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目录 i l l ll ll lr f rf lll lfl l u i 18 9 312 4 一、摘要 中文摘要1 英文摘要3 二、英文缩略语6 三、论文 前言7刖舌”“”7 材料方法7 结果一1 1 讨论1 9 结论2 1 四、本研究的创新性自我评价2 2 五、参考文献2 3 六、附录 综j i 苤2 6 在学期间科研成3 3 致谢”3 4 个人简介3 5 中文论著摘要 胃癌中c y r 6 1 、c o x - 2 的表达及其i 临床病理意义 胃癌是一种全球高发的恶性肿瘤之一,恶性肿瘤中其致死率排在第二位,虽 然统计学显示早期诊断和干预能明显提高胃癌的预后,但在晚期胃癌病例中,5 年生存率只有1 6 6 ,因此,早期发现和预防对于胃癌显得非常重要。关于胃癌 发病的分子机制尚未明确,但普遍认为其机制是一个包括基因和环境因素相互作 用的复杂的多因素过程, c y r 6 1 是c c n 家族成员之一,是一种细胞外基质相关肝素结合蛋白,研究显 示它能促进细胞的黏附、刺激趋化、增强生长因子介导的d n a 合成、抗凋亡、促 进血管生成,c y r 6 1 在晚期乳腺癌、胰腺癌、神经胶质瘤中高表达。有趣的是,它 在前列腺癌、子宫肌瘤、横纹肌肉瘤和非小细胞肺癌中低表达。 研究显示c o x 2 在包括胃癌在内的多种胃肠恶性肿瘤中高表达,提示c o x 2 在 胃肠肿瘤的形成中发挥了重要的作用。c o x 2 参与了多种细胞重要功能,包括细胞 增殖、凋亡和血管形成,大量流行病学研究提示长期使用非甾体消炎药能降低多 种胃肠道恶性肿瘤的发生率。 但关于c y r 6 1 与胃癌及c y r 6 1 和c o x 2 在胃癌中表达的关系的研究鲜见。 我们的研究发现c y r 6 1 和c o x - 2 在胃癌标本中高表达,高表达c y r 6 1 、c o x 2 的 胃癌,其侵袭能力明显增强,而且显示c y r 6 1 和c o x 2 在胃癌中的表达正相关。 目的 检测胃癌组织及非瘤胃粘膜组织中富含半胱氨酸6 1 m r n a ( c y r 6 1m r n a ) 及 富含半胱氨酸6 1 蛋白和环氧合酶2m r n a ( c o x 2 m r n a ) 及环氧合酶2 蛋白的 表达水平,以及二者与胃癌病理指标之间的关系。 材料 所有的胃癌标本均来自中国医科大学盛京医院及抚顺矿务局总医院,实验所用 试剂均为实验室常用试剂。 1 白的高表达率分别为3 4 6 2 ( 9 2 6 ) 、3 4 6 2 ( 9 2 6 ) ,均有统计学差异, p = o 0 0 1 ,p = o 0 0 0 ;远距离转移组中c y r 6 1 蛋白及c o x - 2 蛋白高表达率分别为7 8 2 6 ( 1 8 2 3 ) ,8 2 6 0 ( 1 9 2 3 ) ,无远距离转移组中c y r 6 1 蛋白及c o x 2 蛋白高表达 率分别为5 4 2 4 ( 3 2 俗9 ) ,5 4 2 4 ( 3 2 5 9 ) ,均有统计学差异,p = o 0 4 5 ,p = o 0 1 7 ; 获得完整随访资料5 5 例,c y r 6 1 蛋白及c o x 2 蛋白高表达组5 年生存率均显著低 于低表达组5 年生存率( p o 0 0 1 ) ;c y r 6 1 蛋白与c o x 2 蛋白在胃癌组织中的表 达水平呈正相关关系( 贮= 6 5 6 ,p o 0 1 ) 。 结论 1 、c y r 6 1 、c o x 2 在胃癌组织中呈高表达。 2 、胃癌组织中c y r 6 1 、c o x 2 蛋白的表达水平与淋巴结转移、远距离转移、5 年生存率相关。 3 、c y r 6 1 、c o x 2 蛋白在胃癌中的表达呈正相关。 关键词 胃癌;c y r 6 1 :c o x - 2 ; 2 英文论著摘要 e x p r e s s i o no fc y r 6 1 、c o x 2a n d i t s c l i n i c a l s i g n i f i c a n c ei ng a s t r i cc a r c i n o m a o b j e c t i v e g a s t r i cc a n c e ri so n eo ft h em o s tc o m m o nc a n c e ra n dt h es e c o n dl e a d i n gc a u s eo f c a n c e rd e a t h sw o r l d w i d e a l t h o u g he a r l yd i a g n o s i sa n dt r e a t m e n to fg a s t r i cc a n c e r s t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t l yi m p r o v e sp r o g n o s i s ,t