源自hpscs的组织特异性血管内皮细胞回顾

简明回顾：组织特异性微血管内皮细胞源自人类多能干细简明回顾：组织特异性微血管内皮细胞源自人类多能干细 胞胞 ABSTRACT 越来越多的证据提示不同组织类型的内皮细胞（ECs）具有显著的异质性，在组织的产 生与动态平衡中起重要作用。近期的工作揭示出人类多能干细胞（hPSCs）中组织特异性微 血管内皮细胞（TS-MVECs）的产生有可能产生组织特异性模型，这可能被应用于再生医学 和体外模型应用中。本文中，我们回顾了到目前为止那些造就 hPSC 源性 TS-MVECs 的技术， 并讨论现在的 hPSC-EC 分化流程可能是如何被引向组织特异性命运的。我们首先讨论活体 中 EC 组织特异性的本质，并回顾了最近十年产生的一般性 hPSC-EC 分化流程。最后，我们 描述了特异性是如何被整合到 hPSC-EC 流程中以在体外条件下产生 hPSC 源性 TS-MVECs 的， 包括 EC 和实质细胞的共培养，引导性分化，以及引导重编程的策略。 INTRODUCTION 内皮细胞（ECs）衬于血管腔，不仅仅是一个被动屏障，而且是有功能的活跃性闸门， 对微环境中的变化有动态反应。ECs 位于循环血液成分与周围组织的交界处，在调控生理 和病理过程中起关键作用，包括控制微血管通透性，血管生成，凝血，以及炎症。为了完 成如此多样的功能，ECs 在各个发育阶段，血管类型（即毛细血管，小动脉，小静脉） ，以 及组织类型间表现出了很高的异质性（1） 。 不同组织的微脉管系统在结构和功能水平上都是不同的，这是为了满足该组织的特定 需求。举例来说，大脑中的 ECs 形成连续的，高度不可通透的屏障，即血脑屏障（BBB） ， 目的是维持微妙的生化平衡以维持正常的脑部功能。相反，肝脏窦状小管的 ECs 高度不连 续，以促进毒素从血流中清除，而肾小球的 ECs 有助于滤过血液内容物，以除去有害产物。 离体条件下产生组织特异性微血管内皮细胞（TS-MVECs） ，用于再生医学和组织建模 应用，这有着巨大的利益。人类多能干细胞（hPSCs） ，特别是人类胚胎干细胞和诱导性多 能干细胞（分别是 hESCs 和 iPSCs）由于其可以分化成任何体细胞类型的能力，是产生 TS- MVECs 的一种有吸引力的来源。特别是 hPSCs 能产生自体同源细胞，并可用于研究离体条 件下的人类组织发育机制，这使得它成为一种特别吸引人的 TS-MEVCs 的来源。 在最近的十年中，使 hPSCs 向 ECs 分化的流程不断发展，增进了人们对人类 ECs 在生 理和病理组织状态中所起作用的理解。近期，一些令人激动的新进展揭示了 hPSCs 向 ECs 的分化表现出组织特异性的特点。本篇回顾的目的就是总结这些进步，并提示出那些可能 扩展 TS-MVECs 应用范围的有希望的方向。 活体中活体中 EC 组织特异性的特点组织特异性的特点 理想的由干细胞产生的 TS-MVECs 应当与活体中的同类型细胞尽可能地匹配，匹配的 方面有基因和蛋白质的表达，结构，以及功能特点。活体研究已经识别出了不同组织间毛 细血管在组织（回顾见 2）和功能（回顾见 3）上的主要区别，提示有高度异质性，对这种 异质性我们现在已经开始识别其分子基础。人们观察到在离体条件中缺乏微环境背景的情 况下，原代培养的 ECs 去分化了，高达 50%的这类细胞不再表达其组织特异性基因（4） ， 这就产生了对离体条件下 TS-MVECs 特点进行描述的必要。 ECs 的一个主要功能是释放组织特异性血管内分泌因子，支持组织的动态平衡与再生。 举例来说，肝窦状小管 ECs（LSECs）通过在时间和空间上控制血管内分泌信号，从而影响 肝部分切除后肝脏的再生（5，6） 。在肝切除后的 LSECs 中，Ang-2 一开始是下调的（5） ， 同时 Wnt2 和 HGF 是上调的（6） ，促进肝细胞的生长和增殖，之后 Ang-2 的表达逐渐恢复 以促进血管形成（5） 。在骨组织中，存在毛细血管 ECs 的亚型，H 和 L 型 ECs，它们在血管 内分泌的反应上是不同的（7，8） 。