pH 至 2.5。 溶剂：取约 55mgEDTA 二钠溶于 1500ml 缓冲液中，该溶液与乙腈为 3：2。 流动相 A：缓冲液：乙腈=52：48，过滤脱气。 流动相 B：乙腈：缓冲液=70：30，过滤脱气。 流动相：梯度洗脱。 时间（min） 流动相 A (%，V/V) 流动相 B (%，V/V) 0 100 0 10 100 0 20 0 100 25 0 100 27 100 0 35 100 0 色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C8,4.6250mm,5m 流速：1.5ml/min 检测波长：220nm 进样量：20l 柱温：35 进样室温度：5 （ 二 ） 溶液配制 2 分离度溶液：取适量的奥氮平标准品，奥氮平 USP 相关物质 A 标准品、奥氮平 USP 相关物质 B 标准品溶于稀释液，得到奥氮平的浓度约为 20g/ml，相关物 质 A 与相关物质 B 的浓度分别为 2g/ml。 标准溶液：准确称取适量的奥氮平标准品，溶于稀释液，配成的浓度约为 0.002mg/ml（例如 20mg100ml，移取 1ml100ml） 。 样品溶液：准确称取 20mg 的奥氮品样品于 50ml 的容量瓶中，用稀释剂溶解并 稀释到刻度，摇匀。 （ 三 ） 系统适应性及操作步骤 进样溶剂，记录色谱图，应无干扰峰，取分离度溶液进样，记录峰响应，根据其 RRT（见下表 1）鉴别各峰，奥氮平有关物质 A 与奥氮平的分离度应不小于 3.0， 拖尾因子（以奥氮平峰计）应不大于 1.5，连续进样标准溶液 6 针，奥氮平峰面 积的 RSD 应不大于 2.0%。系统符合后进样品溶液。 表 1 峰鉴别 相对保留时间 (RRT) 相对响应因子 (RRF) 限度(%) 奥氮平有关物质 B 0.3 2.3 0.10 奥氮平有关物质 A 0.8 2.3 0.10 奥氮平 1.0 / / 宜顺论文网 www.13LW.com 奥氮平氯甲基氯化物 1.1 1.0 0.15 单个非特定杂质 / / 0.10 总杂质 / / 0.4 （ 四 ） 按下式计算奥氮平有关物质 B、奥氮平有关物质 A、奥氮平氯甲基氯化物、 单个非特定杂质、总杂质的含量： （PC s/Cu） （r i/rs ） （1/F） F 为各杂质的相对响应因子（RRF） ，见上表 1； Cu，C s分别为样品溶液与对照溶液中的配制浓度（mg/ml） ； rs为对照溶液所对应的主峰响应值； ri为样品溶液所对应的各杂质响应值； P 为对照品的含量，%。 三 、 验 证 内 容 （ 一 ） 专属性 专属性是指在其他组分（杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的分析方 法能准确地测出被测组分的特性。现通过对奥氮平及各个已知杂质进行色谱定位 分析来进行专属性研究 10 11。 分离度溶液：准确称取奥氮平标准品 20.007mg，有关物质 A 标准品 2.011mg， 有关物质 B 标准品 2.025mg，置于同一 10ml 容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，准 确移取 1.0ml 至 100ml 容量瓶中，用溶剂稀释至刻度。 奥氮平氯甲基氯化物储备液：准确称取奥氮平氯甲基氯化物 2.16mg 至 20ml 容量 瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，混匀。 奥氮平氯甲基氯化物溶液：准确移取奥氮平氯甲基氯化物储备液 1.0ml 至 100ml 容量瓶中，用溶剂稀释至刻度。 进样溶剂、分离度溶液、奥氮平氯甲基氯化物溶液，记录峰响应值。实验结果见 表 2。 表 2.专属性结果 各峰分离情况 峰名称 RT（min） RRT USP 参考 RRT 奥氮平有关物质 B 3.821 0.2 0.3 奥氮平有关物质 A 11.035 0.6 0.8 奥氮平 18.573 1.0 1.0 奥氮平氯甲基氯化物 19.471 1.1 1.1 由上表数据可知，各已知杂质的 RRT 与 USP 中参考值基本一致，各杂质均能够分 离开，溶剂峰（2013050900.lcd）无干扰，说明此有关物质方法专属性良好。 （ 二 ） 系统适应性 对仪器分析方法在进行验证时，将分析设备、电子仪器、实验操作、测试样品等 6 一系列作为完整系统进行评估，需要进行系统适应性考察 10 11。 