（动物遗传育种与繁殖专业论文）猪POU1F1基因多态性和mRNA表达相关性的研究.pdf

捅要 垂体特异性转录因子1 ( 朋门) 是调控垂体饼 眦、疆限b 亚基转漩的重要反式因子， 对动物正常的生长发育具有璧要的生理意义。尸d c ，刚的突变可能造成人獭的综合性垂体激素 缺乏瘫，s 起早期组织器官发蠢不全，产生侏儒体态簿临床病症。而册理州对猪的生长性状 同样其舂蓬要影嚷，被携秀与生长朝关瓣嫉透基弱之一。 本蜜验以大自猪( 英系) 、中毫黑猪、蓊包猪、辫猪为实验麓料，对强以基嚣魏蕊a 多态性进行p c r s s c p 和p c r 嫩f l p 检测分析，同时提取实验动物垂体的总r n a 。通过实时定 量荧光p c r 对p o 叫f j 、6 槲、p r l 、疆醇8 的m r n a 表达水平进行定量分析，寻找多态位点和 基因袭然量间可能存在的相关。 本实验熬确定了在第一内禽子( 1 5 1 5 印处) 、第暇井屡子( 2 7 3 b p 处) 鞭第四内含子到第六 ， 显予上瓣4 个多态位点，磐绻食生产数据分辑了主滚经赢弱辩浮与生长鼹状关系。疆窕发褒 不同猪稀船硎彤第西， 最予( 2 7 3 如处) 豹p c r 媾s c p 各基因型分布存谯较大差募，大自猪 和中脊然猪群体中以从基因测为主，有少量a b 基阑型个体；而香猪群体中以b b 基因型为主， 无纯含a a 基因型；荷包猪群体中三种基因型均有分布。该位点从基因趔和大白猪的背膘厚 ( p o 1 ) 。 鼻d 材乒y 的第一内含子1 5 1 5 砸楚存在t c 的突交，该突变帮屠宰髓e 避重耱关系数为 r = 园6 ( 挚嫩潞) ，菸置该经纛貔耱换巍屠宰藜6 辩豹表达整存在显著撩美( r 哟4 8 3 ，p o 。辑) 。 由戴攘论t c 豹替换将导致g 珂的m r n a 表达量辩糟，蝗在生长性状土袭现为屠宰前日增重 降低。 对备个基因表达量间的相必分析表明p 0 【盯剐翘g 日、艘l 、强阻b 的表达量呈显著正相 关( p o 0 5 ) 。 对猿粕誓f y 侯选基医功能及生长经状上的作燧的磅究，褥戮以下缭爨 1 验证了第霾步 显予土瓣一个p e r - s s e p 多态便煮，迸两发臻该餐点豹突变可莪 l 起猪 背膘厚和初生重的降低； 2 验证了1 7 4 7 b p 扩增片段的胁i 酶切多态傲点，进而发现该位点的突变可能造成 p 0 f y 表达水平的提高，并提高猪的早期日增重； 3 验证了1 7 4 7 b p 扩增片段的西f i 酶切多态位点，谯r n a 表达上发域该位点的突变可能 造成沈彤窝尹越瓣娃洙a 表达农乎降低； 4 、凝筏了第一内窖子上个耨豹t e 靛替换臻点，该短煮豹替换秘撑的表这量存在襁 芙，并对后期的体重增跃产生影响； 5 从r n a 表达水平验证了p d 叫用对g 日、只舭，删b 的调控作用。 关键词：猪。生疑性状，p o 洲州，p c r s s c p ，k m r f l p ，s n p ，l n r n a 表达承平，f e a l 矗m ep c r a b s t r a c t p o 明f ，( p i t u i 诅r yt r a n s c r i p d o nf a c t o r1 ) i sam e m b e ro f m ep o u d o m a i nf a m i l i e s na c t sa s a p 0 3 i t i v cr e g i i l a t o r yf a c t o ro f6 只艘a n dz 辨bg 曲e s ，柚dp l a y st l l ei n l p o r t a n tm l ei ni h en o 珊a l d e v e l o p m e n t 柚dg r o w mo fm 帅m a i s s op d 卅用w 船c o n s i d e r e dt op l a yav e r yi m p o n a n tr 0 i ei n g r o w ma l l dc a r c a s st m i t so f p o r c i n e t h e r e f o r e ，i ti ss e l e c t e da sac a n d i d a t eg e n ef o r 粤d w t l l 打a 记 h 1m i ss m d y ap a n i a l r e g i o np 0 1 y r i l o 啦i s m so fp o r c i n e 加w 州o ff o u rb r e e d s ：y o r k s h a i - e ， z h o n 野ub l a c k ，x i a