H 型 ECs 释放细胞龛信号分子，支持骨祖细胞的生存与 增殖（包括 Pdgfa 和 Pdgfb） ，而 L 型 ECs 不分泌（7） 。有趣的是，增加 H 型 ECs 细胞的数 量增加了骨祖细胞的数量，也增强了骨的形成（7） 。 ECs 的另一个主要功能是调控离子，小分子，蛋白质，以及细胞的通透性。举例来说， 高度不可通透的脑部 ECs 组成了血脑屏障，其特点是缺乏小窗，胞饮活动减少，表达极化 的外流载体，并且跨内膜电阻很高（TEER） （回顾文章见 9） 。实际上，脑部毛细血管的 TEER 经测定高达6000cm2，取决于受测动物的种类及年龄（10，11） ，与之相比外周 血管的 TEER 仅有 20cm2（12） 。细胞旁通透性受紧密连接复合物控制，不同组织中这 种复合物的表达是异质性的，并且组织也不同（13） 。比如，高度不可通透的脑部 ECs 表达 紧密连接蛋白封闭素（occludin）和 claudin-5，而高度通透的 LSECs 不表达封闭素，仅异质 性地表达 claudin-5（14） 。 基因微阵列已经被证明有助于识别 EC 组织特异性的决定分子（15，16） 。Daneman 等 人比较了 Tie2-GFP 小鼠中脑源性，肺源性，以及肝源性 ECs 的转录组。重点关注一组在产 生脑部 ECs 屏障表型上有功能显著性的基因，Daneman 等人描述了与肺和肝 ECs 相比，一 些脑 EC-特异性的基因，包括紧密连接蛋白（封闭素，Marveld2，以及 Jam4） ，以及来自 Slc，Slco，ATP 以及 ABC 载体家族的载体。血脑屏障富集性基因的路径分析识别出了典型 的 Wnt 和视黄酸 X 受体信号通路，在脑部脉管系统中上调。有趣的是，典型的 Wnt 信号 （1719）和视黄酸信号（20）都涉及发育期间脑部特异性内皮特性的诱导过程。 最近，Nolan 等人通过活体内标记和荧光素激活细胞分类（FACS）纯化方法，从小鼠 的 9 个不同组织中游离出了 ECs（16） 。他们发现不同组织的 ECs 在其转录物组上表现出明 显的不同，最不相同的 ECs（肾和睾丸）在基因表达方面的 R2相关系数仅为 0.796，而最相 似的 ECs（心脏和肌肉）其 R2相关系数为 0.976。此外，Nolan 等人识别出了一组转录因子， 血管内分泌因子，以及在不同组织间差异性表达的表面标志物。举例来说，转录因子 SFPI1 在肝源性和骨髓源性 ECs 中富集，血管内分泌因子白细胞介素 33 在肾源性 ECs 中富集，表 面标志物 CD133 在脑源性和睾丸源性 ECs 中富集。但是，明确的组织特异性内皮标志物还 很少。总的来说，这些分析提示组织特异性应当被定义为各种基因或蛋白质的一种唯一的 组合，而不是某个单一因素。 干细胞源性干细胞源性 ECs 人类干细胞来源人类干细胞来源 对于人类 ECs 的获取，有数种不同的干细胞来源，同时包括多能干细胞和成体干细胞。 成体干细胞群包括骨髓单核细胞（21） ，外周血单核细胞（2226） ，脂肪源性干细胞（27） ， 以及心脏祖细胞（28） ，已经显示出具有分化成 ECs 的能力。但是，成体干细胞的限制包括 分化的能力，常由异质性细胞群组成（29） ，以及在某些例子中随着老化而丧失增殖与分化 能力（30） 。源自胚球内细胞团的 hESCs（31） ，以及后来从已经终末分化的体细胞中产生 的 hiPSCs（32） ，克服了成体干细胞的某些限制。人们对代表了某种患者特异性表型的 hPSC 源性 ECs 的利用能力使 hPSCs 成为一种十分强力的工具，可以用来进一步理解生理状 态和病理状态下的 ECs，并可能在细胞再生方面起重要作用。 干细胞源性 ECs 的特点描述 没有单一的 ECs 标记物；而是一群标记物的联合，可用于 ECs 的识别。最有确定性的 结构性表达的内皮标记物包括 PECAM（CD31） ，血管内皮（VE）-钙黏着蛋白（CD144） ，内 皮一氧化氮合成酶（eNOS） ，von Willebrand 因子（vWF） ，血管内皮生长因子受体 2（VEGFR-2） ，以及 Tie-2（34） 。