药物的杂质检查.ppt

1,第六章 杂质与安全检查,2,生物药物分析,第一章 绪论 第二章 酶分析法 第三章 免疫分析法 第四章 高效液相色谱法及其应用 第五章 生物检定法 第六章 杂质与安全检查 第七章 氨基酸、多肽、蛋白质和酶类药品检查 第八章 糖类、脂类和核酸类药品检验 第九章 基因工程药物检验,3,第六章 杂质与安全检查,第一节 概 述 第二节 药物中一般杂质的检查方法 第三节 特殊杂质及其检查方法 第四节 热原检查法 第五节 毒性试验法 第六节 刺激性试验 第七节 过敏试验 第八节 降压物质检查法,4,第六章 杂质与安全检查,第一节 概 述 第二节 药物中一般杂质的检查方法 第三节 特殊杂质及其检查方法,5,主要学习目的：,1、掌握药物的纯度概念和一般杂质的概念； 2、掌握药物中杂质限量计算方法； 3、熟悉氯化物、重金属、砷盐等杂质检查的原理与注意点； 4、理解特殊杂质检查方法的选择基础与应用。,6,第一节 概述,一、药物的纯度要求 二、杂质的来源与种类 三、杂质的限量检查,7,一 药物的纯度要求,1.药物的纯度 指药物纯净的程度。 是反映药品质量的一项重要指标。,8,1. 有毒副作用的物质 2. 本身无毒副作用，但影响药物的稳定性和疗效的物质 3. 本身无毒副作用，也不影响药物的稳定性和疗效，但影响药物的科学管理的物质,2 药物的杂质,9,药物的杂质,为保证药品质量，确保用药安全、有效，必须检查杂质，控制药物纯度.,10,3 评价,综合考虑药物的外观性状、理化常数、杂质检查和含量测定。 杂质检查 是药物纯度评价的一项重要内容。,11,4 药物纯度与试剂纯度,a.药物纯度又称为药用规格 主要从用药安全、有效和对药物稳定性等方面 考虑。只有合格品和不合格品,b.化学试剂的纯度是从杂质可能引起的化学变 化对使用的影响以及试剂的使用范围和使用目的加以规定, 不考虑杂质对生物体的生理作用及毒副作用。,12,药物的纯度考虑杂质的生理作用，药品只有两个等级：合格或不合格。 化学试剂有很多等级，如基准试剂、优级纯（GR）、分析纯（AR）、化学纯（CP）、色谱纯、光谱纯。,13,例如：硫酸钡（BaSO4） 试剂规格 对可溶性钡盐不做检查。 药用规格 如存在可溶性钡盐则导致 医疗事故。 检查：酸溶性钡盐、重金属、砷盐等。,14,例. 临床所用药物的纯度与化学品及试剂纯度的主要区别是 A. 所含杂质的生理效应不同 B. 所含有效成分的量不同 C. 所含杂质的绝对量不同 D. 化学性质及化学反应速度不同 E. 所含有效成分的生理效应不同,15,杂质来源,药物生产过程引入,药物贮存期间引入,二、 杂质的来源与种类,16,1. 生产过程中引入,（1）原料、反应中间体及副产物,（2）试剂、溶剂、催化剂类,（3）生产中所用金属器皿、装置以及其他不耐酸、碱的金属工具所带来的杂质,17,在药物生产过程中引入杂质的途径为 A. 原料不纯或部分未反应完全的原料造成 B. 合成过程中产生的中间体或副产物分离不净造成 C. 需加入的各种试剂产生吸附，共沉淀生成混晶等造成 D. 所用金属器皿及装置等引入杂质,18,2. 贮藏过程中产生,水解、氧化、分解、异构化、晶形转变、聚合、潮解和发霉等,19,注射用脊髓灰质炎疫苗是一种灭活病毒； 口服脊髓灰质炎疫苗是一种减毒活病毒。 卡介苗：采用无毒牛型结核杆菌制成，安全有效。婴儿出生后按计划接种，是预防结核病的一项可靠措施。 伤寒疫苗是一种灭活的细菌。 麻疹和其它典型“儿童期”疾病（如流行性腮腺炎、水痘和风疹的疫苗）是减毒活病毒。 白喉和破伤风疫苗包含了“灭活的”毒素。 流感疫苗往往包含灭活的“裂解了的”病毒（病毒外壳的蛋白质已被溶剂溶为液体）。,常见疫苗的类型,20,一般杂质指在自然界中分布广泛,在多种药物的生产或贮存过程中容易引入的杂质. 特殊杂质指在特定药物的生产或贮存过程中,根据药物的性质、生产方法和工艺条件,有可能引入的杂质.,1、按来源可分为2类,杂质的种类,21,一般杂质：,如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、易炭化物、炽灼残渣等。一般杂质其检查方法收载在中国药典的附录中。,22,特殊杂质：,指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼、甾体激素中的其他甾体。