h e5 y e a rs u r v i v a lr a t ei so n l y1 6 6 i n i n d i v i d u a l sw i t ha d v a n c e dd i s e a s e t h e r e f o r e ,t h ep r i m a r y p r e v e n t i o na n de a r l y d i a g n o s i sa n dt r e a t m e n to fg a s t r i cc a n c e ri so fp a r t i c u l a ri m p o r t a n c e t h ep r e c i s e m o l e c u l a rm e c h a n i s mo fg a s t r i cc a n c e rr e m a i n su n c l e a r i ti sc o n s i d e r e dt ob ea c o m p l e xm u l t i s t a g ep r o c e s si n v o l v i n gg e n e e v i r o n m e n ti n t e r a c t i o n s c y r 6 1 ,am e m b e ro ft h ec c np r o t e i nf a m i l y ,i sa ne x t r a c e l l u l a rm a t r i x - a s s o c i a t e d h e p a r i n b i n d i n gp r o t e i nt h a th a sb e e nr e p o r t e dt om e d i a t ec e l la d h e s i o n ,s t i m u l a t e c h e m o s t a s i s ,a u g m e n tg r o w t hf a c t o r - i n d u c e dd n as y n t h e s i s ,f o s t e rc e l ls u r v i v a l ,a n d e n h a n c ea n g i o g e n e s i s e l e v a t e dc y r 6 1e x p r e s s i o ni sa s s o c i a t e dw i t ha d v a n c e db r e a s t a d e n o c a r c i n o m a p a t h o g e n e s i s ,p a n c r e a t i cc a n c e r , a n d g l i o m a s i n t e r e s t i n g l y , d o w n r e g u l a t e dc y r 6 1e x p r e s s i o ni sa l s on o t e di np r o s t a t ec a n c e r ,u t e r i n el e i o m y o m a , r h a b d o m y o s a r c o m a ,a n dn o n - s m a l lc e l ll u n gc a r c i n o m a s e v e r a ls t u d i e sh a v es h o w nt h a tt h e c y c l o o x y g e n a s e2 ( c o x 2 ) g e n e i s o v e r e x p r e s s e di n s e v e r a l g a s t r o i n t e s t i n a lm a l i g n a n c i e s ,i n c l u d i n gg a s t r i cc a n c e r , s u g g e s t i n gap o s s i b l er o l e o fc o x - 2i ng a s t r o i n t e s t i n a l c a r c i n o g e n e s i s c o x - 2 p a r t i c i p a t e si ns e v e r a lk e yc e l l u l a ra c t i v i t i e s ,s u c ha sc e l lp r o l i f e r a t i o n ,a p o p t o s i s ,a n d a n g l o g e n e s i i nm a n ye p i d e m i o l o g l cs t u d i e s ,l o n g t e r mu s eo fn s a i d sh a sb e e n a s s o c i a t e dw i t had e c r e a s e di n c i d e n c eo fs e v e r a lt