黄精及其炮制品的薄层鉴别研究.doc

黄精及其炮制品的薄层鉴别研究 刘建军1刘玲2夏浇1敖娇1鲍家科3* 1.贵阳中医学院，贵州贵阳550002；2.贵阳医学院，贵州贵阳550004；3.贵州省药品审评认证中心，贵州贵阳550004 【摘要】目的：以薯蓣皂苷元为对照品，建立黄精药材及其炮制品的薄层色谱鉴别方法。方法：采用硅胶G高效预制板，以氯仿-乙酸乙酯（151）为展开剂上行展开。结果：经考察不同的提取方法，展开剂和不同的展开条件，确定了实验方法。应用本方法对10批药材及其不同炮制品进行试验，斑点清晰，分离度好。结论：本鉴别方法操作简便、灵敏度高，可用于黄精药材及炮制品的定性鉴别。 关键词黄精；薯蓣皂苷元；薄层鉴别 【】R282.5【文献标志码】A【】1007-8517(xx)05-0014-03 黄精为百合科黄精属植物滇黄精Polygonatumkingia-numColl.etHemsl、黄精PolygonatumsibiricumRed.或多花黄精PolygonatumcyrtonemaHua的干燥根茎，按形状不同，习称大黄精、鸡头黄精、姜形黄精1。黄精味甘，性平，具有补气养阴、健脾、润肺、益肾的功效。据报道2-3，黄精主要含有多糖和皂苷类化合物，其中皂苷类化合物具有免疫调节、抗氧化、抗疲劳、降血糖、降血脂、抗肿瘤和改善学习记忆等作用。在xx版中国药典中，黄精药材的薄层鉴别以药材为对照品，为了进一步强化其定性鉴别的手段，本文以薯蓣皂苷元为对照，建立黄精药材的薄层鉴别方法。 1仪器和材料 1.1仪器水浴锅（DK-98-11A，天津市泰斯特仪器有限公司）；METTLERTOLEDOXS205分析天平；KQ-300DE型数控超声波清洗器。 1.2材料硅胶G高效预制板（青岛海洋化工厂分厂，批号：xx1212）；硅胶G（青岛海洋化工有限公司，批号：0120246）；薯蓣皂苷元(批号xx0111）；药材样品经贵州省食品药品检验所中药检测室鉴定为黄精药材；所用试剂均为分析纯。 2药材及炮制方法4 2.1药材对主产地贵州省范围内的黄精进行收集，由贵州省食品药品检验所李杨老师鉴定为PolygonatumsibiricumRed、PolygonatumcyrtonemaHua.，见表1。 2.2蒸黄精取原药材，除去杂质，洗净，大小分开，略泡，润透，置适宜容器内蒸812h，停火，置容器内闷过夜，取出，切厚片，干燥。 2.3酒黄精取原药材，除去杂质，洗净，略泡，润透，置适宜容器内蒸812h，切厚片，晾至半干；加酒拌匀，闷透，照酒蒸法（附录一炮制通则）反复蒸至表面棕黑色，内部深褐色，切厚片，干燥；或取蒸黄精片，照酒蒸法（附录一炮制通则）反复蒸至表面棕黑色，内部深褐色，干燥。 3方法与结果 3.1溶液制备方法 3.1.1供试品溶液取黄精药材粉末(过二号筛)约2g，置锥形瓶中，加入50ml乙醇，超声处理（功率160W，频率40kHz）40min，摇匀，过滤。精密量取续滤液25ml，加石油醚(6090)25ml，加盐酸9ml，回流水解2h，冷却，继以石油醚(6090)振摇提取3次，每次30ml，合并提取液，回收溶剂至干，残渣加乙醇溶解并转移至5ml量瓶中，加乙醇至刻度，即得。 3.1.2对照品溶液取薯蓣皂苷元对照品适量，精密称定，制成浓度为0.04mg/ml的溶液。 3.2色谱条件的优化 3.2.1展开剂及展开条件的考察和比较通过一系列预试验，确定基本操作方法:分别吸取对照品溶液和供试品溶液，点于同一硅胶G薄层板上，将展开剂倒于展缸中预饱和30min，薄层板预饱和20min展开后，上行展开，展距8cm。