15 生物化学实验--琥珀酸脱氢酶的作用及丙二酸的抑制作用.doc_第1页
15 生物化学实验--琥珀酸脱氢酶的作用及丙二酸的抑制作用.doc_第2页
15 生物化学实验--琥珀酸脱氢酶的作用及丙二酸的抑制作用.doc_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

琥珀酸脱氢酶的作用及丙二酸的抑制作用 【目的】 1 掌握琥珀酸脱氢酶作用及丙二酸抑制作用的实验技术与原理。 2 深化理解酶的竞争性抑制作用的特点。 【原理】 肌肉组织含有的琥珀酸脱氢酶是一种结合蛋白酶，以 FAD 为辅基。它能催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸， FAD 接受氢生成 FAD2H 。体外实验以美蓝 ( 甲烯蓝 ) 为受氢体，使美蓝还原生成美白 ( 甲烯白 ) 。其反应如下： 琥珀酸脱氢酶活性越高，美蓝脱色所需的时间越短，由于美白易被空气中的氧氧化成美蓝。故实验需在无氧条件下进行，可加一层液体石蜡以隔绝空气。 丙二酸与琥珀酸的化学结构很相似，能和琥珀酸竞争与琥珀酸脱氢酶结合，从而抑制琥珀酸的脱氢作用。其抑制程度与抑制剂和底物二者的浓度有关。本实验通过不同浓度的琥珀酸和丙二酸来观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用。 【器材】 1 研钵与剪刀 2 漏斗 3 纱布 4 恒温水浴 【试剂】 1 0.2mol/L 琥珀酸溶液 2 0.02mol/L 琥珀酸溶液 3 0.2mol/L 丙二酸溶液 4 0.02mol/L 丙二酸溶液 以上四种溶液均先用 5mol/L NaOH 溶液调至 pH7.0 ，再用 0.01mol/L NaOH 溶液调至 pH7.4 。直接用琥珀酸钠或丙二酸钠配制亦可。 5 1/15mol/L 磷酸盐缓冲液（ pH7.4 ） 1/15mol/L Na 2 HPO 4 80.8ml 与 1/15mol/L KH 2 PO 4 19.2ml 混匀即可。 6 0.02% 美蓝溶液 7 液体石蜡 【操作】 1 肌肉提取液的制备 取用蒸馏水清洗过的新鲜动物肌肉组织约 10g ，置于研钵（或匀浆器）中，研磨成糜状，然后每 克 肌肉组织加 4 倍体积的冰冷的 pH7.4 1/15mol/L 磷酸盐缓冲液，混匀，用双层纱布过滤，取滤液备用。 2 酶促反应 取试管 5 支，编号，按下表操作。 试剂（滴） 1 2 3 4 5 肌肉提取液 20 20 20 20 - 0.2mol/L 琥珀酸溶液 4 4 4 - 4 0.02mol/L 琥珀酸溶液 - - - 4 - 0.2mol/L 丙二酸溶液 - - 4 4 - 0.02mol/L 丙二酸溶液 - 4 - - 4 蒸馏水 4 - - - 24 0.02mol/L 美蓝溶液 2 2 2 2 2 将上述各试管液混匀后，沿各管壁加入液体石蜡 5 10 滴，使其在液面形成一薄层以隔绝空气。置于 37 水浴中保温，记录各管保温开始时间及美蓝开始脱色的时间。 3 计算并解释各管美蓝颜色变化原因。 美蓝开始脱色时间保温开始时间美蓝脱色所用时间。 【注意事项】 1 加液体石蜡时宜斜执试管，沿管内壁缓缓加入，不要产生气泡。 2 加完液体石蜡后，观察结果过程中，不要振摇试管，以免溶液与空气接触而使美白重新氧化变蓝。 3 实验完毕，一定要将试管内的液体石蜡洗净
人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课设设计

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论