抗生素开题报告

1 / 11 抗生素开题报告 连云港职业技术学院 开题报告 题 目 抗生素类药物的利弊 指 导 教 师 刘顺强 院 专 业 化学制药技术 班级制药 094 班 学 号 0902030424 姓 名 日 期 2016年 6 月 10 日 一、选题的目的、意义和研究现状 二、研究方案及预期结果 ） 研究方案： 抗生素可以是某些微生物生长繁殖过程中产生的一种物质，用于治病的抗生素除由此直接提取外；还有完全用人 工合成或部分人工合成的。通俗地讲，抗生素就是用于治疗各种细菌感染或抑制致病微生物感染的药物。 主要解决问题： 严格掌握适应证凡属可用可不用的尽量不用；而且除考虑抗生素的抗菌作用的 针对性外，还必须掌握药物的不良反应和体内过程与疗效的关系。 发热原因不明者不宜采用抗生素除病情危重且高度2 / 11 怀疑为细菌感染者外，发热原因不明者不宜用抗生素，因抗生素用后常使致病微生物不易检出，且使临床表现不典型，影响临床确诊，延误治疗。 病毒性或估计为病毒性感染的疾病不用抗生 素。抗生素对各种病毒性感染并无疗效，对麻疹、腮腺炎、伤风、流感等患者给予抗生素治疗是无害无益的。咽峡炎、上呼吸道感染者 90%以上由病毒所引起，因此除能肯定为细菌感染者外，一般不采用抗生素。 皮肤、粘膜局部尽量避免反应应用抗生素因用后易发生过敏反应且易导致耐药 菌的产生。因此，除主要供局部用的抗生素如新霉素、杆菌肽外，其它抗生素特别是青霉素 G的局部应用尽量避免。在眼粘膜及皮肤烧伤时应用抗生素要选择告辞适合的时期和合适的剂量。 严格控制预防用抗生素的范围在下列情况下可采用预防治 疗： 1风湿热病人，定期采用青霉素 G，以消灭咽部溶血链球菌，防止风湿热复发。 2风湿性或先天性心脏病进行手术前后用青霉素 G或其它适当的抗生素，以防止亚急性细菌性心内膜炎的发生。 3感染灶切除时，依治病菌的敏感性而选用适当的3 / 11 抗生素。 4战伤或复合外伤后，采用青霉素 G或四环素族以防止气性坏疽。 5结肠手术前采用卡那霉素，新霉素等作肠道准备。 6严重烧伤后，在植皮前应用青霉素 G消灭创面的溶血性链球菌感染。或按创面细菌和药敏结果采用适 当的抗生素防止败血症的发生。 7慢性支气管炎及支气扩张症患者，可在冬季预防性应用抗生素。 8颅脑术前 1天应用抗生素；可预防感染。 强调综合治疗的重要性在应用抗生素治疗感染性疾病的过程中，应充分认识到人体防御机制的重要性，不能过分依赖抗生素的功效而忽视了人体内在的因素，当人体免疫球蛋白的质量和数量不足、细胞免疫功能低下，或吞噬细胞性能与质量不足时，抗生素治疗则难以秦效。因此，在应用抗生素的同进应尽最大努力使病人全身状况得到改善；采取各种综合措施，以提高机体低抗能力，如降 低病人过高的体温；注意饮食和休息；纠正水、电解质和碱平衡失调；改善微循环；补充血容量；以及处理原发性疾病和局部病灶等 预期结果： 找到一种健康和自然的疗法，用人类自身免疫病菌的进攻，成为许多人对疾病的新共识。 4 / 11 三、研究进度 四、主要参考文献 五、指导教师意见 毕业设计开题报告 香椿叶内生细菌分离方法的初探 1 立题依据 项目研究的意义 香椿又叫香椿芽、香椿头、香椿尖，被称为“树上蔬菜”。 香椿叶厚芽嫩，绿叶红边，犹如玛瑙、翡翠，香味浓郁，营养丰富远高于其他蔬菜，为宴宾之名贵佳肴。民间食用香椿，据说从汉代起就开始了。香椿的吃法也很多，可炒食、腌制，也可作调味用，如小炒香椿芽、凉拌香椿芽、香椿芽拌冷面等等，都别有风味。此外，香椿中还富含维生素 C、优质蛋白质和磷、铁等矿物质，是蔬菜中不可多得的珍品。 