n ga n dh e b a o ( m i n ) ，w e r ei n w s t i g a t e d b a s 酣o n1 l l er e s u l t so f p c r - s s c pa n d p c r - r f l p f o u rm u t a t i o ns 酶w 船s e l e c t e d 锄dt 1 1 er e l 撕o n s h i pb e m e e l lp o l y i n o r p h i s m sa n dg r o h t r a i t sw a s 粕a l y z e d i nt h es 啪et i m e ，m r n ae ) 【p r e s s i o n 8o fp 0 明f j ，g m 豫la n d 怒h - bw a s m e i l 叫。a t e db yr q p c r 1 1 1 ea s s o c i a t i o no fd n ap o l y m o 啦i 锄sa t l dm r n ae x p r e s s i o 船w a s n s n 口以 f o u rp o l y m o r p h i s m sh a d b e e ni d e n 石6 c d t h ea s s o c i a t i o no fg r o w l l l 扛丑破a n dg c i l o t y p e sw 踮 a i l a l y z c d d i s 廿b u d o no fc o n 髓p o n d i l l g 鲫。奶瞄i t le x o n4w 船蛐a l y z e da sw e u w ef o u n dm e g 锄o t y p ed i s 埘b u t i o no fc x o n4 ( 2 7 3 b p ) w 船q u 沁d i 仃妇i ti nf o w 栅出t h eg o t y p ea ao a p p e a r e di n y b r k s h a r ea n dz h o n 豁ub l a c l 【w h i i eg 即o t y p eb b 砸p f e s e i l ti n x i 柚g ，t h e p o l y m o f p h i 8 mo fe x o n4 ( 2 7 3 b p ) s i g n 媚c a i l t l y 船s o c i a t i a t e d 谢t hb a c k f a ti l l i c k n e s s o b o 4 9 9 ，p o 0 5 ) i nz h 鲜ub l a c k 兄媚i r f l pa i l d 胁n r f l p 州y l i l o 咄i s n l so ft l l e e g i o n1 7 4 7 b p ( b 咖e e ni n 帅n4 柚de x o n6 ) w e r ev a t i d a 例t h e 兄阳i - r f l pg 哪o t y i 坞o fm i sr e g i o nw a sm o s t i ya a i i if 0 叫b r e e d s t 1 l ec o n l a t i o n a n a l y s i ss h o w e dt l l es i g l l m c 柚ta s s o c i a 6 0 nb c t w e c nd a i l yw 百曲tg 咖b e f o f ea b l a o 0 n 彻d 胁i _ r f l pg e n o i y 】p ei nh e b a o ，a n dt h ea l l e l ebc o u l di n c r 龃t h ep d c ，删m r n a 钒d i s s i o n ( r = - 0 4 4 9 ，p 0 0 5 ) a - r f l pp o l y m o 讪i s ms h o w e das i 印i 矗c 柚t 髂s o c i a o n 耐t ht l l ep d 们门a n d 尸魁m r n ae x p 阳s s i o n s ( p ( o 0 1 ) i l ly o r k s h a r e ，b u tn or e l a t i o n s h i pw 船d i 8 c o v a 捌i ng r o 叭h 咖旭 a 母开o ft ci ni n 咖nl ( 1 5 1 5 b p ) ，r 彻r k e dc o r r e l a t c d 、i mm ed a i l yl i v ew e 蜒咖tg a i na n e r a b l a c t 鲥o n ( p o 0 5 ) a 1 1 dt l l ee ) 【p r e 8 s i o no f g h ( p ( o 0 5 ) s ot 1 1 es n p m a yp l a y 蚰i m p 叭如tr o l ei nt h e g h 删s i o n 蚰d 娟砘td a i l yw 咄曲tg a j i lb y 。