（分析化学专业论文）高效液相色谱及样品前处理技术在中草药和食品分析中的应用研究.pdf

渊嬲 目录 摘要i a b s t r a c t i i i 第一部分绪论1 1 高效液相色谱发展简况l 2 高效液相色谱技术在中草药分析中的应用1 3 高效液相色谱技术在食品分析中的应用2 4 样品预处理技术的重要意义及研究进展2 4 1 固相萃取3 4 2 固相微萃取_ 4 4 3 超临界流体萃取5 4 4 微波辅助萃取：6 4 5 加速溶剂萃取技术。6 4 6 超声波提取6 4 7 浊点萃取7 4 8 液相微萃取8 5 课题研究的内容和意义1 0 第二部分研究报告1 3 一、胶束萃取一高效液相色谱法测定金银花中的绿原酸、芦丁和槲皮素1 3 1 引言1 3 2 实验部分1 3 2 1 仪器和试剂1 3 2 2 试验方法1 4 3 结果和讨论。1 5 3 1 不同萃取剂萃取率的比较1 5 3 2 胶束萃取条件优化1 6 3 3 浊点萃取条件优化1 8 3 4 方法的验证2 0 4 结论2 3 二、胶束萃取高效液相色谱法同时测定葛粉中的5 种异黄酮2 5 l引言2 5 2 材料与方法2 5 2 1 材料与试剂2 5 2 2 仪器与设备。2 5 2 3 溶液的配制2 6 2 4 样品处理2 6 2 5 色谱条件2 6 3结果与分析2 6 3 1 不同提取溶剂的比较2 6 3 2 胶束萃取参数的选择和优化2 6 3 3c p e 富集参数的选择和优化2 8 3 4 分析方法的确认2 9 4结论3 2 三、高效液相色谱法初步研究脂溶性维生素a 和e 的稳定性3 3 l 引言3 3 2 实验部分3 3 2 1 材料与仪器3 3 2 2 实验方法3 3 3 结果与讨论3 5 4 结论3 7 四、分散液液微萃取高效液相色谱法测定食品中维生素a 和e 3 9 1 引言3 9 2 实验部分。3 9 2 1 材料与试剂3 9 2 2 试验方法3 9 3 结果与讨论4 0 3 1 分散液液微萃取条件优化4 0 3 2 方法线性关系4 2 3 3 方法精密度与准确度4 3 3 4 实际样品的测定4 3 4 结论4 4 参考文献4 5 附录：硕士期间发表的论文题录一5 9 致谢6 1 摘要 高效液相色谱及样品前处理技术在中草药和 食品分析中的应用研究 分析化学专业研究生姜兰芳 指导教师周光明教授 + 摘要 高效液相色谱法( h i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ，h p l c ) 是在气相 色谱法和经典液相色谱法的基础上发展起来的一种新型分离分析技术。由于具有 分离效能好，分析速度快、检测灵敏度高、适用范围广和操作简单等特点，因此 在环境监测、生物工程、制药工业、食品分析、石油化工等领域获得广泛的应用。 中草药有效成份是中药防治疾病的物质基础，其含量的多少对中草药产品质 量控制和安全性评价有重要意义。 样品预处理作为色谱分析的一个重要步骤，是一个备受分析工作者关注的重 要方面。建立简单、快速、有效的样品预处理方式，以使复杂样品的色谱分析获 得较低的检测背景、同时能获得较高灵敏度是色谱分析工作者一直都在追求的目 标。 本文由绪论和研究报告两部分组成。绪论部分简单概述了高效液相色谱法概 述、色谱分析及样品预处理的重要意义、样品前处理方法的总结及应用进展。研 究报告部分建立了金银花中绿原酸、芦丁和槲皮素、葛根粉中异黄酮含量的h p l c 法测定和食品中脂溶性维生素稳定性研究及h p l c 法含量测定。 1 胶束萃取高效液相色谱法测定金银花中的绿原酸、芦丁和槲皮素 建立m m e h p l c 叫v ) 法测定金银花中绿原酸、芦丁和槲皮素含量，并采用非 离子表面活性剂t r i t o n x - 1 0 0 作为萃取剂萃取金银花中的有效成分，利用表面活性 剂的浊点现象对萃取液进行预富集，采用l 1 6 ( 4 5 ) 正交试验对胶束萃取条件进行优 化，并对其含量进行测定。