分离度溶液配制同 4.1“专属性“项下 标准溶液：精密称取奥氮平标准品 20.31mg 分别至 50ml 容量瓶中，用溶剂溶解 并稀释至刻度，精密移取上述溶液 1.0ml 至 200ml 容量瓶中，用溶剂稀释至刻度。 进样溶剂（流动相） 、系统适应性溶液、5 针标准溶液，记录峰响应值。实验结 果见表 3。 表 3 系统适应性结果 序号 峰面积 图谱编号 1st 69.58971 10052603.D 2nd 69.58934 10052604.D 3rd 69.73878 10052605.D 4th 69.60703 10052606.D 5th 69.61736 10052607.D 6th 69.74336 10052608.D 平均值 69.64759667 / RSD(%) 0.11 / 分离度（R） 4.2 拖尾因子（T） 1.1 10052601.D 接受标准 R2.0 T2 RSD2.0% 由上表数据可知，各系统适应性参数均满足要求，系统适应性良好。 （ 三 ） 精密度 精密度是指对均一样品重复取样检测每个检测结果间的接近程度，通过变异系数 （相对标准偏差）来考察 10。 1、重复性（精密度实验 1） 重复性指短时间内同一分析人员使用同一仪器进行重复检测同一个样品。 由实验员 I 在 Agilent 上检测六份样品 标准溶液，分离度溶液，同 4.2“系统适应性”项下溶液。 样品原样溶液：精密称取奥氮平样品（090921） 20.71mg、20.33mg、20.62mg、20.25mg、20.37mg、20.09mg 分别至 50ml 容量瓶 中，用流动相溶解并稀释至刻度。 待系统稳定后，由实验员 I 在 Agilent 仪器上按照方法描述中的方法进行检测， 计算 6 份奥氮平样品有关物质的含量，并计算各自的 RSD，应符合表 4 的规定。 实验结果详见表 5 表 4 接受标准 3-4 内 容 接受标准 相关 如杂质的平均值是 那么接受标准是 宜顺论文网 www.13LW.com 小于 LOQ N/A LOQ 至 0.10% 测得杂质的相对标准偏差（RSD）不超过 50% 0.10 至 0.50% 测得杂质的相对标准偏差（RSD）不超过 25% 物质 0.5% 测得杂质的相对标准偏差（RSD）不超过 10% 表 5 重复性（精密度实验 1）检测结果 实验员 I 潘海红 检测日期 2010.05.26 仪器型号 Agilent 1200 样品批号 有关物质 A 有关物质 B 氯甲基氯化物 单个非特定杂质 总杂质 1 0.0000 0.0067 0.0293 0.0475 0.1318 2 0.0000 0.0067 0.0284 0.0479 0.1302 3 0.0000 0.0069 0.0289 0.0478 0.1322 4 0.0000 0.0080 0.0299 0.0497 0.1362 5 0.0000 0.0081 0.0297 0.0492 0.1366 6 0.0000 0.0086 0.0286 0.0472 0.1315 平均值 ND 0.0075 0.0291 0.0482 0.1331 RSD% N/A 11.11 2.11 2.07 2.00 2、中间精密度（精密度实验 2） 中间精密度指在不同时间由不同实验员在不同仪器上对同一个样品进行测。 即由实验员 II 在不同天用 Shimadzu LC-2010C 检测六份样品（090921） 。 分离度溶液同 4.2“系统适应性”项下溶液。 标准溶液：精密称取奥氮平标准品 20.57mg 分别至 50ml 容量瓶中，用溶剂溶解 并稀释至刻度，精密移取上述溶液 1.0ml 至 200ml 容量瓶中，用溶剂稀释至刻度。 样品原样溶液：精密称取奥氮平样品（090921） 20.57mg、20.24mg、20.51mg、20.36mg、20.43mg、20.19mg 分别至 50ml 容量瓶 中，用流动相溶解并稀释至刻度。 待系统稳定后，按照方法描述中的方法进行检测，计算奥氮平有关物质含量，并 计算各自的 RSD，应符合表 4 的规定。实验结果详见下表。 表 6 中间精密度（精密度实验 2）检测结果 实验员 I 潘海红 检测日期 2010.05.29 8 仪器型号 Shimadzu LC-2010C 样品批号 有关物质 A 有关物质 B 氯甲基氯化物 单个非特定杂质 总杂质 1 0.0000 0.0029 0.0309 0.0447 0.1271 2 0.0000 0.0032 0.0315 0.0425 0.1178 3 0.0000 0.0033 0.0307 0.0419 0.1163 4 0.0000 0.0036 0.0310 0.0444 0.1197 5 0.0000 0.0038 0.0310 0.0416 0.1171 6 0.0000 0.0042 0.0311 0.0417 0.1203 平均值 ND 0.0035 0.0310 0.0428 0.1197 RSD% N/A 12.91 0.86 3.24 3.26 3、中间精密度（精密度实验 3） 由实验员 I 在 Waters 上检测六份样品（090921） 。 