性病的实验室检测及其意义课件

性病的实验室检测及其意义 上海市皮肤病医院 周平玉 淋病的实验室诊断 淋病的主要实验室诊断方法 直接显显微镜检查镜检查 ； 分离培养淋球菌； 非培养技术检测淋球菌细胞成份如抗原 或DNA（EIA, PCR/LCR） 显微镜检查的临床意义 男性尿道标本: 多形核细胞内见到形态典型的革兰阴性 双球菌具诊断价值 敏感性及特异性：95%99% 宫颈标本、无症状男性尿道标本 敏感性：4070% 不推荐直接显微镜检查诊断直肠和咽部淋 球菌感染。 如果在多形核细胞外见到形态典型的革 兰阴性双球菌，需进一步培养确认。 淋球菌培养 n培养法为诊断淋病的金标准。 从选择性培养基上分离出淋球菌即可诊断淋病。 n初步鉴定淋球菌的主要依据 菌落特征 氧化酶试验 革兰染色 淋球菌培养的的临床意义 n培养特异性：100%，敏感性 81-100% 。 n宫颈、无症状男性尿道、直肠、咽部标本等 应做淋球菌培养 n可发现无症状淋球菌感染患者； n可用于进一步作药敏试验； n可用于治疗后的判愈试验。 淋病其它诊断技术 核酸检测的特点及临床意义 不依赖于活的病原体的存在，无需特殊运送条 件； 敏感性高，不仅适合尿道或宫颈标本，还可以 采用尿液、阴道标本； 不能进行抗生素敏感性试验； 用于判愈试验需在治疗后至少3 周以上进行. 沙眼衣原体感染的实验室诊断 细胞培养法 免疫层析快速抗原检测 酶联免疫抗原检测 核酸扩增检测 衣原体培养的临床意义 敏感性7080 特异性100 可用于判愈 可用于确诊 缺点 费时（需35天），费力，技术要求高 不宜作为临床常规检查 不宜用于大规模的筛查和流行病学调查 衣原体抗原快速检测的临床意义 优点： 简易，方便，快速，尤其 适用于基层单位 宫颈标本阴道标本 敏感性50%33% 特异性98%99% 缺点： 标本中需要足够数量的沙眼衣 原体抗原，否则有假阴性结果 现有的核酸检测方法 PCR LCR SDA TMA Real time PCR 衣原体核酸检测 优 点: 敏感性：-98 特异性: -99 缺 点： 实验室条件和技术要求高 成本高、费时、假阳性 衣原体核酸检测的临床意义 生殖器疱疹实验室诊断 HSV实验室诊断的意义 临床诊断的准确性：50%70%，通过实验室检 测手段可帮助诊断 亚临床感染: 孕妇、性伴的检测等 进行HSV分型的意义 HSV-2是该病的主要病原体， HSV-1约占该病的30% 两型HSV感染的预后不同 生殖器疱疹实验室诊断方法 病原学诊断 病毒检测 抗原检测 DNA检测 血清学检测-抗体检测 HSV血清学检测的意义 nHSV感染的血清流行病学调查 n感染者性伴的HSV感染状况的判断 n孕妇产前监测 HSV型特异性血清抗体检测是发现亚临床及无症 状生殖器HSV感染者的最可行手段，对于防止性伴间 和母婴间HSV传播有着重要意义 HPV-DNA检测的意义 nHPV感染流行病学调查 nHPV DNA定型 高危型HPV病毒负荷的增加可使 女性发生宫颈癌及宫颈癌前病变的风险显著增加 梅毒实验室监测及临床意义 梅毒螺旋体也称苍白密螺旋体苍白亚种 (Treponema pallidum subspecies pallidum)，是一 种小而纤细的螺旋状微生物，长515m，直径 约0.2m，活体平均有814个规则的螺旋。 梅毒螺旋体透明而不易被染色，在普通显 微镜下不易发现，只有在暗视野显微镜、免 疫荧光或Fontana镀银染色等特殊染色下才能 观察到。 梅毒螺旋体在体外不易生存，离开人体很 快死亡，其生存最适温度为37。煮沸、干 燥、肥皂水以及一般的消毒剂很容易将其杀 死。 梅毒螺旋体不耐热，加热至42 2个小时 可将它杀死，100时立即死亡；但耐低温 ，在0时可存活48小时，置于-78数年仍 具有传染性。 梅毒螺旋体尚不能在体外培养繁殖，人是 其唯一的自然宿主。梅毒螺旋体可在家兔睾 丸中生长繁殖，用于抗原制备和实验研究。 梅毒螺旋体传代时间为3033小时，繁殖 方式主要为横断分裂。 1998年完成了梅毒螺旋体全基因组测序。 梅毒实验室检测的特点 病原学检测血清学检测 非梅毒螺旋体抗原血清学检测梅毒螺旋体抗原血清学检测 暗视野显微镜检查VDRLFTA-ABS 银染色镜检USRTPPA/ APHA 核酸检测RPRELISA TRUST发发光法 胶体金法 不同原理的方法：检测策略 临床意义解释复杂：不同方法结果判断、血清固定、前带现象 缺乏特殊梅毒的有效检测方法：胎传梅毒、神经梅毒 梅毒螺旋体暗视野检查 原理 暗视野映光检查是采用一个特殊的聚光器，分为 干系和湿系两种，其中央均为黑漆所遮蔽，仅在圆周 边留有光线斜角处，光线只可从其圆周边缘斜角射到 载玻片上。梅毒螺旋体检查一般采用湿系聚光器。倘 若斜射光线遇到载玻片上的物体，如螺旋体等，物体 会发光显现。