白花蛇舌草中有效成分含量测定方法研究进展

白花蛇舌草中有效成分含量测定方法研究进展白花蛇舌草中有效成分含量测定方法研究进展 白花蛇舌草为茜草科植物白花蛇舌草(Hedyotis diffusa Wi1ld)的干燥全草，主要含有 黄酮类、三萜类、蒽醌类、环烯醚苷萜类、多糖类等成分，具有抗肝炎、抗肿瘤、抗病毒、 抗炎抑菌、降血脂及降血糖等多种药理活性1-2。 11郑宏钧，詹亚华现代中药材鉴别手册郑宏钧，詹亚华现代中药材鉴别手册MM北京：中国医药科技出版社，北京：中国医药科技出版社，20012001：798798 22薛存宽，沈凯，蒋鹏，等缬草主要活性成分的初步薛存宽，沈凯，蒋鹏，等缬草主要活性成分的初步JJ现代中西医结合杂志，现代中西医结合杂志， 20032003，12(9)12(9)：912-914912-914 近年来，对白花蛇舌草中活性成分含量测定的报道越来越多，为此本文就近十年以来其含 量测定方法作一综述，并且对每一种方法的特点和适用范围进行了评述，为白花蛇舌草的 质量进一步评价提供参考。 高效液相色谱法高效液相色谱法 高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）是目前中药含量测 定中最常用的方法之一，它主要是利用要测定的指标成分与其他组分在流动相与固定相中 的分配系数不同而把指标成分分离出来并进行含量测定。具有分析速度快、分离效率高、 应用范围广、检测灵敏度高、自动化等优点，可用于分析样品中高沸点、热不稳定性、大 分子量的有效成分，是中药有效成分含量测定中应用较为广泛的一种分析方法 。使用 HPLC 法测定白花蛇舌草中有效成分的含量一般采用反相色谱法，但检测方式有紫外法 (UV)和蒸发光散射法(ELSD) 梁生旺梁生旺.中药制剂分析中药制剂分析M,北京：中国中医药出版社，北京：中国中医药出版社，2003:96. 11 UV 检测的色谱条件(见表 1) 表 1 HPLC法测定白花蛇舌草中有效成分的色谱条件 指标成分色谱柱柱温流动相检测波长流速 /（mmmm,m）/nm/mLmin1 乙酰基车叶草苷酸、 鸡屎藤次苷 Pinnacleu C18（2504.6,5） 25 甲醇-乙腈-1molL-1冰醋酸 (3:2:95)2301.0 反式 6-0-对香豆酰鸡屎藤苷甲 酯 Diamonsil ODS (2504.6,5)25 甲醇-水(45:55) 3101.0 3，4-二羟基苯甲酸甲酯 DiamonsilTM ODS (2004.6,5) 室温 甲醇-0.05的磷酸水溶液 (15:85)2540.8 2-甲基-3-羟基-4-甲氧基蒽醌 Diamonsil C18 (2004.6,5) 室温甲醇-水(62:38) 2671.0 2-甲基-3-羟基蒽醌 齐墩果酸、熊果酸 HiQ sil C18 (1504.6,5)30 甲醇-四丁基溴化铵 (20mmolL-1)-三乙胺 (90:10:0.02)(用冰醋酸调 pH6.9)2100.3 咖啡酸、槲皮素、山柰酚 Alhima C18 (2504.6,5)30 甲醇-0.5冰醋酸梯度洗脱 3501.0 熊果酸 Alltech RP-C18(2504.6,5)30 甲醇-水(90:10) 2101.0 (E)-6-0-对香豆酰鸡屎藤苷甲 Kromasil ODS C18 白花蛇舌草的化学成分较多，活性成分主要为黄酮类、蒽醌类、萜类、甾醇类等，同时测 定白花蛇舌草及其制剂中的两种或两种以上的主要活性成分为其质量控制打下坚实的基础。 