分离度溶液同 4.2“系统适应性”项下溶液。 标准溶液：精密称取奥氮平标准品 20.31mg 分别至 50ml 容量瓶中，用溶剂溶解 并稀释至刻度，精密移取上述溶液 1.0ml 至 200ml 容量瓶中，用溶剂稀释至刻度。 样品原样溶液：精密称取奥氮平样品（090921） 20.71mg、20.33mg、20.62mg、20.25mg、20.37mg、20.09mg 分别至 50ml 容量瓶 中，用流动相溶解并稀释至刻度。 待系统稳定后，按照方法描述中的方法进行检测，计算奥氮平有关物质含量，并 计算各自的 RSD，应符合表 4 的规定。实验结果详见下表。 表 7 中间精密度（精密度实验 3）检测结果 实验员 I 王华 检测日期 2010.05.26 仪器型号 Waters 2695 样品批号 有关物质 A 有关物质 B 氯甲基氯化物 单个非特定杂质 总杂质 1 0.0000 0.0060 0.0299 0.0441 0.1285 2 0.0000 0.0063 0.0300 0.0436 0.1276 3 0.0000 0.0069 0.0309 0.0444 0.1313 4 0.0000 0.0077 0.0321 0.0451 0.1356 5 0.0000 0.0078 0.0318 0.0456 0.1362 6 0.0000 0.0075 0.0323 0.0439 0.1288 平均值 ND 0.0070 0.0312 0.0445 0.1313 RSD% N/A 10.55 3.38 1.69 2.86 宜顺论文网 www.13LW.com 汇总三种仪器上精密度的结果至下表。 表 8 三种仪器精密度汇总结果 项目 实验 1 实验 2 实验 3 平均 值 RSD 有关物质 A (%) ND ND ND ND N/A 有关物质 B (%) 0.0070 0.0035 0.0075 0.01 N/A 氯甲基氯化物 (%) 0.0312 0.0310 0.0291 0.03 3.81 单个非特定杂质(%) 0.0445 0.0428 0.0482 0.05 6.11 总杂质(%) 0.1313 0.1197 0.1331 0.13 5.68 从以上数据可以得知，三种仪器结果均符合规定，说明此检测方法在这三种仪器 上检测中间精密度良好，适合在本实验室运行。 （ 四 ） 定量限/检测限（LOQ/LOD） 定量限/检测限（LOQ/LOD）是评价仪器和方法灵敏度的重要指标，现通过信 噪比来确定定量限/检测限（LOQ/LOD） 8 10 。 奥氮平及未知杂质的定量限/检测限（LOQ/LOD）是由奥氮平稀释得到的，已 知杂质的定量限/检测限（LOQ/LOD）是由相应杂质稀释得到的。其中定量限的信 噪比应不小于 10，检测限的信噪比应在 25 之间。 奥氮平的定量限溶液配制：称取 20.31mg 奥氮平标准品于 50ml 容量瓶中，加溶 剂溶解并定容到刻度；移取 1.0ml 于 200ml 容量瓶中，用溶剂定容到刻度；再移 取 1.0ml 置于 50ml 容量瓶中，用溶剂定容到刻度。 奥氮平的检测限溶液配制：移取 3.0ml 奥氮平定量限溶液置于 10ml 容量瓶中， 用溶剂定容到刻度。 杂质 A 储备液：称取 2.07mg 杂质 A 标准品置于 20ml 容量瓶中，加溶剂溶解并定 容到刻度； 杂质 B 储备液：称取 2.01mg 杂质 B 标准品置于 20ml 容量瓶中，加溶剂溶解并定 容到刻度； 杂质 A 的定量限溶液配制：移取 1.0ml 杂质 A 储备液置于 50ml 容量瓶中，用溶 剂定容到刻度；再移取 1.0ml 置于 50ml 容量瓶中，用溶剂定容到刻度。 杂质 A 的检测限溶液配制：移取 3.0ml 杂质 A 定量限溶液置于 10ml 容量瓶中， 用溶剂定容到刻度。 杂质 B 的定量限溶液配制：移取 1.0ml 杂质 B 储备液置于 100ml 容量瓶中，用溶 剂定容到刻度；再移取 1.0ml 置于 50ml 容量瓶中，用溶剂定容到刻度。 杂质 B 的检测限溶液配制：移取 3.0ml 杂质 B 定量限溶液置于 10ml 容量瓶中， 用溶剂定容到刻度。 