本法检查梅毒螺旋体对于梅毒有病原学 诊断的价值。 梅毒螺旋体暗视野检查 材料 暗视野显微镜、钝刀（刮勺）、载玻片、注射 器、注射针头、无菌等渗盐水。 梅毒螺旋体暗视野检查 取材 皮肤粘膜损害取材：首先在载玻片（厚度为1.0 1.2mm）上滴加50100L盐水备用。然后用棉 拭子取无菌盐水轻轻擦去皮损上的污物。如皮损上 有痂皮，可用钝刀小心除去。再用钝刀轻轻地刮数 次（避免出血），取组织渗液与载玻片上的盐水混 匀，加盖玻片置暗视野显微镜下检查。 梅毒螺旋体暗视野检查 取材 淋巴结取材：消毒淋巴结表面皮肤，用无菌干 棉球擦干。用1mL无菌注射器配12号针头，吸取无 菌等渗盐水0.250.5mL，以无菌操作穿刺淋巴结 并注入盐水，再吸入注射器内，反复23次后，取 少量淋巴液于载玻片上，加盖玻片，置暗视野显微 镜下检查 梅毒螺旋体暗视野检查 方法 在暗视野聚光器（此法用湿系暗视野聚光器） 上加一滴甘油缓冲液（甘油和0.1mol/L PBS，pH 7.0按7:3配制）。 载玻片置载物台上，上升聚光器使甘油缓冲液 接触载玻片，先用10倍物镜，使物像清晰，再用40 倍物镜观察，寻找有特征形态和运动方式的梅毒螺 旋体 梅毒螺旋体暗视野检查 结果及解释 暗视视野显显微镜镜下，典型的梅毒螺旋体呈白色发发 光, 其螺旋较较密而均匀。运动规动规 律，运动动性较较强， 其运动动方式包括旋转转式，围绕围绕 其长轴长轴 旋转转； 蛇行式, 全身弯曲如蛇行；伸缩缩其螺旋间间距离而 移动动。观观察其运动动形式有助于与其他螺旋体相鉴鉴 别别。 梅毒螺旋体暗视野检查 结果及解释 未检出螺旋体不能排除梅毒的诊断，阴性结果 可能说明：螺旋体数量不足(单次暗视野显微镜 检查阳性率小于50%)。患者已接受抗生素或杀 灭梅毒螺旋体的药物治疗。损害接近自然消退。 损害不是梅毒。 梅毒实验室检测的特点 临床表现 取材部位 检查方法 一期梅毒 溃疡 淋巴结 病原学检查 血液 血清学检查 二期梅毒 皮损 淋巴结 病原学检查 血液 血清学检查 潜伏梅毒 血液 血清学检查 三期梅毒 血液血清学检查 神经梅毒 血液血清学检查 脑脊液细胞、蛋白量检查VDRL等 梅毒血清学检测原理 当人体感染梅毒螺旋体后4周-10周左右 ，血清中可产生一定数量的抗类脂质抗原 的非特异性抗体（反应素）和抗梅毒螺旋 体抗原的特异性抗体。这些抗体均可用免 疫学方法进行检测，是辅助诊断梅毒的重 要手断. 梅毒血清学检测 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 性病研究实验室试验（VDRL） 血浆反应素环状卡片试验（RPR、TRUST） 梅毒螺旋体抗原血清学试验 梅毒螺旋体血球凝集试验 （TPHA） 梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA） 荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）、 梅毒螺旋体抗体酶联免疫试验（ELSA） 胶体金梅毒快速检测试验 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳 性。 非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速， 敏感性和特异性较好。适用于梅毒的筛查。 经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗 效观察、判愈、复发或再感染的指征。 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 存在假阳性反应 技术性假阳性反应 由于标本的保存不当（如细胞污 染或溶血）、试剂质量差或过期、或实验室操作错误所造 成。 生物学假阳性反应 是由于患者有其他疾病、吸毒或 生理状态发生变化，使梅毒血清试验出现阳性 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 所有的非梅毒螺旋体血清试验的抗原基本成分都 是一样的，包括RPR、TRUST等 基本成分是心磷脂 卵磷脂和胆固醇 抗原抗体结合形成复合物、凝集成网状沉淀颗粒 、肉眼可观察结果 方法敏感性和特异性都基本相似 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 未经治疗的病人和部分经过治疗的患者，其血清内的反应 素可长期存在。 经正规治疗后，反应素可以逐渐减少，并可转为阴性 早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后3个月 ，其抗体滴度下降2个稀释度，6个月下降4个稀释度。 