y p e so fg a s t r o i n t e s t i n a lm a l i g n a n c i e s f e w e rs t u d i e sh a v ee x a m i n e dt h ea s s o c i a t i o nb e t w e e nc y r 6 1a n dg a s t r i cc a n c e r , a n df e w e rs t u d i e sh a v es h o w nt h er e l a t i o n s h i pb e t w e e nt h ee x p r e s s i o no fc y r 6 1a n d c o x - 2i ng a s t r i cc a n c e r i nt h i ss t u d y ,w ef o u n dt h a t c y r 6 1a n dc o x 一2w a sh i g h l ye x p r e s s e di nm o r e 3 g a s t r i ca d e n o c a r c i n o m as p e c i m e n sa n do v e r e x p r e s s e dc y r 6 1a n dc o x - 2i nh u m a n g a s t r i c c a n c e rs i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e dt h e i ri n v a s i o na b i l i t i e s w ea l s os h o w nt h e p o s i t i v er e l a t i o n s h i pb e t w e e nt h ee x p r e s s i o no fc y r 6 1a n dc o x - 2i ng a s t r i cc a n c e r 一 o b j e c t i v e t oi n v e s t i g a t et h el e v e lo fc y s t e i n e r i c h6 1 ( c y r 6 1 ) a n dc y c l o o x y g e n a s e 2 ( c o x 2 ) e x p r e s s i o ni nh u m a ng a s t r i ca d e n o c a r c i n o m aa n dn o n - t u m o rg a s t r i cm u c o s at i s s u e s , a n dt h er e l a t i o n s h i pb e t w e e nt h ee x p r e s s i o no fc y r 6 1、c o x - 2a n dt h ec l i n i c a l p a t h o l o g i cc h a r a c t e r i s t i c si np a t i e n tw i t hg a s t r i cc a n c e r m e t h o d s w ed e t e c t e dt h ee x p r e s s i o nl e v e lo fc y r 6 1a n dc o x 一2i n8 2h u m a ng a s t r i c a d e n o c a r c i n o m aa n d1 7n o n t u m o rg a s t r i cm u c o s at i s s u e sb yi m m u n o h i s t o c h e m i c a l s t a i n i n g r e s u l t s 1 t h ee x p r e s s i o nl e v e lo fc y r 6 1 m r n aa n dc o x 一2 m r n ai n g a s t r i c c a n c e r s a m p l e sa r eh i g ht h a nt h ee x p r e s s i o nl e v e lo fc y r 6 1 m r n aa n dc o x - 2 m r n ai n n o n - r u m o rm u c o s a 2 i nt h e8 2 g a s t r i cc a n c e r , t h ei n c i d e n c eo fh i g hc y r 6 1e x p r e s s i o nw a s 6 0 9 8 ( 5 0 8 2 ) ,i nc o n t r a s t ,t h ei n c i d e n c ei n1 7n o n - t u m o rg a s t r i cm u c o s at i s s u e sw a s 1 1 7 6 ( 2 1 7 ) ,p = 0 0 0 0 ;t h er a t e o