奥氮平氯甲基氯化物储备液：准确称取奥氮平氯甲基氯化物 2.16mg 至 20ml 容量 瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，混匀。准确移取上述溶液 1.0ml 至 100ml 容量 10 瓶中，用溶剂稀释至刻度。准确移取上述溶液 1.0ml 至 100ml 容量瓶中，用溶剂 稀释至刻度。 奥氮平氯甲基氯化物定量限溶液：准确移取奥氮平氯甲基氯化物储备液 0.7ml 至 50ml 容量瓶中，用溶剂稀释至刻度。 奥氮平氯甲基氯化物检测限溶液：准确移取奥氮平氯甲基氯化物储备液 5.0 ml 至 10ml 容量瓶中，用溶剂稀释至刻度。 定量限溶液进 6 针，检测限溶液进 2 针，记录色谱图并计算信噪比及其平均值。 表 9 奥氮平定量限 LOQ 浓度 序号 峰面积 S/N 图谱编号 1 1.66484 11.0 10052620.D 2 1.77925 11.7 10052621.D 3 1.71608 11.9 10052622.D 4 1.64961 10.3 10052623.D 5 1.68069 10.0 10052624.D 6 1.60108 10.1 10052625.D 平均 值 1.691925 10.8 / 奥氮平 Conc:0.041g/ml,相当 于奥氮平的 0.01% RSD% 3.62 7.65 / 接受标准 S/N: 1015 表 10 奥氮平检测限 LOD 浓度 序号 峰面积 S/N 图谱编号 1 0.52704 2.4 10052618.D奥氮平 Conc: 0.012g/ml,相 当于奥氮平的 0.003% 2 0.48709 2.1 10052619.D 接受标准 S/N: 25 表 11 奥氮平有关物质 A 定量限 LOQ 浓度 序号 峰面积 S/N 图谱编号 1 2.70780 12.0 10052721.D 2 2.76746 13.7 10052722.D 3 2.85494 14.1 10052723.D 4 2.92222 12.4 10052724.D 5 2.87452 13.1 10052725.D 6 2.74469 11.2 10052726.D 平均 值 2.811938 12.8 / 奥氮平有关物质 A Conc:0.041g/ml,相当 于奥氮平的 0.01% RSD% 2.99 8.55 / 宜顺论文网 www.13LW.com 接受标准 S/N: 1015 表 12 奥氮平有关物质 A 检测限 LOD 浓度 序号 峰面积 S/N 图谱编号 1 0.820283 3.0 10052719.D奥氮平有关物质 A Conc: 0.012g/ml,相 当于奥氮平的 0.003% 2 0.755800 3.4 10052720.D 接受标准 S/N: 25 表 13 奥氮平有关物质 B 定量限 LOQ 浓度 序号 峰面积 S/N 图谱编号 1 1.51944 11.0 10052813.D 2 1.40586 10.4 10052814.D 3 1.47558 11.4 10052815.D 4 1.46283 12.0 10052816.D 5 1.42558 12.7 10052817.D 6 1.51033 13.1 10052818.D 平均 值 1.46663 11.8 / 奥氮平有关物质 B Conc:0.020g/ml,相当 于奥氮平的 0.005% RSD% 3.08 8.74 / 接受标准 S/N: 1015 表 14 奥氮平有关物质 B 检测限 LOD 浓度 序号 峰面积 S/N 图谱编号 1 0.450588 3.2 10052811.D奥氮平有关物质 B Conc: 0.006g/ml,相 当于奥氮平的 0.002% 2 0.49776 3.2 10052812.D 接受标准 S/N: 25 表 15 奥氮平氯甲基氯化物定量限 LOQ 浓度 序号 峰面积 S/N 图谱编号 1 403 12.7 2013050904.lcd 2 426 12.8 2013050905.lcd 3 407 12.8 2013050906.lcd 4 415 12.6 2013050907.lcd 5 415 13.0 2013050908.lcd 6 411 12.1 2013050909.lcd 奥氮平氯甲基氯化物 Conc:0.015g/ml,相当 于奥氮平的 0.004% 平均 值 412 12.7 / 12 RSD% 1.93 2.43 / 接受标准 S/N: 1015 表 16 奥氮平氯甲基氯化物检测限 LOD 浓度 序号 峰面积 S/N 图谱编号 1 297 4.7 2013050910.lcd奥氮平氯甲基氯化物 Conc: 0.007g/ml,相 当于奥氮平的 0.002% 2 295 4.0 2013050911.lcd 接受标准 S/N: 25 从以上数据可以得知，奥氮平、有关物质 A、有关物质 B 和奥氮平氯甲基氯化物 的定量限、检测限结果均符合规定，说明此方法灵敏度良好。 （ 五 ） 溶液稳定性研究 为保证样品检测的结果真实可信，确实代表样品准确的结果，需对样品的溶 液稳定性进行考察。即将样品在冷藏和室温状态下分别进行检测，通过考察回 收率来确认溶液的稳定性（回收率=放置一段时间后结果/0 小时结果） 13 杂质标准溶液：准确量取相关物质 A 和相关物质 B 储备溶液各 1.0ml 于 25 ml 容 量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度。 样品溶液配制：准确称取样品 20.68mg 至 50ml 容量瓶中，准确加入 5.0ml 杂质 标准溶液，用溶剂溶解并稀释至刻度。 对加入一定量杂质后的奥氮平样品溶液的稳定性进行研究，在室温和冷藏条件下 存放样品溶液，每隔 1 小时进样一次，计算每个点测得的杂质量，除以 0 小时的 检测值即为回收率，回收率记入下表 17。 表 17 样品溶液的稳定性（冷藏条件） 检测值（%） 储存条件 有关物质 A 有关物质 B 氯甲基氯化 物 单个非特定 杂质 总杂质 0h 冷藏 0.0760 0.1000 0.0313 0.0484 0.2948 1h 冷藏 0.0763 0.1002 0.0322 0.0482 0.2934 2h 冷藏 0.0753 0.1000 0.0351 0.0473 0.2944 3h 冷藏 0.0754 0.1009 0.0344 0.0471 0.2930 4h 冷藏 0.0751 0.1008 0.0341 0.0466 0.2949 5h 冷藏 0.0750 0.1011 0.0341 0.0464 0.2939 6h 冷藏 0.0754 0.1019 0.0338 0.0460 0.2951 7h 冷藏 0.0757 0.1023 0.0332 0.0456 0.2943 8h 冷藏 0.0748 0.1021 0.0324 0.0456 0.2936 9h 冷藏 0.0747 0.1032 0.0331 0.0447 0.3054 10h 冷藏 0.0754 0.1045 0.0331 0.0449 0.3105 宜顺论文网 www.13LW.com 11h 冷藏 0.0752 0.1048 0.0334 0.0440 0.3096 12h 冷藏 0.0753 0.1062 0.0329 0.0436 0.3132 13h 冷藏 0.0753 0.1068 0.0328 0.0439 0.3153 14h 冷藏 0.0753 0.1047 0.0336 0.0436 0.3095 15h 冷藏 0.0751 0.1051 0.0335 0.0432 0.3100 16h 冷藏 0.0753 0.1053 0.0337 0.0433 0.3122 17h 冷藏 0.0753 0.1057 0.0335 0.0432 0.3145 18h 冷藏 0.0754 0.1063 0.0324 0.0428 0.3136 19h 冷藏 0.0752 0.1065 0.0324 0.0428 0.3149 20h 冷藏 0.0748 0.1061 0.0325 0.0420 0.3112 21h 冷藏 0.0748 0.1066 0.0337 0.0420 0.3155 22h 冷藏 0.0754 0.1076 0.0329 0.0416 0.3181 23h 冷藏 0.0754 0.1080 0.0332 0.0413 0.3184 24h 冷藏 0.0753 0.1085 0.0331 0.0415 0.3198 回收率（%） 0h 冷藏 100.4 100.2 102.7 99.6 99.5 1h 冷藏 99.0 100.0 111.9 97.8 99.9 2h 冷藏 99.2 100.9 109.7 97.4 99.4 3h 冷藏 98.8 100.8 108.9 96.3 100.1 4h 冷藏 98.7 101.1 108.7 95.8 99.7 5h 冷藏 99.2 102.0 107.8 95.0 100.1 6h 冷藏 99.6 102.3 106.0 94.2 99.8 