o n 打州h go fg 麒a r 茁锄a 蝻i i l gt h ec o r r e l 鲥o no f m r ：n a 就p r e s 8 i o n si i l | p d 叫川，g hp 肛a n dz 研 p ，w ea 1 1 i wi nc o n c l u s i o n ：j p d 们用r e g u l a t c d 矾 p 足厶丁弭be x p r e s s i o n sb ym r n ae x p r e s s i o nl e v e l t h er 髑u l 乜船f o l l o w s ： 1 a l li d e n d f i e dm u t a t i o no f 既o n4 ( c t ) 、阳u l dd e c r s eb a c k f a tl l l i c l ( 1 l 器si nz h o n gx ub l a c k p i g s 2 n e 砌i - r f l pp o l y t n o 呻i s mo ft l l er e 西o no f1 7 4 7 b p ( b e t w e 髓i n 廿o n4a n de ) 【t o n6 ) m a y i n c i e a s e 尸0 叫州e x p r c s s i o na n de 盯l yd a i l yw e 嘞tg a i l l 3 a 协一r f l pp o l y m o f p h i s mo f 出er e g i o no f l 7 4 7 b pb e 附e e n i n 们n 4a i l de x t o n6 m a yd e c r e a s e p o 叫用a i l dp 慰e x p r e s s i o n 4 an e wm u 协t i o ns i t eo f i n 虹d nl ，t c 咖s l a t i o n ，w 船d e t e c t e d t h em u t a d o nm a v b ea 丘毫c t st t l e g 日e x p r e s s i o na n dd e c r c a s e st h el a t e rd a i l yw e 塘衄g a i n 5 m r n a e x p r c s s i o nl e v e lo f 加明门a 丘t si h e 向n c t i o nt o6 1 b 眦，强阻b k e yw o r d s ：p i g ，加叫f ，p c r s s cp ，p c r r h 卫r q p c r ，m r n a ，s n p 缩路语英汉对照表 缩略语英文中文 p o l j i f l p it u i t a r yc r a n s c 】1 i p ti o nf a c l ，d r1垂体特异性转录因子 鞠u l 稻p 。u 酗n od 。l i a i n p 。l j 同流速 p o u s bus p e e i n c 孙i n p 翻持雾区 s t s e r j n e t h r e o n i l l ea c t i v a t i o nd o m a i nn 端转景激活区 s n p s i n 9 1 en u c l e o t i d ep 0 1 y m o r p h i s m 单核苷酿多态位点 r 卜p c rr e t r o t r a n s l a t i o np o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n 反转录p c r 罐6 r 脚t hh o r m o n e生长激素 艘p r o l 8 e t i n 挺巍素 船8 t h y r o t r o p i n b e t a促甲状腺素b 蛭基 嗽p o l y m e r a s ec t l a i nr e a c t i o n 聚合酶链式反应 e 耗p r e 驰r i c t i f r a g 瑶e n tl e 晖t hp o l y | b o r p h i s m限制性片段长度多态性 凹l sq h t i t a t i ￥et i tl i 数量挂棱链煮 