fh i g hc o x 一2e x p r e s s i o nw a s6 2 2 0 ( 5 1 8 2 ) i n g a s t r i cc a n c e r ,i nc o n t r a s t ,1 7 6 5 ( 3 1 7 ) i nn o n - t u m o rg a s t r i cm u c o s at i s s u e s p = 0 0 0 1 i ng a s t r i cc a n c e rw i t hl y m p hn o d em e t a s t a s i s ,t h ei n c i d e n c eo fh i 【g hc y r 6 1 a n dc o x 一2e x p r e s s i o nw a s 7 3 2 1 ( 4 1 5 6 ) 、7 5 0 0 ( 4 2 5 6 ) r e s p e c t i v e l y ,i nc o n t r a s t ,i n g a s t r i c c a n c e rw i t h o u tl y m p hn o d em e t a s t a s i st h ei n c i d e n c ew a s3 4 6 2 ( 9 2 6 ) 、 3 4 6 2 ( 9 2 6 ) r e s p e c t i v e l y ,p = 0 0 0 1 ,p = 0 0 0 0 i ng a s t r i cc a n c e rw i t hd i s t a n c em e t a s t a s i s t h ei n c i d e n c eo fh i i g hc y r 6 1a n dc o x 一2e x p r e s s i o nw a s7 8 2 6 ( 1 8 2 3 ) 、8 2 6 0 ( 1 9 2 3 ) r e s p e c t i v e l y ,a n d i n g a s t r i c c a n c e rw i t h o u td i s t a n c em e t a s t a s i s ,t h er a t ew a s 5 4 2 4 ( 3 2 5 9 ) 、3 2 ( 3 2 5 9 ) ,p = 0 0 4 5 、p o 0 1 7 w eg o t5 5c o m p l e t ed a t a ,t h ed a t a s h o w nt h a ti np a t i e n t sw i t hh i g hc y r 6 1 、c o x - 2 e x p r e s s i o n ,5 - y e a rs u r v i v a lr a t e sw e r e b o t hs i g n i f i c a n t l yl o w e rt h a ni np a t i e n t sw i t hl o w e rc y r 6 1 、c o x - 2e x p r e s s i o n ( p 0 0 0 1 ) ;t h er e l a t i o n s h i po fc y r 6 1p r o t e i na n dc o x - 2p r o t e i ne x p r e s s i o nl e v e l i n 4 g a s t r i cc a n c e ra r ep o s i t i v e l y ( ) c2 = 6 5 6 ,p o 0 1 ) t h e 5 。y e a ro v e r a l ls u r v i v a lr a t ew a s1 1 4 0 ,9 4 0 r e s p e c t i v e l y ,a n di nl o wc y r 6 1 、 c o x 2e x p r e s s i o np a t i e n t s ,t h er a t ew a s7 5 0 0 ,6 9 6 ,p = 0 0 0 0 ,p - - 0 0 0 0 t h e e x p r e s s i o no fc y r 6 1w a sp o s i t i v ec o r r e l a t i o nw i t ht h ee x p r e s s i o no fc o x - 2i ng a s t r i c c a l l c e r , r = o 3 0 4 ,p = o 0 0 5 c o n c l u s i o n s i ng a s t r i cc a n c e r ,t h ee x p r e s s i o no fc y r 6 1a n dc o x - 2w a s h i g hc o m p a r et o n o n - t u m o rg a s t r i cm u c o s at i s s u e s ,a n di np a t i e n t sw i t hg a s t r i cc a n c e rt h ee