7h 冷藏 98.4 102.2 103.4 94.3 99.6 8h 冷藏 98.3 103.3 105.7 92.3 103.6 9h 冷藏 99.2 104.5 105.6 92.9 105.3 10h 冷藏 98.9 104.8 106.5 90.8 105.0 11h 冷藏 99.0 106.2 105.0 90.1 106.3 12h 冷藏 99.0 106.8 104.8 90.8 107.0 13h 冷藏 99.1 104.8 107.4 90.0 105.0 14h 冷藏 98.8 105.2 106.9 89.2 105.2 15h 冷藏 99.1 105.4 107.6 89.4 105.9 16h 冷藏 99.1 105.7 106.8 89.3 106.7 17h 冷藏 99.2 106.3 103.5 88.4 106.4 18h 冷藏 99.0 106.6 103.4 88.4 106.8 19h 冷藏 98.4 106.1 103.7 86.9 105.6 20h 冷藏 98.4 106.6 107.7 86.8 107.0 21h 冷藏 99.2 107.7 105.0 85.9 107.9 14 22h 冷藏 99.2 108.0 105.8 85.4 108.0 23h 冷藏 99.1 108.6 105.6 85.8 108.5 24h 冷藏 100.4 100.2 102.7 99.6 99.5 表 18 样品溶液的稳定性（室温条件） 检测值（%） 储存条件 有关物质 A 有关物质 B 氯甲基氯化 物 单个非特定 杂质 总杂质 0h 室温 0.0762 0.1004 0.0315 0.0450 0.2988 1h 室温 0.0765 0.1053 0.0307 0.0442 0.3156 2h 室温 0.0756 0.1126 0.0313 0.0429 0.3439 3h 室温 0.0763 0.1204 0.0310 0.0420 0.3640 4h 室温 0.0742 0.1295 0.0303 0.0391 0.3964 5h 室温 0.0763 0.1392 0.0319 0.0582 0.4081 6h 室温 0.0747 0.1490 0.0303 0.0702 0.4368 7h 室温 0.0777 0.1563 0.0305 0.0835 0.4517 8h 室温 0.0755 0.1656 0.0317 0.0982 0.4730 9h 室温 0.0747 0.1757 0.0303 0.1138 0.4968 10h 室温 0.0749 0.1848 0.0316 0.1283 0.5207 11h 室温 0.0753 0.1953 0.0303 0.1420 0.5418 12h 室温 0.0771 0.2033 0.0303 0.1563 0.5671 13h 室温 0.0763 0.2143 0.0303 0.1742 0.5926 14h 室温 0.0752 0.2229 0.0298 0.1889 0.6036 15h 室温 0.0770 0.2285 0.0313 0.1950 0.6320 16h 室温 0.0765 0.2372 0.0322 0.2087 0.6545 17h 室温 0.0745 0.2449 0.0312 0.2225 0.6693 18h 室温 0.0752 0.2533 0.0304 0.2361 0.6900 19h 室温 0.0757 0.2614 0.0310 0.2487 0.7119 回收率（%） 0h 室温 100.4 104.9 97.2 98.3 105.6 1h 室温 99.3 112.1 99.2 95.3 115.1 2h 室温 100.1 119.9 98.2 93.2 121.8 3h 室温 97.4 128.9 95.9 86.9 132.7 4h 室温 100.1 138.6 101.0 129.4 136.6 5h 室温 98.0 148.4 96.1 155.8 146.2 6h 室温 102.0 155.7 96.5 185.5 151.2 宜顺论文网 www.13LW.com 7h 室温 99.1 164.9 100.4 218.2 158.3 8h 室温 98.1 175.0 96.2 252.7 166.3 9h 室温 98.3 184.0 100.0 285.1 174.3 10h 室温 98.9 194.5 95.9 315.5 181.3 11h 室温 101.2 202.4 96.1 