a s a r k e ra s s i s t e ds e l e c t 玉呲 捧记辅助选择 r e a l t i m ep c rr e a l t i m eq u 卸t i t a t i v ep 0 1 y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n 实时定量聚合酶链式厦应 s s e p i n g i e s t r a n dc o n f o r 呻t i 硼a lp o l y 珥o r p h i s m单链构型多态性 | h 图目录 图1i 垂体特异性转录因予在盘体前叶发商中的生物学功能一2 阁12p ( ) 卅刚结构及在人类中研究发现的突变位点线形示意图3 围1 3 生妖激素基闲空闻结构示意醋一7 幽l4 1 抽m 卸探针发光原理，】3 图l5s y b r g r e e n 染料法发光原理，1 4 图3 l 基因纽d n 提取效果图，3 9 图3 2 p 。卅尉第四外显予多态位点的p c r 扩增产物2 琼精糖检测一3 9 圜3 31 2 絮露烯酰胺凝睃电泳银染结果柏 固3 4p l 扩增产物阳性克隆质牲e c o r l 单酶切鉴定图谱，4 0 图，5 1 7 4 7 扩增片段的p c r 扩增效粜豳，4 4 幽3 6 m 口i 对肋w 州基因1 7 4 7 却扩增产物的船d i 限制性酶切4 4 图3 7 以打对扩增产物的限制性酶切( m a 砌为蚴2 2 ) 。4 7 犀3 8 猪朋跚州基因1 7 4 7 b p 扩增产物阳性克隆的砌兄i 单酶切鉴定图谱一4 9 图3 ，91 2 琼脂槠凝胶检测p 7 的p c r 扩增产物5 3 图3 - 】0 p 6 扩增产物阳性克隆质粒响单酶切圉5 3 露3 1 lp 8 扩增产物榆铡5 5 圈3 ，1 2p 8 扩增产物豹1 2 聚丙烯酰教凝胶电泳银染结果5 5 图3 1 3 总r n a 提取图5 9 国3 1 4 r n a 纯化效果图 5 9 窝3 1 5 以c d n a 模扳扩增g a p d h 对反转录结果进行捡测6 0 雹3 1 6 各个特测基霹的p c r 扩增产物一印 图3 t 7l o 倍稀释高浓度c d n a 模板对看家基因扩增，臣成的标准曲线6 l 图3 1 81 0 倍稀释高浓度c d n a 模板对看家基因扩增形成的标准曲线6 1 围3 1 9 标礁曲线圈一6 1 图3 2 0 d _ a 嘣n 的融解曲线6 2 图32 l 册u ，月纳融解曲线6 2 图3 2 2 哪的融解曲线6 3 图32 3 p 皿的融解曲线 6 3 图32 4 脚的融解曲线6 3 图4 1 靴o 弓l 物p c rs s 【1 p 聚莉烯酰胺凝胶电泳检测效果鞠7 4 图4 2 胁f i r f l p 琼脂糖凝胶电泳检测 一7 5 图43 脚d 酶切多态性的臻附烯酰胺凝胶电泳检测。7 6 图4 4 皿a i 酶切多态性的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测7 6 雷4 5 叫仃卦翌了分靠及扩增片段示意图 7 7 固5 l6 = h 的m r n a i i _ f = d n a 中的分布及定量p c r 产物分布示意圈9 9 图5 2 删的m r n a 硅d n a 中的分布及定量p c r 产物分布示意国9 9 国53 p 耻的m r n a 在d n a 中的分布及定量p c r 产物分布示意图1 0 0 英文图目录 f i gl _ lt h e & n c t l 。1 1o f p 0 叫川虹t e 衄o f p i t l i j t 埘d e v e l o f ) m 锄t 2 f j gl - 2s c h c n l a t i c 聪p r c s 哪i o n o f 血e p 沁1p r o t e i n 3 g 1 3 t i es h c 札r 。o f g ，窖曲e 7 h g i 一4 也e de i n e n l i n n u d l 嚣c e 醴t a 蚋卸p f o b e 1 3 f i g 1 5 | ： l e d e m e t o f n u o r e s c 即e d i n m rg r e c n 1 5 “g 3 一l g e m 锄i c d n a 髓t r a c t c d 如me a r t i s g u 。暑 3 9 f i g3 2 p c r p r o d u c to f p 眦i n e p 0 聊f ，p l 盘瞎r n 删址3 9 f l g 3 31 2 p a g ep a mo f p o r c i l l e m 己 g 即。