一期梅毒1年后绝大部分转为阴性 二期梅毒2年后大部分转为阴性。 晚期梅毒治疗后血清滴度下降缓慢，大部分病人血 清反应可能终身阳性。 非梅毒螺旋体抗原血清试验操作与结果解读 1、性病研究实验室（VDRL）玻片试验 定性试验 a. 血清标本需56灭活30分钟备用； b. 吸取0.05mL血清放入玻片圈内，将血清涂开至整个 圈内； c. 用标准针头加入1滴VDRL抗原； d. 将玻片置旋转器上摇动4 min，1805次/min，立即 置1010倍显微镜下观察。 非梅毒螺旋体抗原血清试验操作与结果解读 大或中等大小的絮状物，液体清亮: 3+-4+强阳性反应 絮状物较小，液体较清亮: 2+ 阳性反应 絮状物较小，均匀分布，液体混浊 1+ 弱阳性反应 抗原颗粒稍粗，无凝集 可疑 抗原颗粒均匀，针状细小: 阴性反应 非梅毒螺旋体抗原血清试验操作与结果解读 定量试验 a. 在反应板18孔各加等渗盐水0.05 mL b. 吸取0.05 mL血清标本（血清已灭活）置第1孔与等渗 盐水混匀，吸取0.05 mL稀释液至第2孔混匀，再吸取0.05 mL至第3孔，如此连续稀释至第8孔，弃0.05 mL稀释液。稀 释度为原倍、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128 ，必要时可稀释至更高倍数 c. 每个稀释度加入抗原1滴 d. 旋转速度和时间同定性试验 非梅毒螺旋体抗原血清试验操作与结果解读 2、快速血浆反应素（RPR）环状卡片试 验 RPR试验试验 是VDRL试验试验 的一种改良方法 。该该法是在抗原中加入活性炭颗颗粒作为为指示物， 特制的白色纸纸卡替代了玻片。试验结试验结 果易于判断 ，肉眼即可观观察，血清不需灭灭活，也可用血浆进浆进 行检测检测 ，试验结试验结 果可保存。抗原放4冰箱可保 存1年。 非梅毒螺旋体抗原血清试验操作与结果解读 定性试验 a. 吸取0.05 mL血清或血浆加于卡片圈内，并均匀 地涂布在整个圈内（每张纸卡有10个或12个反应圈 ）； b. 将抗原轻轻摇匀，用标准针头吸取抗原，每个 标本加1滴抗原； c. 将卡片置水平旋转器旋转8 min，1005转/min ； d. 立即在明亮光线下观察结果。 非梅毒螺旋体抗原血清试验操作与结果解读 中到大的黑色絮状物，液体清亮 3+-4+ 强 阳性 小到中的黑色絮状物，液体较清亮 2+ 阳 性 小的黑色絮状物，液体混浊 1+ 弱 阳性 仅见活性炭颗粒集于中央一点或均匀分散 阴 性 非梅毒螺旋体抗原血清试验操作与结果解读 定量试验 RPR定量试验的指证与VDRL试验相同 在圈内加入0.05 mL等渗盐水（一般作68个稀释度）， 勿将盐水涂开 b. 吸取0.05 mL血清或血浆作系列稀释（1:21:64）， 当稀释到最后的第6孔时，弃去0.05 mL稀释液。从第6孔起 将血清稀释液涂布整个圈内，再涂布第5孔，依此向前到第 1孔 c. 滴加抗原，旋转时间转时间 、速度和观观察结结果同定性试验试验 。 非梅毒螺旋体抗原血清试验操作与结果解读 甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） TRUST试验原理与RPR试验原理相同 唯TRUST试验的抗原中加入甲苯胺红颗粒代替活性炭颗 粒指示物，使阳性结果出现红色絮状现象，阴性结果见红色 颗粒集于中央或均匀分散。 TRUST试验方法及结果判断均与RPR试验相同。 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 假阳性反应的处理 q技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假阳性反应， 经过重复试验即可除外。 q对生物学假阳性反应，应做TPHA（TPPA）等梅毒螺旋体抗原 血清学试验。 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 前带现象 指非梅毒螺旋体抗原血清试验中，有时血清中 存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴性 反应的结果，而临床上又表现为二期梅毒，此时将 血清稀释后再进行试验，出现了阳性的结果，该现 象称为前带现象。 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 耐血清性（血清固定） 晚期耐血清性与梅毒的类型及开始治疗的 时间早晚有关。晚期耐血清性病人已经足够量的治 疗后，即使再予更多地或无限制地治疗也不能使血 清滴度降低。对于这种病人，需经过详细的检查， 除外神经、心脏