一些功能测定可以用于描述 hPSC 源性 ECs 的表型。ECs 释 放的一氧化氮在活体血流与血压的控制方面起关键作用（35） ，并可在离体条件下测定 （36） 。摄入乙酰化的低密度脂蛋白，是健康 ECs 的另一个特点（37） 。ECs 受炎性细胞因 子比如 TNF- 激活，诱导粘附分子比如 ICAM-1 的上调，它捕获循环血液中的白细胞，可 能在内皮祖细胞样细胞向受损脉管的旁分泌过程中起重要作用（38） 。离体条件下血管生成 测定及脉管生成测定需要 EC 的增殖与迁移（39，40） ，测定办法是将经 VEGF 处理过的 ECs 放在除去生长因子的基质胶上，然后观察含有管腔的管样网络。这样的测定也可在活体条 件下进行，方法是将细胞悬浮在含有基础性成纤维生长因子（bFGF）的基质胶混合物中， 然后皮下注射到免疫缺陷的动物中。之后可以去掉附加的基质胶，通过内皮和物种特异性 标记物的表达来识别出毛细血管。 从从 hPSCs 中产生中产生 ECs hPSCs 向 ECs 的分化，在最近的十年里取得了很大的进展，表 1 列举了其中一些进步。 首先，原代细胞共培养被用于引导 hPSCs 转向 EC 命运。在有小鼠骨髓基质细胞系 OP9 的 情况下，hPSCs 和 hiPSCs 都可以诱导分化成 ECs（41，42） 。OP9 细胞的强烈造血促进活性 可能是由 Notch 配体表达，蛋白表达，以及一些未被识别的旁分泌因子表达方面的不同所 产生的，而这种活性可能使得 hESC 向 ECs 分化。这些研究的作者假设这些分泌的因子可能 引导 hPSCs 向内皮细胞状态分化，提出有可能是旁分泌信号途径调控了 hPSCs 产生组织特 异性的 ECs。 一种附加的方法常用于获得 hPSCs 源性的 ECs，它利用胚状体（EB）形成。一些 EB 流 程使用生长因子，首次诱导出了 CD31+CD34+祖细胞群，这种细胞群一旦游离出来并暴露 在合适的环境条件下，就可以产生 ECs。Levenberg 等人揭示了将 hESC 源性 EBs 培养 10 天 后，2%的细胞表达 CD31（45） 。将生长因子 IGF 和 EGF 与 VEGF 和 FGF2 一起加入，产生约 12%的 CD31+细胞（43） 。Rufaihah 等人在有骨形态生成蛋白 4（BMP4）和 VEGF 存在的情 况下从 hiPSCs 形成了 EBs（39） 。EB 形成，细胞在缺乏 BMP4 的条件下扩张 10 天，之后有 约 15%的细胞群表达 CD31。在近期由 James 等人做的一项研究中，hESCs 在依次暴露于 BMP4，ActivinA，以及 FGF2 后，加速形成 EBs。在第 47 天，EBs 在基质胶上铺开，并用 VEGF-A 处理。这些条件产生了相对较松散的 ECs 细胞群，其标志物是 VE-钙黏着蛋白- GFP（0.2%） 。但是，第 7 天时 TGF 的抑制使内皮分化效率增加了 10 倍。之后，经过磁 性激活细胞分类（MACS）纯化的 CD31+细胞，用 TGF 抑制，使其扩张增加了 36 倍（47） 。 这些研究提示在一开始向 EC 祖细胞分化后，操纵某些特殊的信号通路增加了细胞的增殖， 并保存 EC 表型，approaches which could prove vital in the derivation of tissue-specific ECs。ECs 的纯化细胞群可以用 EB 分化流程轻松获得，这是因为很容易就能将那些表达 EC 标志物的细胞分离并扩展。 在单层基础上的 2D 引导分化技术使用小分子，生长因子，以及细胞外基质蛋白，这 类技术也可以设计用来使 hPSCs 分化成 ECs。举例来说，Wang 等人在一种含有 VEGF，bFGF，以及 BMP4 的分化介质中将 hESCs 培养 10 天，产生了 CD31+CD34+血管母细 胞样细胞，占总细胞数的约 20%（49） 。