既o n4 丹8 舯c n tp c r - s s c p 蛐a l y s i s 4 0 f 遮3 - 4 i d 嘶娃驻c 娟o n o f p lp o 商l v e d 拍e 蛐蚕e s 吲诮鼬e c 积i 一4 0 f 1 9 3 5p c rp | 0 d u c to f p o r c i 日e 加叫用p 咖m1 1 舳鲫l ，4 4 f 培3 6s e p a r a c i o no f1 7 4 7 b pp c rp r o d u do f 加叫用g 蹦ef o l l o w i n gd i g e s 吐0 n 州t hm d l “ f l g 3 7s e p 啪西o n o f j 7 4 7 b p p c r 筘o d u c t o f p 0 理h 粤e f o l b 喇n g 碰g e s 蛀o n 辆l 主l n ，i + 4 7 f i g3 - b i d 即h 丘c a 6 0 n o f l 7 4 7 b p p o 酊“w c l o d j g 骼t e d 谢t h 积i 一4 9 f i g3 9 岫p r ( 油】c t i o no f 州m 日p 7 5 3 f i g3 一1 0 i d t i 矗c “o f l 9 5 6 b p p 硝w d o n e d i g e s 把d 一曲o 照 5 3 f 蟾3 1 1p c r p m d l l 眦o f p o - o i t l e p o 【f ，p 8 舶g m e t 一5 5 f i g 3 - 1 2p a g ep a 札1o f p 哪i l e d “f 柳g e l l ep 8 行a g m tp c r s s c p 锄a i s 5 5 f g3 一1 3 黜确c 蛞明o f r n a i n 硝m i 臼i r y 一5 9 f i g 3 - 1 4 p “矗c a l l o n o f r n a l dp i l l l l 蛔q 5 9 掰g ，3 - 1 5p c r 删h c to f p o r d 酣g a m h 细罾m 锄t 6 0 f i g 3 - 1 6t h ep c r 舢d u 出o o f d 栅g 肌ei nr 嘲l 畦m ep c r 。6 0 3 - 1 7s t a i l d a r ds a r 叩1 ep c ra g r o s eg dd t r o p l l o f e 如a n a l 埘s 6 1 h g 。3 一1 8s 鼬d a f dc h ma 玎a l y s 诗0 f 雠 一蛀m ep c r 6 1 f i 皇3 - 1 9s 蚰d a r dc u r v ei nr 】- d m ep 傩 6 2 f 噜3 - 2 0 也e n 谳t i g - c t 盯v e 代弘s 郫t a 讯o r 恤砒n l 螂f 螂p l 嘶d 母- 矗池 6 2 f t g3 2 l m d t i l l g 栅删即虹虹v eo f 氇。锄p l 诳甜p f o d u dm 阳 6 2 f i g 3 _ 2 2t i l em d “n g c u r v em p 螂蝴i a d wo f m ea m p i i 靠e dp r o d u d ( 甜 6 3 f i g 3 - 2 3 l e m d 6 n g 哪i r 坩r 印r 憾即叫懈0 f m b a m p l i n e d p r o d u c l 胞一 6 3 h g 4 一l1 2 p a a e 弹t t o f p 明抽e p o 删窖龃e p l 0 翻鲫。融p c r s s c p 雠l 弘虮7 4 f i g4 - 22 ，匆d o s 。p ac c 黜o f n d - r f l ，p ii nm e1 7 4 7b p 酗料1 e n t7 5 到 4 3 6 9 烈g ep a t e f i lo f 舟赶- r h t 1 1 吐”1 7 4 7 舶舯e 1 1 t 7 6 f l g 4 46 缸a g ep a f 。n 1o f 西g l r f l p 至n 出e1 7 4 7 加舯瓤t 7 6 f j g4 5 尸0 叫州强o n0 f p o f c l n ed i s 硒h u h n gmt l l eh u t n a nm ，7 朋窟c n ea i l dt 1 1 ep r o d u c d o n 邵m e t o f r l * i i m e p c r 7 8 f 瓣5 1d j s l 五b u 石o no f m r n am 她删g 即e8 n dm el o c a d o ，1o f a m p l i 五e d 旨a g m 雠to f r p p c r ， 9 9 蜀g 5 - 2d l s i 曲u 癌衄。