它不仅营养丰富，且具有较高的药用价值。中医认为，香椿味苦性寒，有清热解毒、健胃理气、杀虫固精等功效。 目前国内外尚未见有关香椿树内生细菌及其与生理活性物 质关系的研究报道。为了能较全面客观的研究香椿树内生细菌多样性及获得更多的香椿树内生细菌资源。因此，5 / 11 本研究以香椿叶为研究材料，探讨香椿叶表面灭菌的最佳条件，以及 8种常用的细菌分离培养基对香椿叶内生细菌的分离效果。本研究结果可为选择合适的表面灭菌条件及培养基分离香椿叶内生细菌提供参考以及为进一步深入探讨研究抗香椿树病虫害的菌株质及为香椿树病虫害防治提供依据。 国内外研究现状分析 关于内生细菌的研究主要是集中在内生细菌的有益生物学作用，及内生细菌与寄主植物互作的生态学研究。植物内生细菌 由于其与寄主植物具良好的亲合能力，可系统的分布于植物细胞间隙或细胞内，有足够 的营养物质，并受到植物组织的保护，可避免外部恶劣环境的影响，相对于植物附生细菌更易发挥生防作用。因此，内生细菌的应用广泛受到人们的重视。 通过对内生菌的不断研究 , 学者们在甘蔗的根、茎、叶内发现存在有大量的新型内生固氮菌重氮营养醋杆菌，这种内生菌具有严格的寄主专一性 , 强的抗酸能力 ,能在高糖环境中生长和保持高效的固氮活性并与甘蔗建立联合固氮作用。此外，杨海莲等从水稻中分离出的内生细菌阴沟肠杆菌 MR12 不仅具 有固氮活性，而且对水稻稻瘟病和纹枯病具有较好的防治能力。 内生菌还能产生促植物生长物质，如植物生长素、赤霉素以及细胞激动素等，直接促进植物生长。张集慧等从6 / 11 兰科药用植物中分离出 5 种内生真菌，并从这些真菌发酵液和菌丝体中分别提取出 5 种植物激素，如赤霉素、阴哚乙酸、脱落酸、玉米素、玉米核苷等，它们对兰花的生长发育有较好的促进作用。郭顺星等对我国云南、四川等地采集的野生铁皮石斛和金钗石斛根中的内生真菌进行分离并测定其生物活性。测定结果表明，其中 5种真菌可促进铁皮石斛种子萌发； 3 种真菌可与铁皮石斛和金钗 石斛幼苗形成共生关系并促进幼苗的生长。 目前，通过对一些药用植物的研究发现其某些内生菌可以产生与宿主植物相同或相似的药用成分，为药物生产开辟了新途径，为人类解决某些药用植物生长缓慢、资源紧缺等因素带来的药源紧张和生态破坏问题提供了新的思路。紫杉醇是由 Wani等分离自短叶红豆杉的一种二萜类生物碱，具有独特的抑制微管解聚和稳定微管的作用 ,是目前从植物中发现的最重要的抗癌药物之一，对卵巢癌、乳腺癌、肺癌、食道癌、直肠癌等均有疗效。至今已从南方红豆杉、中国红豆杉、东北红豆衫、云南红豆杉等多种红豆杉属植物中分离到能够合成紫杉醇类化合物的内生菌。植物内生菌能产生多种抗生素，如肽、有机酸、萘等。 Strobel G 等从雷公藤的茎中分离到一株内生真菌，能产一种肽类抗生素，与棘白霉素和肺炎球菌素的化学性质相似，它不但能抑制灰葡萄孢等一些植物病原真菌，对白色念毛霉及发癣菌也具有强烈抑制7 / 11 和杀灭作用，还能抑制白假丝酵母等人类病原真菌。在植物内生菌中转入抗病抗虫 基因，将其作为外源基因载体是现在植物病虫害生物防治又一新思路。在植物中直接转入抗病虫 基因没有在植物内生菌中转入抗病虫基因简单容易，被转入抗病虫基因的内生菌在宿主中表达，抗病虫物质直接分泌在植物体内，更易被运转。 Snyman 等人将 Bt 杀虫蛋白基因 cry1Ac7 导入甘蔗内生菌构建成工程菌并使其成功表达，对甘蔗害虫 E. saccharina 表现出毒杀作用。 目前对于植物内生菌研究比较系统的有棉花、小麦和花生等。