细胞的制备及在肿瘤治疗中的应用课件

DC-CIK细胞的制备及在肿瘤 治疗中的应用 恶性肿瘤的治疗现状 恶性肿瘤 治愈45 难于治愈55 未缓解缓解后复发 恶性肿瘤的多学科综合治疗 恶性肿瘤各种治疗手段各具优势与不足 n肿瘤外科学 n肿瘤放射治疗学 n肿瘤化学治疗学 n肿瘤生物学治疗 n侧重点不同 n局部与全身 n早、中、晚期 肿瘤免疫学治疗的优点 n可以有效地杀灭患者术后和放化疗后体内残存的肿 瘤细胞，达到治疗肿瘤、预防复发与转移和最终根 治肿瘤的目的。 n具有特异性强、适用性广、副作用轻等优点。 肿瘤免疫学治疗 n非特异免疫刺激剂及细胞因子治疗： IL2、IL6、 IL12、GM-CSF、TNFa、IFNa、IFNr等体内应用，装 载有细胞因子基因的细胞治疗。 n治疗性疫苗：肿瘤抗原或多肽抗原疫苗、装载肿瘤 抗原基因的病毒疫苗、基因修饰的肿瘤细胞疫苗、 APC细胞疫苗、抗独特性疫苗。 nMab导向治疗： Mab、Mab-毒素、Mab-同位素、鼠- 人单抗、人源单抗、双特异性抗体。 n过继性免疫细胞治疗：供者淋巴细胞输注、LAK、 TIL、CIK、多种方法诱导的CTL、DC-CIK等。 过继免疫疗法 n通过把在体外扩增的大量特异性效 应细胞回输给患者后，产生直接杀 伤肿瘤细胞的作用。 DC-CIK培养及其应用 nCIK细胞：Cytokine Induced Killer Cell nDC：Dendritic Cell CIK细胞特性 n分布：肝脏和外周血 n来源：CD3+CD56+T细胞和CD4-CD8+T细胞 n n 一群以一群以CD3+CD56+TCD3+CD56+T为主的异质细胞包括为主的异质细胞包括/ /T T细胞细胞 , ,/ /T T细胞细胞 n n 与与LAKLAK、CD3AKCD3AK细胞相比高效、广谱杀伤、非细胞相比高效、广谱杀伤、非MHCMHC限限 制制 DC与T细胞 nDC高表达MHC-类、类分子，MHC分子 与其捕获加工的肿瘤抗原结合，形成肽- MHC分子复合物，递呈给T细胞，从而启动 MHC-I类限制性CTL反应和MHC-类限制性 的CD4+ Thl反应 ； nDC还通过其高表达的共刺激分子(B7-1、 B7-2等)提供T细胞活化所必须的第二信号 ，启动了免疫应答。 DC负载肿瘤抗原 肿瘤杀伤作用 DCDC在在DC-CIKDC-CIK杀伤肿瘤细胞中的作用杀伤肿瘤细胞中的作用 n诱导抗原特异性CTL反应 n增加CIK细胞的扩增倍数 n增强CIK肿瘤杀伤效力 MHC：抗原提呈 自分泌细胞因子：INF,IL-12等 抑制CD4+CD25+调节T细胞生长 CIK细胞的制备 PBMNC (CS3000 Plus) In a 3000ml Baxter bag Serum free culture medium IFN 第一天 Il-2 第二天 CD3 mAb 第二天 IL 1 第二天 14 days lCS-3000采集PBMNC lFicoll分离PBMC,洗2次 l1-2106/ml接种至含无血清培养基 的培养袋中，1000ml/袋，加入IFN- 1000U/ml，放置37，5%的CO2孵箱 中培养24h l加入IL-1 100U/L，CD3单抗 50ng/ml，重组人IL-2 300U/L，继续 培养，每3天半量换液，并补加IL-2 300U/ml。 l 分别于第5，7，9天取细胞做细胞表 型分析（FCM检测），细胞杀伤实验（ MTT法） l收集细胞，含0.5%白蛋白的生理盐水 洗涤 l回输 CD3主要促CIK细胞增殖，促IL-2自分泌，也提高CIK杀伤活性 IFN-r/IL-1，上调细胞表面IL-2R表达，IFN-r先于IL-2加入，有效激活效应细胞，增强抗肿瘤 活性 DC的培养 BMDCBMDC Serum free culture mediumSerum free culture medium IL-4, GM-CSFIL-4, GM-CSF TNFTNF 成熟成熟DCDC 79 days79 days IL-4 , GM-CSFIL-4 , GM-CSF TNFTNF PBDCPBDC Tumor antigen DC-CIK共培养 成熟成熟DCDC CIKCIK细胞细胞+ CIK细胞的增殖 62.% 84.7% 89.5% 28.2%43.1%52.3% CIKCIK细胞对自体原代白血病细胞的细胞对自体原代白血病细胞的 杀伤作用杀伤作用 lCIK细胞对自体原代白血病细胞 有明显杀伤作用，且其细胞毒作用 随着效靶比的增加而进一步增强， 在效靶比为20：1时，其中位杀伤 率分别为51.33%,52.95% 肿瘤细胞冻融物 肿瘤细胞坏死物 正常生长的肿瘤细胞 无肿瘤细胞 无DC DC-CIK对肿瘤杀伤作用 DC-CIK对肝癌细胞的杀伤活性 *DC与CIK共培养后，CIK增殖能力和杀伤活性明显增强 DC/CIK治疗结肠癌血源性肺转移的实验研究 DC-CIKDC-CIK治疗乳腺癌治疗乳腺癌 CIK/DC-CIK治疗恶性血液病合并丙肝 HCV-RNAHCV-RNA转阴例数转阴例数 14/18 14/18 治疗治疗2 2疗程以上疗程以上HCV-RNAHCV-RNA持续阴性持续阴性 6/9 6/9 ALT/AST/TBILALT/AST/TBIL明显下降或正常例数明显下降或正常例数 10/10 10/10 CIK治疗1例白血病合并丙肝后肝功的变化 新技术 nRetroNectin activated killer cell（RAK） nDC相关的技术 RetroNectin activated killer cell（RAK） n重组人纤维蛋白片段(RetfoNectin)可参与细胞的附 着、伸展、分化和增殖。该产品已注册美国药典和 国际专利。 n当包被在培养皿和培养瓶中时，RetroNectin能显 著提高逆转录病毒转染入哺乳动物细胞内的效率。 nRetroNectin还可参与细胞的附着、伸展、分化和 增殖，可增加体外CIK细胞扩增倍数，及肿瘤杀伤 活性。 RetroNectin activated killer cell（RAK） zoledronate acid/唑来膦酸 n转染AFP质粒的腺病毒感染DC nDC-CIK共培养 n杀伤活性检测 健康供着DC和CIK 肝癌患者DC和CIK CIK/DC-CIK治疗后的不良反应 n n 寒战寒战 n n 发热发热 n n 疲乏疲乏 n n 无力无力 n