f m r n amt h e 嬲g e n e 耐l o c a t i o f 锄p b 舶d 触g 懈j t 。f r q p c r ，1 v v r i g5 3d j s t r i b u 廿o no f m r n ai nc h c 鲫ea n dt h el o c a 曲n 。f a m p l i 矗e d 缸g m e n to f r q p c r ，lc l ( ) 表目录 表2 i 血液裂解液配方 袭2 2 组甥i ) n a 提取液配方 2 0 2 0 表2 3d 1 q a 实验新耀引物2 3 表2 4 优化的p c r 反应体系2 6 表2 5 r n a 实验所用引物3 5 表3 1 猪p 0 叫州基因p 1 位点p c 艮s s c p 的基闻型和等位基阔频率一一4 l 表3 2 猪p 0 叫列基因p l 位点p c r _ s s c p 的纯台鹰、象台度、有技等位基田数和多态信息 含量辛2 衷3 3 大白猪尸d 川第四外显子多态位点和生长性状的方差分析 4 2 表3 4 大白猪加明用第四外显子多态位点利生k 性状的相关 4 3 表3 5 猪p d 明捌基因1 7 4 7 b p 的兄埘i 删基嗣型和等位基因频翠4 4 表3 6 猪p d 厦捌基西1 7 4 7 b p 扩增片段船口 曩f l p 纯台赓、杂台度、有效等纯蕾翻数和多 态信息禽量4 5 表3 7 葡包猪p d w 朋基因第四内含子至第六外显子阃1 7 4 7 扩增片段妇i r f l p 酶切片段 多态性和生欧性状的相关一4 5 表38 猪册州辇因1 7 4 7 b p 的n d 柑l p 基因攀和等位基因频率4 7 表39 猪，0 w 剧基因1 7 4 嘶扩增片段豹西狂r f l p 纯台度、杂台度、有效嚣位基因数帮 多态信息含量一 4 8 表31 0 中裔黑猪p d 【，j 月基因1 7 4 7 扩增片段r r f l p 酶切片段事态性和生眭性状的相 j ，一 z 蛆 表3 + 1 11 7 4 7 扩增片段扩增产糖的s n p 擅点5 0 表31 2p 6 中存在的s n p 位点一，5 4 表3 1 3 猪册【，州基蹰第一内古子多态位点p c r - s s c p 的基因型和等位基因频率5 6 表31 4 猪即门第一内古子翻0 r _ s s c p 多态位点的纯合度、杂合度、有效等位基囚数和 多态信息含量5 7 表3 1 5 大自猪册w 州基因第一内禽于p c r s s c p 多态性和生长性状的相芙5 7 表31 6 中畜黑猪_ p 0 洲基因第一内古子p c r s s c p 多态性羊| ：i 生长性状的相关5 8 表3 1 7 d 洲州和相关各基因的相关分析；4 表3 1 8 丈白猪册聊月及相关基因定量和生长性状的相关分析6 5 表3 1 9 中畜黑猪加删以及相关基嚣定量和生捩性状豹相关分析6 5 表3 2 0 大白猜* 相关基因表达量和p d 硼月箨基因型的相关分析6 6 v 【i 英文表目录 t b b21c o m p o s eo f b l o o dd l s s o j v es 0 1 u 6 0 n 2 0 t a b22c 哪p o s eo f d n af x 咖c n 帅s o l u d 彻2 0 t 曲23 t l l e p m e “o f d n a 一 一 2 3 t a b240 p 6 m i 口s y s t c mo f p c r 2 6 t a b2 5 m e p n f n e r d o 面g n e d f o r 唧l l i m c p c r3 5 t a b3 1d e t e u t i 伽r e 吕】1 t g 如r p c m s s c pi np 1s i t eo f 加u ，仃g e i l e 4 l t a b 32t h eg e n e t cp 0 i m o r p h i s mp a r a m e t e r so r 加州p 1s 沁p c r - s s c p 4 2 i 曲33a n o v ai np o r c i l l eg r 0 1 v t h 廿a l tc l a s s e d b y o n4g e n ef y p ei ny o 出出a r c 4 2 t 曲34c o m l a d o n o f g e l l o t y p c 柚d t l l eg r 帅恤a “i ny 0 f k s h a 