hbv m 定量与hbv dna检测的相关性研究(1)

HBVHBV M M 定量与定量与 HBVHBV DNADNA 检测的相关性研检测的相关性研 究究(1)(1) 作者：冯瑶 1，张乐之 2，吴淑梅 2，王智华 3，方超 平 2 【摘要】目的探讨 HBVM 与 HBVDNA 检测的相关性及定 量检测 HBVM 的临床应用价值。方法荧光定量 PCR 定量检测 HBVDNA，时间分辨荧光免疫分析法定量检测 HBVM。结果三 组患者血清中 HBeAg 检出率差异有显著性（PP） ； HBVDNA104copy/l 时与 HBsAg 及 HBeAg 成正相关 （PP） ；三组患者中 HBsAg 与 HBsAb 有相关性（PPP） 。 结论 HBsAg 和 HBeAg 抗原可作为监测 HBV 感染和复制的量 化指标。动态监测 HBVM 的量能够反映机体对病毒感染的免 疫反应情况，可作为观察临床病程、疗效的依据。 【关键词】乙型肝炎病毒标志物；乙型肝炎病毒 DNA；荧光 定量 PCR；时间分辨荧光免疫测定法 【Abstract】ObjectiveToinvestigatetherelationshipbe tweenHBVDNAconcentrationandserologicalmarkers （HBVM） concentration，andtoexplorethesignificanceofqualifi ngtheHBVserologicalmarkers，concentration.MethodsTR FIAwasusedtodetecttheconcentrationofHBVM，fluoresce nce- quantitativePCRwasusedtoqualifytheHBVDNAconcentrati on.ResultsInthreegrouppatients，thepositiveratesofH BeAgweresignificantdifference.InIgroup，theHBVDNAis norelatedtoHBVM.WhentheHBVDNA104copy/l，theHBVD NAiscloselyrelatedtoHBsAgandHBeAg，whiletheHBVDNAis norelatedtoHBeAbandthreegrouppatientsHBsAgisrelated totheHBVDNA107copy/lHBeAgisrelatedtotheHBVDNA 104copy/lHBeAgisnorelatedtoTRFIAisasensitivemetho dforHBVMquantification，whichcanmonitorpatient sconditionandtherapeuticefficacy，andsuggesttheprog nosisofchronichepatitis.HBsAgandHBeAgcanbemonitorHB Vinfectionandreproduce. 【Keywords】HBVM；HBVDNA；fluorescence- quantitative；PCR；TRFIA 随着全自动荧光定量 PCR 仪的问世，HBVDNA 定量检测在确 诊 HBV 感染中的地位更加巩固，但因其操作环境和技术要 求较高，价格比较昂贵等原因使其应用受到了一定限制。 本文采用时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）定量检测 HBV 阳性患者血清 HBVM，探讨定量检测 HBVM 与 HBVDNA 的相关 性，旨在寻找一种确诊 HBV 感染的简便易行的方法，现报 告如下。 1 对象与方法 标本来源选自门诊及住院患者血清 HBVDNA 阳性 （HBVDNA5102copy/l）标本 66 例，其中男 40 例， 女 26 例，年龄 1564 岁。收集血清标本置-20冷冻保存 待检。 仪器德国 ROCHE 公司 Lightcycler 荧光定量 PCR 仪；上海 新波 ANYTESTXX 时间分辨荧光分析仪。 检测方法试剂 HBVDNA 采用 FQ-PCR 定量检测，试剂选用深 圳匹基公司生产乙肝病毒（HBV）核酸扩增（PCR）荧光检 测试剂盒；HBVM 检测采用时间分辨荧光免疫分析法，试剂 选用上海新波公司生产的乙肝血清标志物定量检测试剂盒； 以上实验均严格按说明书操作。 阳性结果判断标准 HBVDNA5102copy/l；HBsAg/ml；HBsAb10mIU/ml ；HBeAg/ml；HBeAb/ml；HBcAb/ml 者判为阳性。 统计学分析计数资料采用 2 检验，相关性用相关检验分 析，成对双样本均值分析用 t 检验。 2 结果 按 HBVDNA 拷贝数将待测标本分三组：组 20 例：HBVDNA 拷贝在 102103copy/l；组 26 例：HBVDNA 拷贝在 104106copy/l；组 20 例：HBVDNA 拷贝 107copy/l。因部分标本 HBVM 浓度过低无计算值，故 采用 HBVM 荧光数进行统计处理。 三组中 HBVM 阳性检出率见表 1。 HBVDNA 与 HBVM 各项数值间相关系数 r 值及 P 值见表 2。 3 讨论 本文应用 TRFIA 法定量检测 HBVDNA 阳性血清中 HBVM，结果 表明 HBsAg 和 HBeAg 均有较高的阳性率，其中 HBeAg 在不 同 DNA 拷贝组中氧性率差异有显著性（PP 表 1 三组患者血 清 HBVM 阳性率（%） 注：2 检验，*P 表 2HBVDNA 与 HBVM 各项间相关系数 及 P 值 注：A-HBVDNA；BHBsAg；CHBsAb；DHBeAg；E HBeAb；FHBcAb 由表 2 可以看出在 HBVDNAP） 。HBVDNA104copy/l 时，与 HBsAg 和 HBeAg 成正相关（PPP） 。这可能是因为 病毒低水平复制时机体存在转换不稳定现象，此时依靠定 量检测 HBVM 不能说明病毒的复制水平。在病毒复制活跃时， 可以依靠定量检测 HBVM 来判断病毒复制水平。 由表 2 可知 HBsAg 与 HBsAb 均成负相关，在 HBVDNA 拷贝数 107copy/l 时 HBeAg 与 HBeAb 荧光数成正相关，与浓度 成负相关，提示 HBV 的感染及复制情况与机体对 HBV 的免 疫反应状态具有一致性，即病毒复制越活跃机体免疫应答 水平越高。同时说明应用 TRFIA 法定量检测 HBVM，可以监 测处于转化期患者的病情和治疗效果，较早地提示肝炎慢 性化进程