在加入了 VEGF 和 bFGF 的内皮生长介质中培养后， 大部分细胞形成了粘着连接，输入 dil-乙酰化低密度脂蛋白，表达 VE 钙黏着蛋白， CD31，vWF，Tie2，以及 VEGFR-2。在一项由 Tatsumi 等人做的同样的研究中，hESCs 在有 糖原合酶激酶-3 抑制剂和 VEGF 存在的情况下分化（37） 。FACS 分析显示20%的细胞表 达 VE 钙黏着蛋白，VEGFR-2，CD34，以及 CD31。在基于 VE-钙黏着蛋白的 MACS 纯化过程 后，ECs 输入 dil 乙酰化的低密度脂蛋白，并在离体条件下形成毛细血管样管腔。在 White 等人做的另一个复杂的研究中，hiPSCs 和 hESCs 放在 BMP4，ActivinA，VEGF，以及 bFGF 中 培养，产生了 6%70%的 VEGF-2+细胞，提示细胞系之间有高度的变异性（40） 。但是，在 VEGFR-2+细胞经 MACS 分离后，ECs 可以在内皮细胞生长因子（EGM）介质中扩张，这种 介质含有 EGF，IGF-1，bFGF，VEGF，以及视黄酸（RA） ，产生 95%的 CD31+细胞。CD31+细 胞输入 dil 乙酰化的低密度脂蛋白，在离体条件下和体内条件下形成毛细血管样，产生 NO，并表达各种内皮标志物。这些 2D 分化平台使得人们可以在分化期间用化学方法精确 控制微环境，而不只是用共培养和 EB 方法，因此更能识别和优化促进 EC 分化的那些特殊 线索。尽管用于产生干细胞源性 ECs 的技术和流程已经取得很大的进展，但还是有必要做 更多的工作以理解怎样将 hPSCs 引向 TS-MVECs。 产生干细胞源性组织特异性产生干细胞源性组织特异性 ECs 的方法的方法 ECs 的组织特异性特征是局部微环境的结果，这一点已成共识。最先揭示了“组织印 记”这一概念的研究使用了小鸡鹌鹑移植，该研究显示周围组织是组织特异性信号的来 源，而并非植入载体受内源性组织特异性程序驱动（54） 。自那以后，许多研究揭示了微环 境信号，比如可溶性信号因子（5557）以及细胞外基质成分（58） ，与微血管 ECs 的组织 特异性有关。最近，一些研究显示 TS-MVECs 可以从 hPSCs 中分化而来（56，57，59） 。这 里，我们回顾了到目前为止出现的成功的策略（总结见表 2） ，并提示了一些将来可能出现 的，驱动产生 hPSCs 源性 TS-MVECs 的方法（总结见 Fig.1） 。 活体中干细胞源性活体中干细胞源性 ECs 的特化的特化 研究者们继续理解并改进 hPSCs 向 ECs 的分化，但仍有一个问题，这些 ECs 是否可以 被给予合适的诱导信号，从而引导其获得组织特异性。Nolan 等人揭示了这种可能性，方 法是用之前 James 等人描述过的方法，用 BMP4，ActivinA，VEGF-A 以及 FGF2 刺激小鼠 ESCs（mESCs） （47） ，然后转导 myrAkt1（60） 。纯化细胞群中有 99.3%的细胞持续表达 VE- 钙黏着蛋白和 CD31，持续 4 周，并缺乏那些预计在特定组织中会上调的标志，比如说 CD133（在脑部 ECs 中上调） ，或血管细胞黏附分子（VCAM） （在肝 ECs 中上调） （16） 。 接下来，按这种方法从 mESCs 中产生的 ECs 被注射到进行了 70%肝切除手术的小鼠体 内。令人惊讶的是，mESC-ECs 除了重新产生肝脏，在肾脏也移植成活，提示外科操作过程 在肾脏产生了令移植能够成活的条件。值得注意的是，这两类 mESC-EC 细胞群显示出不同 的表达类型，VCAM 高表达仅见于肝脏 mESC-ECs，Tie2 和内皮糖蛋白表达增高仅见于肾 mESC-ECs，与原代肝脏和肾脏 ECs 中整体基因表达类型相一致（16） 。重要的是，这提示干 细胞源性 ECs 对组织特化微环境信号有反应。但是，在移植成活的细胞中，只有少数组织 特异性标记物受到评估，在缺乏进一步表型和功能分析的情况下，这些细胞无法被认为是 真正的肝或肾 ECs。