x p r e s s i o n l e v e lo fc y r 6 1a n dc o x 一2w a sc o r r e l a t i o nw i t hl y m p hn o d em e t a s t a s i s 、d i s t a n c e m e t a s t a s i s 、5 - y e a ro v e r a l ls u r v i v a lr a t e c y r 6 1m a yb eap r o g n o s i sm a r k e rf o rg a s t r i c c a l l c e r g a s t r i cc a n c e r ,c y r 6 1 ,c o x - 2 k e yw o r d s 5 英文缩略语 6 论文 胃癌中c y r 6 1 、c o x - 2 的表达及其临床病理意义 刖看 胃癌是一种最常见的恶性肿瘤之一,在各种恶性肿瘤中其死亡率仅次于肺 癌,排在第二1 1 ,期胃癌平均5 年生存率仅为1 6 6 左右,而i 期胃癌5 年平 均生存率在8 7 以上心1 ,故早期发现和诊断胃癌是提高胃癌5 年生存率的重要措 施。c y r 6 1 蛋白是结缔组织生长因子家族( c c n ) 成员之一,其在细胞增殖、粘 附、迁移、血管形成及细胞凋亡过程中发挥了重要的作用3 “5 “1 ,近年的研究 发现c y r 6 1 与乳腺癌、胰腺癌、神经胶质瘤高度相关订8 9 1 ,但其与胃癌的相关 研究不多,我们用r t - p c r 和免疫组织化学的方法检测胃癌组织及非瘤胃粘膜组 织中c y r 6 1 及c o x 2 的表达水平,试图揭示其表达水平与胃癌病理指标、胃癌预后 之间的关系,以及胃癌细胞中c y r 6 1 与c o x 2 的关系。 材料和方法 1 、材料 1 1 实验对象r t - p c r l 9 例胃癌标本及1 6 例非瘤胃粘膜标本均来自抚顺矿 务局总医院,非瘤胃粘膜取自距离胃癌病变5 厘米以上的胃粘膜组织,所有标本 离体后立即切成1 0 厘米大小组织块放入标记好的e p 管中,浇入液氮,盖好e p 管盖,放入布袋投入液氮中,后转盛京医院中心实验室深度冰箱保存备用。免疫 组织化学胃癌标本来自中国医科大学附属盛京医院2 0 0 3 年2 0 0 5 年间的8 2 例手 术切除的胃癌原发灶标本,1 7 例对照组非瘤胃黏膜组织来自中国医科大学附属盛 京医院内镜中心。所有标本均由两位病理科专家确诊,其中高分化1 7 例,中分化 2 2 例,低分化4 3 例;t 1 期4 例,t 2 期2 4 例,t 3 期2 5 例,t 4 期2 9 例;t n m 分期i 期1 9 例,i i 期1 3 例,i i i 期2 5 例,期2 5 例;其中男5 8 例,女2 4 例; 年龄2 5 7 9 岁,平均年龄5 5 6 1 + _ 1 2 2 6 岁;淋巴结转移5 6 例,无淋巴结转移2 6 例; 远处转移2 3 例,无远处转移5 9 例;生存时间随访从手术日期开始,截至日期为 2 0 1 0 年6 月,随访方式为电话随访,终末事件为胃癌的复发、转移而引起的死亡, 7 其中5 5 例得到完整随访资料。 1 2 主要试剂 t r i z o l 试剂购自i n t r v i o g e n 公司 逆转录试剂盒、r t - p c r 试剂盒购自t a k a r a 公司 d l 2 0 0 0 m a r k e r 、d i 一5 0 0 m a r k e r 购自t a k a r a 公司 引物序列由i n v i t r o g e n 公司合成,引物序列: c y r 6 1 引物序列: 匕游引物5 c g a g g t g g a g t r g a c g a g a a a c 3 下游引物5 a g g a c t g g a t q 姐q 盯g a c g t t c l 3 扩增片段 4 9 4 b p c o x 2 引物序列: 上游弓i 物5 t t c aaa t g a g a t t g t g g g aaaa t 3 下游引物5 - a g a t c a t g c c t g a g t a t a r r 3 扩增片段3 0 5 b p b a c t i v e 引物序列: 上游引物5 g a t g a t g a t a t c g c c g c g c t 3 下游引物5 - t g g g t c a 唧c t c g c g g t t - 3 扩增片段3 6 9 b p 兔抗人c y r 6 1 多克隆抗体购自美国a b e a m 公司 兔抗人c o x 2 单克隆抗体购自博奥森公司 二抗试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司公司。 