黄芪甲苷是玉屏风中君药黄芪的主要有效成分，因此玉屏风质量控质大多测定黄芪甲 苷但由于使用 HPLC-UV 法测定，黄芪甲苷在紫外末端区才有吸收，对试剂要求较高， 其它成分峰干扰严重，因此人们开始关注改用更为先进的 ELSD 检测器 12 ELSD 检测的色谱条件 ELSD 的通用检测方法消除了常见于传统 HPLC 检测方法中的难点，不同于紫外检测器对 于无紫外吸收的化合物灵敏度低，而且只能使用不吸收紫外的流动相，ELSD 的响应不依 赖与样品的光学特性，任何挥发性低于流动相的样品均能被检测，不受其官能团的影响； 能与任何的挥发性流动相相容，可根据样品的溶解度或分离特性选择流动相；对几乎所有 的样品给出一致的响应因子，可以通过和内标比较定量未知化合物所以使用 ELSD 检测 更为先进和科学HPLC-ELSD 法检测玉屏风中黄芪甲苷含量的色谱条件见表 2 表 2 HPLC(ELSD)法检测定玉屏风中黄芪甲苷含量的色谱条件 由表 1 和表 2 可见，玉屏风的质量控制以黄芪甲苷含量测定为主，由于黄芪甲苷极性较大， 酯、香豆酸 (2504.6,5） 车叶草苷 Kromasil ODS C18 (2504.6,5 )30 乙腈-0.2磷酸(5:95) 2400.8 香豆酸 DiamonsilTM ODS (2004.6,5)25 甲醇-20mmolL-1:NH4AC(pH3.5) (25:75)3081.0 槲皮素、山柰酚 Alltima C18(2504.6,5)30 甲醇-0.5冰醋酸梯度洗脱 3501.0 香豆酸 AgilentEclipseDB- Cl8(2504.6,5)30 乙腈-0.1磷酸水溶液梯度洗脱 2301.0 熊果酸、齐墩果酸 Lichrospher Cl8(2504.6,5)30 甲醇-2醋酸（88:12） 2101.0 槲皮素 HypersilBDSC18(2004.6,5)25 甲醇-水-磷酸(50:50:0.2) 3701.0 齐墩果酸、熊果酸 AgilentC18(2504.6,5)20 甲醇-水-冰醋酸-三乙胺 (91.5:8.5:0.04:0.1)2100.8 齐墩果酸、熊果酸 Diamonsil C18 (2004.6,5) 室温甲醇-1HAc(35:65) 3081.0 齐墩果酸、熊果酸NucledureC18(1504.6,5)室温乙腈-磷酸盐缓冲液(45:55) 2201.0 齐墩果酸、熊果酸 Lichrospher C18 (2504.6,5)）30 甲醇-2冰醋酸水溶液(88:12) 2101.0 因此两种检测方法所用色谱柱均为 C。柱，柱温为室温到 40，流速为 0810mLarin_。 ，流动相也较为简单，一般选择乙腈一水 2 元系统，分离效果较 好使用紫外检测器时在检测波长选择上由于黄芪甲苷只有末端吸收，所以在 200210nm 处测定；用蒸发光散射检测器测定时漂移管温度一般为 90100，但载气流速不一此 外，玉屏风中黄芪甲苷的测定还可以尝试使用示差折光检测器池玉梅等2 利用 HPLC 示 差折光检测法测定了黄芪精口服液中黄芪甲苷。 2 薄层扫描法薄层扫描法 薄层扫描法是目前用于玉屏风质量控制的常用方法之一，具有简便、快速、选择性高和显 色方便等特点，为了提高灵敏度和重现性，现多采用双波长扫描法，而且一般使用硅胶 G 板使用该方法测定玉屏风中黄芪甲苷含量的主要参数见表 3表 3 TLCS 法测定玉屏风中 黄芪甲苷含量的条件从表 3 可以看出，薄层扫描法测定玉屏风中黄芪甲苷含量一般使用氯 仿一甲醇一水作展开剂，显色剂使用的是 10 硫酸乙醇溶液，105烘 57 分钟后扫描测 定但该方法简便、快速、重现性较好，但存在前处理步骤多，排除干扰较困难，数据准 确度较差等不足 3 分光光度法分光光度法 玉屏风中主要有效成分总皂苷类、总黄酮类和总多糖类均可加显色剂后用可见分光光度法 测 定，其中黄酮类成分含有共轭双键，在紫外区有特征吸收，可直接用紫外分光光度法分析， 但前者使用较多 自然科学版)第 