随着技术进步，也许 TS-MVECs 可以在指定的离体条件中产生，在离体 条件中有相关的微环境信号，以合适的空间时间方式给予一般性 hPSC-ECs 群。而许多能够 驱动 TS-MVECs 形成的微环境信号尚未被识别，可以想象的是一旦这类信号被识别出来， 就可以在离体条件下 EC 分化期间或分化后添加这些因子，以诱导组织特化。 离体条件下产生离体条件下产生 hPSC 源性源性 TS-MVECs ECs与实质细胞共培养与实质细胞共培养。原代 ECs 与神经细胞共培养，包括神经祖细胞和星形细胞 （55，61） ，被广泛认为是一种增强离体条件下 ECs 的血脑屏障特异性属性的方法。举例来 说，Boyer-Di Ponio 等人发现星形细胞共培养能够诱导人类脐带血源性循环内皮祖细胞获得 血脑屏障特异性标志物和表型（62） 。在目前为止少数功能性 hPSC 源性 TS-MVECs 的例子 中，有一个例子，我们的团队开发了一种策略，让 hPSCs 在一种神经细胞与 ECs 的混合物 中分化，结果是有脑部特异性的微血管 ECs（BMECs）在细胞群中的比例60%（59，回顾 见63） 。这些 hPSC 源性 BMECs 含有活体血脑屏障的许多特性，包括表达紧密连接蛋白， TEER 升高，具有极化外流载体活性。我们猜想共分化的神经细胞群提供了生理上相关的发 育信号，包括 Wnt 信号（1719） ，使发育初期的 ECs 成为脑部特异性 ECs。 尽管在 hPSC 源性 BMEC 分化期间，神经祖细胞群和 EC 祖细胞群同时出现（59） ，当 hPSC 源性 BMECs 与来自神经血管单元的细胞共培养时，BMEC 的屏障特性和载体特性还是 增强了。hPSC 源性 BMECs 与原代小鼠星形细胞共培养，使其 TEER 从单独培养时的 22151cm2增加到共培养时的 860260cm2，提示屏障更紧密了（59） 。另外， 加入视黄酸处理（见后续章节讨论） ，hPSC 源性 BMECs 与原代人类外周细胞，从人类神经 祖细胞分化而来的星形细胞和神经元依次共培养，这样的联合方案使 TEER 接近 5000cm2，逼近活体值（11） 。 原代细胞与 hPSCs 源性 ECs 共培养能诱导 EC 组织特异性潜能，同时各种实质细胞类型， 比如心肌细胞，肝细胞，或肾细胞（64，65，66） ，其 hPSCs 分化流程的发展，提供了构建 hPSC 源性 EC 和 hPSC 源性实质细胞共培养的机会。这一策略将使 ECs 和实质细胞同源模型 的发展成为可能，并且代表了一种研究离体条件下 EC 祖细胞的组织特化机制与动态的途径。 共培养也可能为理解 EC 受实质细胞影响特化的机制迈出关键的第一步。举例来说，蛋 白质组学分析曾被用于对原代牛脑 ECs 受星形细胞共培养刺激而发生的蛋白质表达变化进 行定量，其结果显示星形细胞诱导性变化发生在肌动蛋白细胞骨架（67）以及非对称性二 甲基精氨酸通路（68）方面。另外，人类脐静脉内皮细胞（HUVECs）与成纤维细胞共培养 的基因组分析识别出 323 个基因在共培养时表达有差异（69） ；对这些基因启动子的分析涉 及许多保守 C 启动子结合因子 1/CBF1，无毛抑制基因，Lag-1 元件，提示成纤维细胞/EC 的 相互作用通过 Notch 信号调控。理想情况下，随着这些信号被识别出来，它们可以在适当 的发育阶段被加入到 EC 分化平台中，以驱动组织的特化。 通过微环境信号引导通过微环境信号引导TS-MVECs的分化的分化。分化引导策略一般是强化了已经存在的内皮 分化流程（如之前的章节所述） ，并合并了活体中微环境内的元素（即，生长因子，信号蛋 白，组织特异性母质，和/或小分子） ，以诱导 ECs 中的组织特异性。已经表明胞外母质对 调控 EC 表型十分关键（70） ，并在产生 TS-MVECs 方面起关键作用。小分子和生长因子已 经被成功用于在 hPSCs 中产生脑特异性 ECs（57）和心脏特异性 ECs（56） 。 采取一种诱导分化策略来产生 TS-MVECs 的第一步，就是识别出候选的特化信号。