1 3 主要实验设备: 包埋机( l e i c a ,e g l l 6 0 ) 脱水机( l e i c a ,a s p 3 0 0 s ) 恒温培养箱( d n p 9 2 7 2 ) 切片机( l e i c ar m 2 2 4 5 ) 展片机( l s 8 0 ) 显微镜( o l y m p u s ,b x 4 1 ) 8 2 1 半定量r t - p c r :从组织中提取r n a 和半定量r t - p c r :按照i n v i t r o g e n 公司t r i z o l 试剂盒说明提取1 9 例胃癌及1 6 例非瘤胃粘膜组织中t o t a l r n a ,紫外 分光光度计定量后冻存于8 0 。c 备用。 2 1 1 c d n a 的合成 用反转录试剂盒将总r n a 反转录成c d n a 第一链。反应总体积为1 0u l ,反 应体系如下: o l i g od t r a n d o m6 d m r a s ef r e e 无菌水 总r n a 0 5 u l 0 5 u l l u l 4 u l 4 0 l p c r 仪上,6 5 。c5 分钟后冰上急冷。 r t b u f f e r 4 u l r n a s ei n h i b i t o r 0 5 u l r a s efree无菌水45ul p r i m e s c r i p tr t a s e l u l 反应条件为3 0 0 c1 0 m i n ,4 2 0 c4 5 m i n ,9 5 0 c5 m i n 2 1 2p c r 扩增如下: 无菌水 9 8 u l m i 】【 e d n a c y r 6 1 引物 8 u l 2 u l 2 u l 反应体系2 0 u l ,p c r 条件为9 5 。c4 m i n ,9 5 0 c4 5 s ,6 5 。c4 5 s ,7 2 。cl m i n , 7 2 0 c7 m i n 。反应为3 0 个循环 无菌水8ul m i x8 u l c d n a 2 u b a c t i n 引物 2 u l 反应体系2 0 u l ,p c r 条件为9 5 0 c4 m i n ,9 5 0 c4 5 s ,6 5 0 c4 5 s ,7 2 0 cl m i n , 7 2 0 c7 m i n 。反应为3 0 个循环。 c o x 2 的p c r 扩增基本同上,取4 u l 逆转录产物用于c o x 2 的p c r 扩增,引物4 u l , 反应体系2 0 u l ,p c r 条件为9 5 0 c4 m i n ,9 5 0 c4 5 s ,5 8 。c4 5 s ,7 2 0 cl m i n ,7 2 。c7 m i n 。 反应为3 0 个循环。 2 1 3 半定量分析: 取7 u l r t p c r 扩增产物,2 琼脂糖凝胶电泳,于凝胶成像系统g d s 8 0 0 上 自动成像,存图后应用c h e m ii m a g e r 5 5 0 0 v 2 0 3 软件进行半定量分析。 2 2 免疫组织化学染色( s - p 法) : 2 2 1 免疫组织化学染色步骤:免疫组织化学染色程序按试剂盒说明书进行, 胃癌蜡块切片,烤片,二甲苯水化,3 的双氧水1 0 分钟阻断内源性过氧化物酶 活性,高温高压( e d t a ) 抗原修复,血清封闭,滴加一抗,抗c y r 6 1 浓度为1 : 2 0 0 ,抗c o x 2 浓度为1 :1 0 0 ,4 c 过夜,滴加二抗,s p 复合物,d a b 显色,苏木 素复染,脱水,封片。 2 2 2 染色判断标准:c y r 6 1 和c o x 2 均以胞质呈现棕黄色颗粒为阳性。根据 染色阳性细胞占计数细胞总数的百分比分为:= 5 为阴性,6 2 5 为弱阳性, 2 6 5 0 为阳性,= 5 1 为强阳性,强阳性和阳性为高表达,弱阳性和阴性为低表 达。 2 3 统计处理:用s p s s l 7 0 软件包,包括非参数检验,妒检验,s p e a r m a n 等 级相关分析及k a p l a n m e i e r 生存曲线分析,l o g r a n k 检验。 1 0 结果 l 、半定量r t p c r : 1 1 、1 9 例胃癌组织c y r 6 1 m r n a 灰度与内参的灰度比值与1 6 例非瘤胃粘膜 c y r 61m r n a 灰度与内参的灰度比值经非参数检验,差异有统计学意义。 1 2 、1 9 例胃癌组织c o x 2 m r n a 灰度与内参的灰度比值与1 6 例非瘤胃粘膜 c o x - 2 m r n a 灰度与内参的灰度比值经非参数检验,差异有统计学意义。见图l 、2 , 表1 4 。 m12m34m 3 6 9b p5 0 0b p m :d l 5 0 0 m a r k e r , 1 、2 内参;3 非瘤胃粘膜c y r 6 1m r n a 的表达,3 :胃癌中c y r 6 1 m r n a 的表达。 