结核感染T细胞斑点试验的临床应用ppt课件

1 原理 结果的判断 临床应用 评价 2 结核分枝杆菌感染机体后被巨噬细胞吞噬，但 不能完全将其清除，巨噬细胞凋亡后释放出大 量特异性抗原，并递呈给特异性的 CD4、 CD8T 细胞，使其激活并释放大量 -干扰素。 大量研究表明结核抗原特异分泌 -干扰素的 T 细胞可作为结核分枝杆菌感染的一种可靠标志 物。 3 外周血 T-SPOT即利用酶联免疫斑点技术（ ELISPOT）通过检测结核分枝杆菌特异性抗原 刺激后外周血单个核细胞释放的 -干扰素来检 测抗原特异性 淋巴细胞的应答反应，从而判 断结核感染状态。 每一个斑点代表一个分泌细胞因子的 T细胞， 记数斑点数量可以获得外周血中结核致敏的 T 细胞数量。 4 结核特异性抗原 早期分泌靶向抗原 (ESAT-6)和 培养滤过蛋白 (CFP-10) 由结核杆菌基因组 RD1区相同的操纵子编码的 蛋白，只存在于结核分枝杆菌群 (包括人型、牛 型和非洲型分枝杆菌 )及其它几种致病性分枝杆 菌 (如堪萨斯分枝杆菌， Szulgai 分枝杆菌，海 分枝杆菌 )中， 是 T 细胞的靶抗原，能诱导皮肤 迟发型超敏反应并刺激外周血单核细胞产生 - 干扰素。 5 试验分四组：空白对照组、抗原组 (ESAT-6和 CFP-10)、阳性 对照组 (植物血凝素 PHA)。 通常正常结果，空白对照孔没有或有很少的斑点而 PHA对照 孔斑点数超过 20个。 空白对照孔斑点数超过 10个时结果被认为是 “不确定 ”。 当 PHA对照孔斑点数少于 20个时，检测结果被认为是 “不确定 ”。 当空白对照孔斑点数为 0-5个并且（抗原 A或抗原 B斑点数）减 去（空白对照孔斑点数）等于 5-7时，此结果被认为是 “灰区 ” ，应当利用所有可利用相关的的临床信息进行判断。必要时 可进行复查。 T-SPOT.TB的实验结果也有用每 106 PBMCs中斑点形成细胞 (SFCs)的数目来描述，即 SFCs 106PBMCs。 6 如果抗原 A和 /或抗原 B有应答，检测结果为 “有反应性 ”，参照以 下标准： 空白对照孔斑点数为 0-5个时且（抗原 A或抗原 B孔的斑点数） -（ 空白对照孔斑点数） 6； 空白对照孔斑点数为 6-10个时且（抗原 A或抗原 B孔的斑点数） 2（空白对照孔斑点数）； 检测结果为 “无反应性 ”：不符合上述标准且 PHA对照孔正常。 当 PHA对照孔结果为 “不确定 ”且抗原 A和抗原 B孔结果都为 “无反 应性 ”时，该实验结果被认为是 “并不确定 ”，应当复查。 “有反应性 ”结果表明样本中 存在 针对结核杆菌特异的效应 T细胞 “无反应性 ”结果表明样本中 可能不存在 针对结核杆菌特异的效应 T 细胞 7 既往结核病史或影像学提示陈旧性肺结核、有结核 密切接触史或高潜伏性结核感染率可使其诊断活动 性结核病的特异性降低。 只与外周血中结核特异性抗原刺激产生的效应 T细 胞有关，与感染部位无关。 与年龄、机体免疫状态、 HIV感染、营养不良的程 度无关。 抗结核治疗后效应 T细胞消失，可使斑点数减少或 使结果呈阴性。 与是否排菌无关。 8 活动性结核与潜伏性结核感染 的鉴别 “菌阴 ”结核患者的辅助诊断 肺外结核的鉴别诊断 结核发病风险的预测 免疫力低下或受抑制患者的结核病诊断 区别结核感染者与 BCG接种者 抗结核疗效的监测 9 敏感性及特异性高：不受卡介苗接种及环境分 枝杆菌影响，不受机体免疫状态影响。 应用广泛：在活动性肺结核、肺外结核、结核 性浆膜炎、潜伏性结核感染及免疫抑制的结核 患者均能检测。 诊断快速： 24小时可报告结果。 可进行疗效评估：治疗有效则 T-SPOT.TB斑点 数减少甚至阴性。 10 目前尚无统一的界值用来鉴别潜伏结核感染及活动 性肺结核。 在 5岁儿童、近期暴露于结核杆菌者、免疫功能低 下者和需要二次检测者中使用的证据不足。 对标本要求高：室温保存和运输血液样本（ 18- 25 ），不能冷冻或冷藏；血液样本从采集到检测 不超过 8小时。 结果需结合临床和其它检测进行判断，阴性结果不 能排除暴露或感染结核杆菌的可能性。 不能确定病变部位。 11 12 国外文献报道应用 ELISPOT方法检测 活动性肺结核 的敏感性可达到 78% 100%, 特异性可达到 80% 100%。 国内学者研究应用 ELISPOT方法检测 活动性肺结核 的敏感性为 83%98.8%，特异性 65%100%，阴性 预测值 81.891.6%，阳性预测值 45.367.9%。 13 诊断活动性结核病患者外周血 T-SPOT.TB斑点形成 细胞中位数为 442SFCs/106 PBMC 。 排除活动性结核病患者外周血 T-SPOT.TB斑点形成 细胞中位数为 124SFCs/106 PBMC。 以 72SFCs/106 PBMC为界值时 ,诊断活动性结核病 的敏感性为 71.9%,特异性 76.4%,ROC曲线下面积为 0.810。 以 652SFCs/106PBMC为界值时 ,诊断活动性结核病 的特异性达 95%。 14 宿主感染结核分枝杆菌后尚未发病、无活动性 结核的临床表现、影像学改变或细菌学证据的 一种特殊状态。 潜伏性感染者如不进行治疗，约有 5-10%会发 展成活动性结核。 T-SPOT.TB阳性与密切接触有更好的相关性， 能更加准确地诊断 LTBI。 15 潜伏性结核感染的斑点数有可能高于活 动性结核，因此 TSPOT.TB难以区分 活动性结核和潜伏性结核感染。其原 因可能有两点： (1)潜伏性结核感染者的免疫功能良好，少量的 抗原刺激就激发出活跃的保护性免疫； (2)活动性结核患者免疫功能低下，大量的抗原 刺激也不足以激起有效的细胞免疫。 16