zz 卷周春权等7 将玉屏风生药水煮，浓缩，醇沉得到的粗多糖，以葡萄糖 为标准品，采用改良的苯酚硫酸法进行测定，得出玉屏风中粗多糖的含量为 5793，相关 系数 09987，随后的药理研究表明，玉屏风的粗多糖对荷瘤小鼠的肿瘤生长有一定的抑 制作用，同时对动物免疫功能有升高的趋势陆晓和等2 在 538nm 处，采用薄层分析一紫 外分光光度法，以黄芪甲苷含量为指标，优选出玉屏风生药颗粒的制备工艺是颗粒为 5 目， 加 2O 倍水煎煮 3 次，每次 25arin；然后通过对玉屏风 3 种不同剂型的煎出率进行比较，发 现生药颗粒剂中黄芪甲苷含量和煎出率均高于生药饮片汤剂和免煎颗粒剂由于玉屏风中 化学成分复杂，黄芪甲苷含量测定采用一般提取纯化法无法消除干扰，因此依其化学性质， 他们采用氢氧化钾溶液皂化后提取，结果消除了干扰刘焕蓉等1 妇将玉屏风水煎，得水 提液；药渣再用质量分数为 8O 的乙醇煎煮，得醇提液；水提液经树脂纯化得纯化液，然 后利用紫外可见分光光度法分别于 560，500，490nm 处测定总皂苷、总黄酮、总多糖的含 量，通过 比较不同提取液中有效成分的含量，考察了药渣再提和树脂纯化对实验结果的影响结果 显示，经过树脂纯化与药渣再提后总皂苷、总黄酮、总多糖的相对含量是未经树脂纯化水 提液的 18 倍，因此表明，大孔树脂作为一种新的分离技术可用于玉屏风中有效成分的富 集和纯化，并且认为对水提液进行纯化，实质上是洗掉了粗提液中可溶于水的杂质，有效 成分的增加主要是来自于对的药渣再次提取，所以药渣重提是很有必要的王琳等28以 黄芪甲苷为对照品，于 538nm 波长处，采用紫外分光光度法，考察了质量分数为 6O的 乙醇超声提取、质量分数为 95 的乙醇超声提取和质量分数为 8O 的乙醇回流提取三种工艺 所得玉屏风散中黄芪甲苷的含量，得出质量分数为 8O 的乙醇回流提取为最佳工艺，不同 批次玉屏风散提取物中黄芪甲苷得含量在 96 以上，RSD 小于 2实验表明该方法简单、快 速、灵敏、重现性好，适于医院对制剂的质量控制文献7，27，ii，283 采用分光光度法 测定黄芪甲苷是利用香草醛在浓硫酸或冰醋酸作用下与黄芪甲苷显色反应，其优点是分析 速度快、成本低，但由于玉屏风复方化学成分复杂，空白值较高，干扰严重，所以该方法 的应用受到一定限制 另外，有文献利用在浓磷酸条件下，黄芪甲苷与香草醛反应的产物具有荧光特性2，以及 在硫酸条件下黄芪甲苷与茴香酸反应的产物具有荧光特性3。 。 ，采用荧光光度法测定了黄 芪药材中黄芪甲苷的含量实验表明该方法灵敏度高、选择性好、线性范围宽、检出限低、 操作简便，可直接用于黄芪生药、中药复方、黄芪制剂以及含药血清等多种样品的测定， 方法无干扰荧光光度法既克服了薄层扫描法操作繁琐，准确度相对较差的缺点，又避免 了使用 HPLCUV 法黄芪甲苷仅在 200nm 处有末端吸收的不足，也可用于玉屏风中黄芪 甲苷的含量测定 4 结论结论 本文综述和比较了近年来白花蛇舌草中有效成分含量测定较为常用的方法，包括高效液相 色谱法、薄层扫描法、分光光度法，这些方法各具特点和一定的适用范围其中高效液相 色谱法准确度高，特别是 ELSD 检测器的使用，弥补了黄芪甲苷含量测定时使用紫外检测 器的不足，因此在玉屏风质量控制中使用最多；同时还可以尝试使用示差折光检测器，该 检测器也可以弥补紫外检测器的不足，而且价格比蒸发光检测器低廉薄层扫描法准确度 不如高效液相色谱法，但简便、快速、重现性较好，因此多用于工艺研究，如严格控制色 谱条件，也可用于玉屏风的质量控制虽然紫外可见分光光度法成本低，分析速度快，但 是玉屏风化学成分复杂，干扰较严重，因此在制备及提取工艺比较和剂型改革等研究中使 用较普遍如果将荧光光度法用于玉屏风中黄芪甲苷含量的测定，则可部分弥补紫外可见 分光光度法的不足相信随着一些新方法的应用，必将有助于进一步完善玉屏风的质量标 准，对保证人民用药安全具有十分重要的意义。 