而对于香椿内生细菌的研究国内外鲜见报道。 2 研究方案 研究目标、研究内容和拟解决的问题 本实验从健康的香椿叶中分离内生细菌，旨在探讨香椿叶表面灭菌的最佳条件，以及改良察氏琼脂培养基、淀粉铵盐培养基、 TSA、 BPA、 PDA、 LB、 KMB 和 NA 8 种培养基对香椿叶内生细菌的分离效果以及优势菌株的分离。 本项目研究的内容为香椿叶最佳表面灭菌条件的 确定；不同培养基对内生细菌分离效果的比较；内生细菌的分离纯化及初步鉴定。 拟解决的关键问题是本研究利用细菌菌落表征性状和常规传统方法相结合，旨在利用多年生健康香椿叶为分离材料， 分析香椿叶内生细菌种群多样性，探讨选择合适的表8 / 11 面灭菌条件和培养基分离香椿叶内生细菌，为香椿叶内生细菌的分离培养和进一步的研究奠定基础。 拟采取的研究方法及试验方案 香椿叶最佳表面灭菌条件的确定 在河北经贸大学内采取一定量的健康香椿树的叶，称取 1g 表面清洗干净的香椿叶，然后依次用 75%乙醇浸泡3min，次氯酸钠溶液分别浸泡 2、 3、 4、 5min。再用 75%乙醇溶液浸泡 30s，无菌水冲洗 5 次，无菌滤纸吸干。取最后1 次冲洗水 200?L 涂布于 NA培养基平板上，同时用处理后的香椿叶于 NA 平板上轻压涂抹 1 次，设 3 个重复，同时以涂布 200?L 无菌水的 NA平板为 空白对照， 28恒温培养 4d，检测表面灭菌效果。 选取表面灭菌率为 100%的条件进一步研究灭菌条件对香椿叶内生细菌分离数量和种类的影响。具体方法如下：将表面灭菌处理后的香椿叶置于经过无菌处理的搅拌机中并加入 10mL 无菌水，搅拌两到三分钟。绞碎后取匀浆液经梯度稀释后涂布于 NA平板上，每个稀释度设 3个重复， 28恒温培养 4d，观察并计菌落数，并计算单位重量的香椿叶在培养基平板上的菌落形成单位。 稀释平板菌落计数法 稀释平板菌落计数法是一种最常用的菌落计数法。取一定体积的稀释菌液与合适的固体培养基在其凝固前均9 / 11 匀混合，或涂布于已经凝固的固体培养基平板上。在最适条件下培养后，从平板上出现的菌落数乘上菌液的稀释度，即可计算出原菌液的含菌数。在一个 9cm直径的培养皿平板上，一般以出现 50-500 个菌落为宜。这种方法在操作时，有较高的技术要求。其中最重要的是应使样品充分混匀，并让每支移液管只能接触一个稀释度的菌液。 计算公式： 每毫升样品中菌落形成单位 =同一稀释度 3次重 复的平均菌落数稀释倍数 5 内生细菌的分离、纯化 将已经过最佳表面灭菌条件处理的 1g香椿叶置于无菌搅拌机中，按上述方法搅拌稀释后，取最佳稀释度的匀浆液 200?L 分别涂布于上述 8 种培养基平板中，每个稀释度 3个重复， 28培养 2d，计数。同时，根据菌落形态不同计数不同培养基所分离到的细菌种类数，并挑取优势菌株，纯化并保存。 在香椿叶中分离出的菌株中，根据菌落形态，分别挑取不同类型细菌，接种于上述 8 种琼脂培养基的平板上，置于 28条件培养 3d，经分离纯化后获得香椿叶的内生 细菌，计算每个培养皿的菌落数，并且将内生细菌置于冰箱中保存以备进一步研究使用。 内生菌的初步鉴定 10 / 11 根据菌落的形状、大小、边缘特征、干湿、颜色、质地、表面光滑与否和透明度 8个指标对菌落形态进行初步归类，采用直接挑取制片法 观测所得的菌落在培养过程中的形态特征，对不同形态特征的菌落进行初步的统计鉴定。并分析 8 种不同培养基上优势菌株的情况。 本课题的创新之处 传统分离培养方法已经初步证实香椿叶内含有丰富的微生物，本研究采用细菌菌落表征性状鉴定的方