举 例来说，据猜想 RA 由于某些原因，能增强 hPSC 源性 BMECs 的血脑屏障表型。首先，视黄 醇结合蛋白受体 STRA6 在成年小鼠大脑 ECs 中被发现，但未在外周 ECs 中发现，提示有组 织特异性（71） 。进一步地，添加 RA 已经显示出能够上调人类永生化 BMEC 细胞系中特定 的血脑屏障特性，并且已经提示其涉及到活体中血脑屏障的发育过程（20） 。甚至，在 hPSC 源性 BMECs 分化的晚期阶段添加 RA，会诱导 VE-钙黏着蛋白更早表达，增强紧密连 接程度，并将 TEER 从平均 22857cm2增加到 2940800cm2（57） 。RA 处理，与 人类外周细胞及神经祖细胞分化而来的人类星形细胞和神经细胞共培养方法一起，将 TEER 增加到5000cm2（57） 。 在另一个例子中，Lui 等人开发了一种方法来引导 hPSC 走向心脏特异性 EC 命运（56） 。 作者识别出 VEGF-A 在心脏 ECs 中是表达程度最高的生长因子，并确定了它是特异性地在心 脏 ECs 中表达。VEGF-A，不管是外源性添加的还是通过化学修饰 mRNA 转染到祖细胞群中 的，都会驱动 hPSC 源性多能心血管祖细胞向内皮命运发展（这类细胞在纯化的祖细胞群中 占 8%10%） ，并且还有一点，这些 ECs 表达心脏特异性标志物。 有趣的是，Lui 等人识别出 VEGF-A 被人类心脏 ECs 高度表达（56） ，但在 Nolan 等人已 有的微阵列数据中，并未发现其在小鼠心脏 ECs 中高度表达（与其它组织相比） 。这种矛盾 可能是因为种属差别所致。除此之外，分化介质中 VEGF-A 的存在可以解释 hPSC 源性 ECs 是如何受 Nolan 等人造成的选定心脏特异性标记物的表达驱动而分化的（16） 。VEGF-A 在 心脏特异性 ECs 本身中，而不是心脏实质组织中，高度表达，提示可能有自分泌途径参与 了 EC 组织的特化。 组织特异性内皮重编程组织特异性内皮重编程。在引导分化期间，微环境信号刺激了胞内信号的级联反应， 最终启动了一个发育程序，造成组织特异性基因表达并获得组织特异性表型。一个更直接 的产生 TS-MVECs 的方法可能是外力造成转录因子（TFs）的表达，从而调控组织特异性内 皮基因的表达。 一个潜在的将细胞重编程为 TS-MVECs 的策略是用那些在所有 ECs 普遍出现的 TFs 将细 胞重编程，然后将这些重编程 ECs 暴露在能够带来组织特异性的微环境中。实际上，已经 利用人类成纤维母细胞的转分化产生了 ECs（51，52） 。这些研究都利用了多能因子的表达 要么是 OCT4，SOX2，KLF4 以及 C-MYC，要么是只用 OCT4 和 KLF1（51，52）与许 可性条件联合，来获得转分化 ECs。与之相比，人类羊膜细胞重编程成为血管 ECs 是用 3 个 ETS 家族 TFs 的表达来完成的（ETV2，FLI1，以及 ERG1） ，该研究已经显示出沉默掉非血 管特异性基因能诱导血管特异性基因（53） 。另外，小鼠成纤维细胞的重编程使用了四种 TFs，这四种 TFs 也涉及到从内皮向造血细胞的转变过程，并且造血干细胞特化过程 （GATA2，GFI1b，C-FOS，以及 ETV6）诱导了内皮祖细胞表型（72） 。同时这些研究成功地 做出了重编程 ECs，却未见这些细胞获得组织特异性。 第二种潜在的重编程 TS-MVECs 的策略是利用内皮组织特异性 TFs 的表达，这些 TF 可 能通过挖掘基因组数据库，寻找那些在血管床之间差异性表达的转录因子，从而识别出来 （16） 。举例来说，转录因子 SFPI1 在骨髓和肝 ECs 中高度富集（16） ，并且可能调控骨髓 内皮和肝内皮特异性基因的表达。最后，将细胞重编程为组织特异性 ECs 的方法可能有多 种，既取决于输入细胞类型（即 EC 或非 EC） ，也取决于联合使用的 TFs（即，EC 身份因子 vs 组织特异性因子） 。 总结与未来的展望总结与未来的展