摘要摘要 阿魏酸是多种中药的有效成分之一，具有多方面的重要生物学活性，许多生药及其制剂均选 用阿魏酸的含量作为其质量控制指标，本文对阿魏酸含量测定方法的研究进展作一综述。随着含阿魏酸生 药的指纹图谱和质量标准方面的研究的不断发展,简便快速、准确高效的测定方法也将会不断涌现,阿魏酸 的分离和含量测定技术将会日臻完善,为制剂中阿魏酸的质量控制提供更为可靠的依据。 关键词关键词 阿魏酸；含量测定 FerulicFerulic acidacid ProgressProgress DeterminationDetermination LI Quanbin1, HE Kaiyong2, WU Jianping1 (1. Hubei College of Traditional Chinese Medicine, Jingzhou 434020 2. Hubei institute for Food and Drug control, Wuhan Hubei，Hubei 430071) Abstract Ferulic acid is one of many active ingredients of Chinese medicine, has many important biological activities, many crude drugs and their preparations are of ferulic acid as indicators of its quality control, ferulic acid content determination method of research progress are reviewed in this paper.With the ferulic acid containing the fingerprint of crude drug research and quality standard of continuous development, simple and rapid, accurate efficient determination will continue to emerge,ferulic acid separation and determination of technology will continue to improve for the preparation quality control of ferulic acid to provide a more reliable basis. Keywords Ferulic acid；content determination 斯建勇，陈迪华，潘瑞乐，等白花蛇舌草的化学成分研究J天然产物研究与开发， 2006，18：942 15刘晶芝，王莉白花蛇舌草化学成分研究J河北医科大学学报，2007，28(3)：188 16周建波，龙斯毕，黄存礼白花蛇舌草的微量元素分析J中国中药杂志， 1990，15(12)：36 17王丽，周诚，麦惠珍白花蛇舌草及水线草挥发性成分研究J中药材，2003，26(8)： 563 18刘志刚，罗佳波，陈飞龙不同产地白花蛇舌草挥发性成分初步研究J中药新药与 临床药理，2005，16(2)：132 马临，李俊明，陈玉青，等高效液相色谱测定白花蛇舌草中 3，4-二羟基苯甲酸甲酯的 含量J时珍国医国药，2009，20(3)：528 马临，李俊明，陈玉青，等HPLC 法测定白花蛇舌草注射液中 3，4-二羟基苯甲酸甲酯的 含量J沈阳药