取出，晾干，喷以5%硫酸香草醛溶液显色。 考察三氯甲烷甲醇（41）、石油醚-三氯甲烷（11）、三氯甲烷-乙酸乙酯（41）三种展开系统，实验表明，只有三氯甲烷-乙酸乙酯（41）可以达到将黄精药材薄层色谱斑点展开和分离的结果。经进一步对三氯甲烷-乙酸乙酯展开系统的有关比例进行调整，结果表明以三氯甲烷-乙酸乙酯（151）展开后，薯蓣皂苷元的Rf值合适且两点能很好分离。结果见表2。 3.2.2点样方式和点样量的比较考察点状点和条带状点两种方式，结果显示，点条带状点比较容易出现拖尾且斑点分离不明显，点状点斑点比较清晰。在点样量为5l时，薯蓣皂苷元溶液与供试品溶液斑点都过浅且日光下无法查看。当点样量增加到10l时，薯蓣皂苷元溶液与供试品溶液分离效果明显，斑点清晰。故确定薯蓣皂苷元与供试品溶液点样量各为10l。 3.2.3薄层板的考察分别考察了硅胶G预制板与硅胶G（批号：0120246）自制板两种薄层板。结果表明：两种薄层板上供试品与对照品的色谱行为基本一致，斑点清晰且能较好的分离。结果见图1、2。 3.2.4温度影响的考察分别在高温(40）和低温（4）进行了考察：结果表明供试品和对照品在高温和低温时的色谱行为一致，各斑点能较好的分离，说明在高温和低温条件下本方法具有良好的适应性，结果见图3、图4。 3.2.5湿度影响的考察分别在高湿（72%）、中湿（50%）和低湿（18%）条件下进行考察，湿度以不同浓度的硫酸溶液进行控制。将点样后的薄层板放入展开缸，另一侧的展开槽里放一定浓度的硫酸，密闭1530min后再加展开剂展开。当硫酸-水（10095.5，V/V)时，相对湿度为72%；当硫酸-水（50100，V/V)时，相对湿度为50%；当硫酸-水（27.5100，V/V）；时，相对湿度为18%。结果表明供试品和对照品在高湿、中湿和低湿环境各斑点均能实现较好的分离，说明本方法具有良好的环境适应性，结果见图5-7。 3.2.6色谱条件的确定取供试品溶液与对照品溶液各10l，分别点于同一薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯(151)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%硫酸香草醛试液，105下显色后置日光下检视。 4样品的测定 4.1生黄精的测定结果取10批黄精药材，按“3.1.1项”下制备的供试品溶液后，按“3.2.6”确定的色谱条件进行检测，结果见图8。 4.2蒸黄精的测定结果取10批蒸黄精，按“3.1.1项”下制备的供试品溶液后，按“3.2.6”确定的色谱条件进行检测，结果见图9。 4.3酒黄精的鉴定取10批酒黄精，按“3.1.1项”下制备的供试品溶液后，按“3.2.6”确定的色谱条件进行检测，结果见图10。 5结论与讨论 以薯蓣皂苷元为对照品的黄精药材薄层鉴别方法曾有文献报道5，但其所使用的展开剂为苯与丙酮，因苯的毒性大，出于对试验人员安全和减少试验对环境污染考虑，本研究采用氯仿与乙酸乙酯作为展开剂。该方法操作简单、分离度好、斑点清晰、经对10批药材及其不同炮制品进行试验，均表明本薄层色谱鉴别方法重现性好，灵敏度高，可用于黄精药材及炮制品的定性鉴别。 参考文献 1国家药典委员.中华人民共和国药典（一部）S.北京:中国医药科技出版社,xx:154. 2庞玉新,赵致,袁瑷,等.黄精的化学成分及药理作用J.山地农业生物学报,xx,22(6):547-550. 3祝凌丽,徐维