特殊杂质检查方法收载在中国药典正文各药品的质量标准中。,23,中国药典（1995年版）中规定的一般杂质检查中不包括的项目是 A. 硫酸盐检查 B. 氯化物检查 C. 溶出度检查 D. 重金属检查 E. 砷盐检查,24,2、按毒性可分为2类,信号杂质指本身一般无害,但其含量多少可反映药物纯度水平,指示生产工艺是否合理。如：氯化物、硫酸盐等. 有害杂质对人体有毒害的杂质.在质量标准中严加控制,以保证用药安全. 如：重金属、砷盐、氰化物、氟化物等.,25,三 杂质限量检查,1 杂质限量 在不影响药物疗效、稳定性及不发生毒性的前提下,药物中所含杂质的最大允许量. 限量表示方法: 百分表示(%) 百万分表示(ppm),26,杂质量 杂质限量 杂质量,药品合格,药品不合格,27,2 杂质检查方法(限量检查法),三种检查方法,含量测定法,灵敏度法,标准对照法,28,（1）对照法 限量检查法 （Limit Test） 特点：不需知道杂质的准确含量,29,（2）灵敏度法,系指在供试品溶液中加入试剂，在一定反应条件下，不得有正反应出现。 特点：不需对照品,30,3. 比较法,（3） 含量测定法： 测定杂质的绝对含量，如测定吸收度、pH值等。 特点：准确测定杂质的量，不需对照品,31,4 3 限量计算公式 （对照法）,注意: 单位是否统一 供试品是否有稀释 表示方法%或ppm,32,例1. 对乙酰氨基酚中氯化钠的检查,对照品溶液: 标准NaCl溶液(10gCl/ml),方法：取5.0ml同法操作比较,浊度不得更大. 计算：氯化物限量是多少(% )？,33,例2. 葡萄糖中重金属的检查,规定：含重金属(不超过)百万分之五(5ppm) 计算：应取标准铅溶液(10gPb/ml)多少ml？,34,一、氯化物检查法 二、硫酸盐检查法 三、铁盐检查法 四、重金属检查法 五、砷盐检查法 六、溶液澄清度检查法 七、溶液颜色检查法 八、易炭化物检查法 九、炽灼残渣检查法 十、干燥失重测定法,第二节 一般杂质检查,35,一、 氯化物检查法（信号杂质）,原理： 利用氯化物在硝酸酸性条件下与硝酸银反应, 生成氯化银白色浑浊液, 与一定量标准氯化钠溶液在相同条件下产生的氯化银浑浊程度比较, 浊度不得更大. Cl-+Ag+ H+ AgCl,36,注意事项,1）平行试验 样品管与对照管要平行操作； 2） 加稀硝酸的目的 A、避免产生碳酸银、氧化银、磷酸银沉淀的干扰； B、且加速氯化银混浊生成产生较好乳浊 ; C、50ml供试液含稀硝酸10mL; 3）氯化物的最适检测浓度范围为 50ml供试液中含0.050.08mg的Cl 。,37,例1. 中国药典 （2000年版） 规定，检查氯化物杂质时，一般取用标准氯化钠溶液（10gCl/ml）58ml的原因是（D） A. 使检查反应完全 B. 药物中含氯化物的量均在此范围 C. 加速反应 D. 所产生的浊度梯度明显 E. 避免干扰,38,例2. 采用硝酸银试液检查氯化物时，加入硝酸使溶液酸化的目的是 A加速生成氯化银浑浊反应 B消除某些弱酸盐的干扰 C消除碳酸盐干扰 D消除磷酸盐干扰 E避免氧化银沉淀生成,（ABCDE）,二、硫酸盐检查法（信号杂质）,（一）原理 对照法,药物中微量的硫酸盐在稀盐酸酸性条件下与氯化钡反应，生成硫酸钡微粒显白色浑浊，与一定量标准硫酸钾溶液（100ugSO4/ml）在相同条件下产生硫酸钡浑浊程度比较，判定供试品硫酸盐是否符合限量规定。,40,（二）测定条件,1.反应需在盐酸酸性条件下进行盐酸可防止碳酸钡或磷酸钡等沉淀生成，影响比浊。,2. 但酸度过大可使硫酸钡溶解，50ml供试溶液中含稀盐酸2ml为宜。,3. 比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。,41,三、铁盐检查法,（一）硫氰酸盐法 （二）巯基醋酸法 （灵敏度较高，但试剂较贵）,1. 原理 对照法,（一）硫氰酸盐法 ChP（2005）,43,讨论,标准铁溶液硫酸铁铵(含硫酸) 浓度10 gFe/ml 2) 最佳比色浓度 a. 仪器分析线性范围5 90gFe/50ml b. 