347.3 189.8 12h 室温 100.2 213.4 96.1 387.1 198.3 13h 室温 98.7 222.0 94.5 419.6 202.0 14h 室温 101.1 227.6 99.2 433.3 211.5 15h 室温 100.5 236.2 102.2 463.6 219.0 16h 室温 97.8 243.9 98.9 494.4 224.0 17h 室温 98.6 252.2 96.3 524.6 230.9 18h 室温 99.3 260.3 98.2 552.5 238.3 19h 室温 100.4 104.9 97.2 98.3 105.6 由以上数据可知，奥氮平样品溶液冷藏储存条件下 24 小时内稳定，室温下需要 进样前溶解。 （ 六 ） 耐用性 耐用性是为了证明方法的普适性 11。耐用性系指在测定条件有小的变动时， 测定结果不受影响的承受程度，为把方法用于常规检验提供依据。开始研究分析 方法时就应考虑其耐用性。如果测试条件要求苛刻，则应在方法中写明 6。 在该试验中，通过改变色谱柱品牌、调节流动相比例、调节柱温、调节流速，调 节缓冲液浓度等，来寻找影响此方法的关键参数，评估此方法的耐用性。每个系 统中，系统稳定后进溶剂、系统适应性溶液、标准溶液、样品溶液。通过对系统 适应性参数的考察研究参数变化对系统的影响。 表 19 改变色谱柱品牌对系统参数结果的影响 色谱柱品牌 参数 接受标准 Inertsil Agilent Welch 分离度 3.0 10.56 5.30 23.91 拖尾因子 1.5 1.172 1.134 1.079 理论塔板数 / 24539 19335 97976 相对保留时间 杂质 B 0.3 0.26 0.30 0.23 杂质 A 0.8 0.74 0.86 0.63 表 20 改变缓冲液 pH 值对系统参数结果的影响 16 缓冲液 PH 值 参数 接受标准 2.4 2.5 2.6 分离度 3.0 7.36 11.78 5.49 拖尾因子 1.5 1.172 1.186 1.234 理论塔板数 / 20698 66450 18983 相对保留时间 杂质 B 0.3 0.28 0.26 0.29 杂质 A 0.8 0.81 0.77 0.85 表 21 改变流动相比例对系统参数结果的影响 缓冲液/乙腈 参数 接受标准 A:490/510 B:270/730 A:520/480 B:300/700 A:550/450 B:330/670 分离度 3.0 7.04 5.30 14.40 拖尾因子 1.5 1.135 1.134 1.111 理论塔板数 / 21090 19335 217132 相对保留时间 杂质 B 0.3 0.50 0.30 0.25 杂质 A 0.8 1.24 0.86 0.82 表 22 改变流动相比例对系统参数结果的影响 缓冲液/乙腈 参数 接受标准 A:510/490 B:290/710 A:520/480 B:300/700 分离度 3.0 2.32 4.24 拖尾因子 1.5 1.108 1.112 理论塔板数 / 16496 16973 相对保留时间 杂质 B 0.3 0.33 0.31 杂质 A 0.8 0.93 0.88 表 23 改变柱温对系统参数结果的影响 柱温（） 参数 接受标准 30 35 40 宜顺论文网 www.13LW.com 分离度 3.0 5.34 5.30 4.92 拖尾因子 1.5 1.097 1.134 1.134 理论塔板数 / 21277 19335 17300 相对保留时间 杂质 B 0.3 0.29 0.30 0.30 杂质 A 0.8 0.86 0.86 0.87 表 24 改变流速对系统参数结果的影响 流速（ml/min） 参数 接受标准 1.3 1.5 1.7 分离度 3.0 5.56 5.30 5.22 拖尾因子 1.5 1.085 1.134 1.108 理论塔板数 / 39279 19335 15734 相对保留时间 杂质 B 0.3 0.30 0.30 0.29 杂质 A 0.8 0.88 0.86 0.85 改变柱温(5)、流速(0.2ml/min)、缓冲液 pH(0.2)、流动相中甲醇的浓 度(10%)、流动相中缓冲盐的浓度(10%)、色谱柱品牌等条件，系统适应性均 符合规定，方法耐用性良好。 四 、 结 论 （ 一 ） 系统适应性及专属性项目下，连续 5 针标准峰面积的 RSD 是 0.11%3.0，奥氮平的拖尾因子为 1.11.5，各项 均符合规定，溶剂峰无干扰（10052600.D） ，