图1 ,r t - p c r 检测胃癌及非瘤胃粘膜中c y r 6 1m r n a 的表达 f i g u r e l t h ee x p r e s s i o no fc y r 6 1m r n ai ng a s t r i cc a n c e ra n dn o n - t u m o rm u c o s a b yr t - p c r 、 3 6 9b a 2m34 3 0 5b n m :d l 2 0 0 0 m a r k e r , 1 、2 内参;3 非瘤胃粘膜c o x - 2m r n a 的表达,3 :胃癌中c o x 2 m 烈a 的表达。 图2 ,r t - p c r 检测胃癌及非瘤胃粘膜中c y r 6 1m r n a 及c o x - 2m r n a 的表达 f i g u r e 2 t h ee x p r e s s i o no fc y r 6 1m r n ai ng a s t r i cc , a n c , c ra n dn o n t u m o rm u c o s ab y r t p c r 表1 ,0 0 x 2 m r n a 半定量r t p c r 分析结果( c o x 2 a c t i n ) t a b 1c o x 一2 m r n ah e m i - q u a u t a t i v ea n a l y s i sr e s u l to fr t - p c r ( c o x - 2 a c t i n ) 1 2 表2 ,c y r 6 1 m r n a 半定量r t - p c r 分析结果( c y r 6 1 a c t i n ) t a b 2 c y r 6 1 m r n a h e m i - q u a u t a t i v ea n a l y s i sr e s u l to fr t p c r 表3 ,c y r 6 1 m r n a 的非参数检验 t a b 3 n o n p a r a m e t e ro fc y r 6 1 m r n a z = - 4 2 7 ,p = u u u u 2 、免疫组化染色结果 2 1 、c y r 6 1 染色结果:8 2 例胃癌组织c y r 6 1 免疫组织化学染色,3 例强阳性, 4 7 例阳性,2 5 例弱阳性,7 例阴性;1 7 例非瘤胃黏膜强阳性o 例,阳性2 例, 弱阳性1 0 例,阴性5 例,胃癌组高表达率为6 0 9 8 ( 5 0 8 2 ) ,非瘤胃黏膜组高 表达率为1 1 7 6 ( 2 1 7 ) ,阳性颗粒主要位于肿瘤细胞胞浆中,见图3 , c y r 6 1 蛋白在胃癌细胞中的表达与其在非瘤胃粘膜细胞中的表达间有统计学差异, 9 2 = 1 3 6 7 ,p = 0 0 0 0 ,见表5 。 2 2 、c o x 2 染色结果:8 2 例胃癌组织c o x 2 免疫组织化学染色,3 例强阳性, 4 8 阳性,2 6 例弱阳性,5 例阴性,1 7 例非瘤胃黏膜强阳性0 例,阳性3 例,弱 阳性9 例,阴性5 例,胃癌组中c o x 2 高表达率6 2 2 0 ( 5 1 8 2 ) ,非瘤胃黏膜组 1 3 c o x 2 高表达率为1 7 6 5 ( 3 1 7 ) ,阳性颗粒主要位于肿瘤细胞胞浆中,见图4 , c o x 2 蛋自在胃癌细胞中的表达与其在非瘤胃粘膜细胞中的表达间有统计学差异, z 2 - 1 1 2 7 1 ,p = 0 0 0 1 ,见表5 。 表5 ,胃癌组织与非瘤胃粘膜c y r 6 1 、c o x 一2 蛋白表达水平的比较 t a b 1t h ee x p r e s s i o no fc y r 6 1a n dc o x - 2i ng a s t r i cc a r c i n o m aa n dn o n t u m o r t i s s u e s 3 、c y r 6 1 、c o x 2 蛋白与胃癌病理指标之间的关系:见表6 ,胃癌组织中淋巴 结转移组c y r 6 1 蛋白高表达率为7 3 2 1 ( 4 1 5 6 ) ,无淋巴结转移组c y r 6 1 蛋白的 高表达率为3 4 6 2 ( 9 2 6 ) ,有统计学差异,p = 0 0 0 1 ;远距离转移组中c y r 6 1 蛋 白高表达率为7 8 2 6 ( 1 8 2 3 ) ,无远距离转移组中c y r 6 1 蛋白高表达率为 5 4 2 4 ( 3 2 5 9 ) ,有统计学差异,p = 0 0 4 5 ;肿瘤浸润深度各期中c y r 6 1 高表达的分别 为:t l l 例4 ( 2 5 ) 、t 2 1 0 例2 4 ( 4 1 7 ) 、t 3 1 7 例2 5 ( 6 8 ) 、t 4 2 2 例2 9 ( 7 5 9 ) , 有统计学差异,p = 0 0 2 7 ;t n m 分期中各期c y r 6 1 高表达的分别为:i 期6 例1 9 ( 3 1 6 ) 、i i 期7 例1 3 ( 5 3 8 ) 、期1 7 例2 5 ( 6 8 ) 、i v 期2 0 例2 5 ( 8 0 ) ; 有统计学差异,p = 0 0 0 9 ;组织学分级组中c y r 6 1 蛋白高表达分别为:高分化6 例 1 7 ( 