目视比色浓度范围1050gFe/50ml 3) 标准铁溶液中硫酸作用防止铁盐水解,44,4）盐酸酸性反应条件防止Fe3+的水解 5）加过量硫氰酸铵，使反应向正反应方向进行 6）加过硫酸铵：可氧化Fe2+为Fe3+，同时可防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。 7）检查Fe2+和Fe3+,讨论,45,四、重金属检查法,（一）重金属的概念 在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用呈色的金属. 如：Ag、Pb、Hg、Cu、Cd、Bi、As、Ni、Co、Zn等. 重金属存在影响药物的稳定性及安全性. 铅在生产中容易引入，易在体内积蓄中毒， 以Pb为代表.,46,（二）重金属盐检查方法,一、硫代乙酰胺法 适用于溶于水、稀酸、乙醇的药物，最常用方法. 二、微孔滤膜法. 适用于重金属限量低(2-5g) 药物.,以铅为代表,47,一、 硫代乙酰胺法,在实验条件下供试液澄清、无色, 对检查无干扰或经处理后对检查无干扰的药物. 1. 原理,48,讨论, 标准铅溶液浓度 硫代乙酰胺试液 溶液的pH 供试品溶液有颜色时的处理 干扰物的排除方法,49,二、 微孔滤膜法,当重金属含量低时, 在比色管中难于目视观察,采用本法。 本法适用于重金属限量低的药物(重金属限量2-5g)。,50,原理：,重金属限量低时，用纳氏比色管难以观察，用微孔滤膜滤过，重金属硫化物沉积于微孔滤膜上形成色斑，与一定量标准铅溶液同法处理后产生的色斑比较，确定重金属是否超过限量。该法可提高检查灵敏度。,51,(一) 古蔡氏法（Gutzeit）,1.原理 ：利用金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中微量砷盐反应生成具挥发性的砷化氢,遇溴化汞试纸产生黄色至棕色的砷斑,与同条件下一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较,判断砷盐的含量.,五、砷盐检查法,52,反应式如下：,53,2. 操作,1）装置： 检砷瓶： 砷化氢发生瓶A 导气管C 配套具孔塞DE,54,3. 讨论,1)试剂的作用 a.KI的作用还原剂 As5+As3+ 增大AsH3的生成速度 b.酸性SnCl2的作用 还原剂 . 将五价砷还原为三价砷(As5+As3+),55,. 碘化钾被氧化生成的I2又可被氯化亚锡还原为I-，I-与反应中生成的Zn2+能形成稳定的配位离子，有利于生成砷化氢的反应不断进行； .氯化亚锡与锌作用，在锌表面形成锌锡齐，使氢气均匀而连续地发生；,b.酸性SnCl2的作用,.可抑制微量Sb的干扰，在实验条件下，100 gSb存在不干扰。,56,c.PbAc2棉花的作用(60-80mm) 排除硫化物的干扰(1mgS2- ),57,d.HgBr2试纸的作用 HgBr2试纸较 HgCl2试纸灵敏; 但生成砷斑不够稳定 ; 保持干燥避光, 立即比较。,58,(二) 二乙基二硫代氨基甲酸银法 (Ag-DDC法) silver diethyldithiocarbamate,砷盐的限量检查 微量砷盐的含量测定.,59,金属锌与酸作用产生新生态氢，与微量砷盐反应生成具挥发性的砷化氢，还原二乙基二硫代氨基甲酸银，产生红色胶态银，同时在相同条件下使一定量标准砷溶液呈色，用目视比色法或在520nm波长处测定吸光度进行比较。,原理：,60,原理,第一步：同古蔡氏法生成砷化氢 第二步：砷化氢还原Ag-DDC的吡啶溶液,产生红色的胶态银, 与同条件下一定量标准砷溶液所呈颜色用目视比色法或在510nm波长处测定吸收度进行比较判断.,61,一、氯化物检查法 二、硫酸盐检查法 三、铁盐检查法 四、重金属检查法 五、砷盐检查法 六、溶液澄清度检查法 七、溶液颜色检查法 八、易炭化物检查法 九、炽灼残渣检查法 十、干燥失重测定法,第二节 一般杂质检查,62,六、澄清度检查法,检查药物中的微量不溶性杂质，用作注射剂的原料药一般应作此项检查。,63,浊度标准液的配制,中国药典规定用浊度标准液作为澄清度检查的标准。,浊度标准液的配制：是利用乌洛托品在偏酸性条件下水解产生甲醛，甲醛与肼缩合生成甲醛腙，不溶于水，形成白色浑浊。,64,判断 药典中规定的“澄清”，系指供试品溶液的澄清度相同于所用溶剂，或未超过0.5号浊度标准液。