托4 3 1 曲35 d e t e c d o n 托s i l l t s f o r p c r - d i g 鼹钯d “山只s m o e p o u f 州鲁瞰“4 4 t a h3 6t h eg 衄甜cp o l y m o r p h i s mp a 甩m e h 8o f p d w 尸，1 7 4 7 曲g m e n ts l t c 皿口i r f l p 4 5 1 曲3 7c o 删a t eo f g e n e 噼i n d i g 鹳t e d 船d ia n d t h e p 叭c b e 簪o w m t r 如4 6 t a b 3 8 d e c t i o nr e s u l t s f o r p c r r f l pd i g c s 石0 n w i t h n o f 加叫n g 锄e 4 7 1 曲3 9 t h e g e n e t i c 州y m o 叫1 l s m p m m e k 幅o f p d 剧1 7 4 7 抽鲫e n ts j t e b d r f l p 4 8 n b31 0 c o 批l 咖0 f g c 士l e t y p e md i g 髓t 舶m a da n d m e p o r c i n eg r 。w l h 帆h 4 8 t a b3 1 1 i h es n p s i n 出e 皿m 盯p 1 1p c r p m d u c t i o n 5 0 1 曲31 2 m c s n p s i i e i n m e p 6 p c r p r o d u c t j o n 一5 4 t a b3 1 3 d e t e c 石o n 瑚u l t s f o r p c r s s c p i n i l l 铷1s 沁o f 朋洲“2 e n o 5 6 t a b3 1 4 n e g 曲e h cp o l y i n 唧h i 锄p a m m e t o f 加叫用p 8s 憎p c r s s c p 5 7 1 曲31 5 。o r 删a t eo f g 曲el y p ei 1 1p c r s s c po r i n t nla 1 1 dt h ep o r c i n eg r o w m 啪n 5 7 h b3 1 6c o 肿1 a t co f g 翱et y p ei np c r s s c po f i n 仃o nla n dt h 。p o r c i eg r o w t 量l 讹n 5 8 t a b 31 7c o r r e l 撕o no f p 0 叫刷，删厶强酬h r n ae x p r e s 妇蛐6 4 t a b 3 1 8c o r r c l a h 鲫o f 加叫川，g 喝p 魁，删m r n a 戗p r e s s i o n a d 廿l e g r o w t l l 舰i t i n y b i d l m 。6 5 t a b3 1 9 “i a t i 彻o f 朋删用，g 巩艘，隅限p m r n a e x p r e s 8 j o n 岫d 山eg r o w 吐1 椭i t m z h o n 鲒u b l a c k 一 6 5 t a b32 0c o 鹏l a t 沁no f p o 叽州，g 职p 肛z 掰华m r n ae x p 【蠕8 i o na n dp 0 1 y m o r p h i s mi 士l y o r b h a r e ， 6 6 独饿悭声嗣 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作投取得的研究成果。尽我所知， 除了文中将疑麓鞋标浪帮致落戆堆方癸，论文中不包含其稳太已经发表或撰霹过的疆究或栗，瞧 不包禽为获得中国农业科学院或奠它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同： 作的同 志对零褥究所傲麴经储贾簸均已在论文中佟了骧确敷说嚷势表示了避意。 研究生签名：亩牟时间：淞口5 年月神日 关于论文使用授权的声明 本人完全了瓣中藩农盈辩学浣有关豫留、憧蠲学位论文的援定，却：中豳农业科学院有救僳 留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被蠢阅和借阈，可以采用影印、缩印绒扫描等复制手段僳 存、涎编学位论文。霹窳孛匡农l 秘学院霹鞋孀不鞠方式程零霹媒体上发表、传捶学位论文豹全 部或部分内容。 傺密酶学位论文在簿鬻震应港守毙协议 论文作者箍名：豸骞 茹矮签名：鎏够轰民 辩翔：洳口善年# 月淞目 薅闯：勘d 年莠阳霾 中尉农业科学院硬土学位论文第一章文献综述 l 。