3 5 2 9 ) 、中分化1 3 例2 2 ( 5 9 0 9 ) 、低分化3 1 例4 3 ( 7 2 0 9 ) 有统计 学差异,p = 0 0 3 1 ;经s p e a r m a n 等级相关分析,c y r 6 1 蛋白表达与肿瘤浸润深度、 淋巴结转移、远处转移、组织学分级、t n m 分期相关,r 值分别为0 3 1 7 、0 3 6 8 、 0 2 1 1 、- 0 2 7 9 、0 3 6 4 ,p 值分别为0 0 0 4 、0 0 0 1 、0 0 4 6 、0 0 1 1 、0 0 0 1 ,c y r 6 1 蛋 白表达与肿瘤大小、性别无关;c o x 2 蛋白表达与肿瘤大小、肿瘤浸润深度、淋巴 结转移、远处转移、组织学分级、t n m 分期相关,各组c o x 2 蛋白表达差异有统 计学意义,r 值分别为0 3 2 8 、0 4 3 1 、0 3 8 8 、0 2 6 3 、0 3 1 9 、0 4 6 5 ,p 值分别为0 0 0 3 、 o 0 0 0 、0 0 0 0 、0 0 1 7 、0 0 0 4 、0 0 0 0 ,c o x 2 蛋白表达与性别无关。 1 4 表6 ,8 2 例胃癌 t a b 2r e l a t i o n s h i f e a t u r e s 病理指标 移 级 习 小 度 转 移 分 糊 大瞳m 深 结 转 学化化化 嘣 制恤缸测 瞰 贼 绷舯舯舯别 州 局存亡 肿4 浸n 疋b n淋有无远有无组高中低性男女仆,结生死 4 、c y r 6 1 蛋白高表达组中位生存时间为1 5 个月,5 年生存率为1 1 4 0 ;c y r 6 1 蛋白低表达组5 年生存率为7 5 o o ,所以到随访结束时未观察到中位生存时间; c o x 2 蛋白高表达组平均生存时间为1 5 个月,5 年生存率为9 4 0 ,c o x 2 蛋白低 表达组5 年生存率为6 9 6 0 ,所以到随访结束时未观察到中位生存时间。l o g l a n k 检验两组间差异均有统计学意义,见图5 、图6 。 生存函数 c y r 6 1 袭这 一倾农选 一离拒选 + 低丧选醐失 + 礴托逸翻爽 图5 ,c y r 6 1 蛋白表达与生存率的关系( k a p l a n m e i e r 曲线,l o g r a l l k 检验, z 2 = 2 0 4 9 ,p o 0 0 0 ) f i g u r e 5 t h er e l a t i o n s h i p o f c y r 6 1p r o t e i ne x p r e s s i o na n ds u r v i v a l ( k a p l a n - m e i e r c a l v e ,l o g r a n kt e s t ,矛= 2 0 4 9 ,p o 0 0 0 ) 1 6 生存甬数 生存时阔 c o 愆农达 j - 低发达 _ 商寝选 + 低柱选剩失 卜蕊嵌丛捌失 图6 ,c o x 2 蛋白表达与生存率的关系( k a p l a n m e i e r 曲线,l o g - r a n k 检验, 9 2 = 1 9 9 5 ,p o 0 0 0 ) f i g u r e 6 t h er e l a t i o n s h i p o fc o x - 2p r o t e i ne x p r e s s i o na n ds u r v i v a l ( k a p l a n - m e i e r c u r v e ,l o g r a n kt e s t ,# = 2 0 4 9 ,p o 0 0 0 ) 5 、胃癌组织中c y r 6 1 蛋白和c o x - 2 蛋白的关系:8 2 例胃癌组织中c y r 6 1 、c o x - 2 均高表达3 7 例,均呈低表达1 8 例,c y r 6 1 高表达而c o x 一2 低表达的1 3 例,c y r 6 1 低表达而c o x 2 高表达的1 4 例,具有一致性( 9 2 = 6 5 6 ,p 0 0 5 ) ,一致率为7 7 3 1 【( 3 7 + 1 8 ) 1 1 9 1 ,见表7 。 1 7 表7 ,c y r 6 1 与c o x 2 相关性 t a b 4t h er e l a t i o n s h i po f c y r 61a n dc o x - 2 低 6 5 6 0 0 5 a :非瘤胃粘膜阴性表达,b :高分化阳性表达,c :中分化阳性表达表达 d :低分化强阳性表达 图3 ,c y r 6 1 蛋白的表达( 4 0 0 ) 。 f i g u r e 3 t h ee x p r e s s i o no f c y r 6 1p r o e i n ( x 4 0 0 ) 1 8 图4 ,c o x - 2 蛋白的表达( x 4 0 0 ) ;a :非瘤胃粘膜阴性表达,b :高分化弱阳性

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