,溶剂：水、酸、碱、有机溶剂 有机酸的碱金属盐类药物强调用“新沸过的冷水”,65,七、溶液颜色检查法,控制药物中有色杂质限量的方法。,第一法 目视比色法,第二法 分光光度法 单一波长定量,66,八、易炭化物检查法,检查药物中遇H2SO4易炭化或易氧化而呈色的微量有机杂质称为易碳化物。,方法（1种）：H2SO4炭化后与规定标准比色液比较，不得更深。,67,九、炽灼残渣检查法,检查有机药物或挥发性无机药物中混入的无机杂质(金属氧化物或无机盐类)。 原理 样品炭化后+ H2SO4湿润700800炽灼至恒重炽灼残渣（硫酸灰分） 限量一般为0.1%0.2% 。,68,十、干燥失重测定法,干燥失重是指药物在规定条件下经干燥后所减失的重量，主要是水分，也包括其它挥发性物质。测定方法：,69,（一）常压恒温干燥法,适用于受热较稳定的药物。干燥温度一般为105。,干燥失重：供试品连续两次干燥或炽灼后称重的差异在0.3mg以下即达到恒重，干燥至恒重的第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续干燥1h后进行。,70,（二）减压干燥法,适用于熔点低，受热不稳定或水分难赶除的药物。,除另有规定外，压力应在2.67kPa（20mmHg）以下，温度60 。,（三）干燥剂干燥法,适用于受热易分解或挥发的供试品。,干燥剂：硅胶、浓硫酸、P2O5 。,71,（四）热分析法,在程序控制温度的情况下,测定物质的物理、化学变化与温度关系的一类仪器分 析方法.研究其受热过程所发生的晶型转变、熔融、升华、吸附等物理变化和脱水、热分解、氧化还原等化学变化，对物质进行物理常数（如熔点和沸点）的确定、鉴别和纯度检查的方法。 包括 1. 热重分析法 2. 差示热分析法 3. 差示扫描量热法,72,1. 热重法（TGA）,热重法是在程序控制温度下，测量物质质量与温度关系的一种技术。,记录质量变化对温度的关系曲线即热重曲线。热重曲线的纵坐标为质量(m)，横坐标为温度(T)或时间(t)。,73,m,74,本法适用于药物结晶水的测定和贵重药物或在空气中极易氧化药物的干燥失重分析。,特点：准确测量物质的质量变化及变化速度、样品用量少、速度快,75,2. 差热分析法（DTA）,差热分析法是在程序控制温度下，测量待测物质和参比物之间的温度差（T）与温度(或时间)之间的关系的一种技术。,76,差热分析曲线记录的纵坐标为样品与参比物的温度差(T)，T与热容量差(CRCs)成正比，横坐标为温度。,77,T,78,本法可鉴别药物或其多晶形，可检查药物的纯度。,79,3. 差示扫描量热法（DSC）,差示扫描量热法是在程序控制温度下，测量输给待测物质和参比物的能量差与温度(或时间)关系的一种技术。,80,81,本法可鉴别药物或其多晶形、纯度检查以及熔点和水分等的测定。,82,第三节 特殊杂质的检查方法,特殊杂质： 是指在该药物生产和储藏过程中，根据其生产方法、工艺条件及药物本身结构性质可能引入的特有杂质。,83,第三节 特殊杂质检查方法,一、利用药物和杂质在物理性质上的差异 （一）臭味及挥发性的差异 （二）颜色的差异 （三）溶解行为的差异 （四）旋光性质的差异,84,（五）对光吸收性质的差异,1.紫外分光光度法 2.原子吸收分光光度法 3.红外分光光度法 4.荧光分析法,85,1.薄层色谱法 2.纸色谱法 3.高效液相色谱法 4.气相色谱法,（六）吸附或分配性质的差异,86,二、利用药物和杂质在化学性质上的差异,（一）酸碱性的差异 （二）氧化还原性的差异 （三）杂质与一定试剂反应产生沉淀 （四）杂质与一定试剂反应产生颜色 （五）杂质与一定试剂反应产生气体 （六）药物经有机破坏后检查杂质,87,课堂小练习：,练习1 药物中氯化物杂质检查，是使该杂质在酸性溶液中与硝酸银作用生成氯化物浑浊，所用的稀酸是（ ） A. 硫酸 B. 硝酸 C. 盐酸 D. 醋酸 E. 磷酸,88,2：药物中硫酸盐检查时，所用的标准对照液是（ ） A. 标准氯化钡 B. 标准醋酸铅溶液 C. 标准硝酸银溶液 D. 标准硫酸钾溶液 E. 以上都不对,89,3. 中国药典（2005年版）规定铁盐的检查方法为（ ） A. 硫氰酸盐法 B. 巯基醋酸法 C. 普鲁士蓝法 D 邻二氮菲法 E. 水杨酸显色法,90,