lp 0 u l f l 的研究背景 第一章文献综述 1 1 1j p 0 叫用鬻自的续梭及功能 垂体特异性转录绸子( 舞疽研拄馘s d p t i o n 蠡。搬r1 ) 简称尹f 扣? ，曾被称为g 胃曩j ，现已经 被正式命名为册氆q ，是p o u 蛋自家族孛，k 耪感源异型蛋囊乏一。k u 臻吖，o 撸j 窝 “n c 拍的缩写1 家族中许多成员瓤是重要的转录因子，它们都存在一段d n a 结台域，该缝合壤毽 括一个p o u 特异区( p o u - h d ) 和一个p o u 同源区( p o u s d ) ，对识别特定的d n a 序列势与 之结台起到关键性作用。 船u j 硝蛋囱及其异构体( p i 蝠，侈肼t 等) 存在予垂体及外周_ 眦中，由一个n 端转录激 潘嚣秘r 疆j 区缝成。p o u 区包括p ( 剐- s d 和p 0 u h d 两部分。p o u _ h d 由5 9 个氨基酸组成， 其中2 2 个氮基酸在戏掰蛋鑫家族中离庭保守，同潦区肉可搿成3 个n 螵旋结构，第个n 螺 旋的碱性氯基酸作为核转运信息调苇缨腿功能，第2 、3 耀个n 螺旋形戒进一步韵转折螺旋样褐 象，在第三个a 螺旋巾包禽一个六聚体e w f e ) 结构。w f e 盘 常保守熬碱性氧蓦酸镶嵌予雕a 双螺旋小沟内，与d n a 商亲和力结合。 n 端转蒙激活区由7 5 个氨基酸组成，为富含羟基氨基酸的高度保守区，其中羟纂氨基酸禽 量达到3 0 以上，它的结构很像r n a 聚合酶l 中的大亚基。含有数个脯氨黢，无a 螺旋结构 在磷戆土为转录激活靶基瓣启动子的主磊部位。p o u 区的主要功能是识别d n a 特弊序列并与 之惑亲翱力缝合，扶纛启穗靶基露鼢转最，箍剃s d 由k 鄱& a 和p o u 吝b 两个亚酝组成，每 个豫区各形成一个n 螺旋，它罪】对提裹p o u 虽是与玲k a 结合鹣特异性起关键性躯露用。 p o 狮州蛋白的圭要功能为通道转蒙慰生长激素熬医( g 群) 、蠼襞素基因艘) 窝艇甲软 腺素( 脚) 基因亚基的表达起到决定性作用，可以作为反式因子激嘏g 敞掀、鼹h8 及 加们用基因的转录，由此对生物体的生长发育产生戴耍影响。 王秩等( 2 0 0 0 ) 将含有人促生长索基因启动子和荧光色素酶报告基因的融合基因表达质粒 ( 搿2 i g 粕c ) 擎狻转柒或与ap d 羽基阂表达质粒菸转染于大鼠国细胞中，体外观察 h s 炼对荧光素酶袭达熬影蝻，铗礴究入健生长煮释菔激索辩垂体莉奸键生长缅稳中德生故基因 表达妁调控俘用及其与剧基鼹熟关系。结鬃表翻，单独转染p g l 2 嘻b - l # e 震粒靖量l s 鬟舅并 不影响荧光色素酶的裁达，与人的如联川基因表达鹱粒共转染最确s r 王 盟显援进荧光售素藩 表达至i 6 8 倍。由此证明，h s r h 促进人促生长索基因( g 封) 表达必须通过人p d 删心蛋自的 介导。 加泖基因对于胚胎期鲞体前叶的发育和相关旗因的表达有十分蘑要的作用。大鼠妊娠 第i 5 天攀伟翁辞大多数细胞已经出现瑚硎吖m r n a 和极低水平的p d c 盯刃蛋白。而第1 7 天 硝褪豫右开始袭这。黝t 强w 基因在轻狳期酾率先表达，预示蓿册们掰蛋白对于殛骀期 纛体翦魁馏胞发育分化以及g 簿秘擞基羁憝表达霹辘起着重要静作翊。础泖掰基因在胚骆 期垂体前# l | 】帮细胞的发育也蠢关键性豫用：殛赡期耄体嚣l 怒胃缨慈集中在秀个嚣域头 部和体部，头部的掩日细胞中无肋c 腿w 蛋白存在，出生后这群细臌姆逐灏淡亡，蕊体邦黪嬲野 细胞的发育有尸o 盯f 蛋白的参与，出生后襁以延续为成热垂体翦时中怒8 缨胞的生体，委：继 续受加，刷蛋自的调控。 嚣争箕 笋| 槛 毒毒工士 a c 朔i - h ，f s h髑hp 队 g h 鹫1 蓬体特异性转最因子在垂体前奸发育串的生物学功髓 秘窜一1 搬e 缸嚼嘲o f p 0 “f f ， n t e m lo fp i u 诲a 详d e v e l o p m e m 勘x 是最早发现的瓣体原生细胞的特异性标志，在拉克氏囊r 扛存在烈抚j 耜捌耀睫聪产生 的助妇和朋州在促性腺细胞、促甲状腺细胞、生长体细胞和假乳索细胞中表达，丽坶j 决 定了p d c ，? 用细胞系，并在煨终分化形成前对肿盯刷细胞系向生长体细胞篆转化中起到关键 作用，玎掰对生长体细胞、促乳素细胞和促甲状腺素细胞的发育极为重疆，在壕状突起部 脊一部分不受舶糯q 谪控翡德译虢躲素细耱系，在腧，l 出生前邵会消失。 1 1 2 朋州基闳在人类中的研究进展 有关人类p o 洲川基因的研究最早开始予日本，o h 魄等( 1 9 8 5 ) 蓖先