采用p h c n o m c n c xc 1 8 色谱柱( 1 5 0m i n x 4 6r a n l ，5g r n ) ， 以甲醇0 2 冰醋酸为流动相梯度洗脱，体积流量为0 8m l m i n ，紫外检测波长为 3 5 0 h m ，采用外标法测定金银花中的绿原酸、芦丁和槲皮素的含量。在优化条件： 5 t r i t o nx 1 0 0 ( w v ) ，固液比为4 0 0 ：1 ( m l g 1 ) ，3 0 超声萃取3 0 m i n ，提取的有 效成分含量最大。与传统萃取剂相比，5 t r i t o nx 1 0 0 ( w v ) 作为提取剂时，提取 西南大学硕士学位论文 的有效成分含量最大。在提取液中加入氯化钠可以促使两相的分离，且每种被测 物的预富集因子平均值为1 2 5 。应用本研究中建立的方法来测定市售金银花样品中 被测物的含量，并采用标准品溶液来证实本研究的方法。 2 胶束萃取高效液相色谱法同时测定葛根粉中的5 种异黄酮 基于表面活性剂作为萃取剂，应用胶束萃取反相高效液相色谱法测定葛根粉 中葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆苷元和染料木素5 种异黄酮的含量。方法：以 非离子表面活性剂t r i t o nx - 1 1 4 为萃取剂，采用p h e n o m e n e xc 1 8 色谱柱，甲醇0 2 5 ( v v ) 冰醋酸溶液为流动相，梯度洗脱，利用紫外检测器在2 5 0 n m 波长处进行检测。 考察色谱测定条件，优化胶束萃取和浊点预富集参数。结果：采用3 ( w v ) t r i t o n x 1 1 4 表面活性剂，固液比为1 0 0 ：l ( m l g ) ，4 0 下超声萃取3 0 m i n ，所得的萃取率 最大。在表面活性剂提取液中，加入一定量的氯化钠进行浊点预富集，可以提高 萃取率和预富集因子。该方法的定性检测限范围是0 0 1 6 - - - 0 0 7 9 p , g m l 阶3 ) ，平 均回收率为9 3 7 - - 9 8 9 。结论：该方法简便快速、灵敏可靠、绿色环保，适用 于葛根粉中葛根素等5 种异黄酮成分含量的测定和产品质量控制。 3 高效液相色谱法初步研究脂溶性维生素a 和e 的稳定性 以高效液相色谱法为检测方法，对维生素a 和e 的稳定性进行了初步研究。以 p h e n o m e n e xc 1 8 ( 1 5 0m m x 4 6m mi d ) 柱为分析柱，纯甲醇为流动相，s p d 2 0 a 紫外 检测器检测。结果表明：维生素a 对热、中性偏碱、还原剂等较稳定，对酸、氧化 剂等不稳定。维生素e 对热、中性偏酸、还原剂等较稳定，对酸、氧化剂等不稳定。 4 分散液液微萃取高效液相色谱法测定食品中维生素a 和e 建立了简便、快速、有效的分散液液微萃取( d l l m e ) 高效液相色谱法( h p l c ) 测定食品中维生素a 和e 的分析方法。以维生素a 和e 萃取率的平均值为检测指 标，采用l , s ( 37 ) 正交试验法考察了萃取剂的类型、用量、分散剂的类型、用量以 及萃取时间和离子强度6 个影响因素，利用高效液相色谱法测定维生素含量。在 优化条件下，评价了方法的可靠性。维生素a 和e 在0 2 3 1 7 4 1 x g m l 范围内线性 关系良好；定性检出限分别为3 2 6n g 、7 6 n g ( 删= 3 ) ；相对标准偏差为0 6 8 3 5 9 ( n = 6 ) ；浓缩因子为7 5 9 0 。该方法应用于食品分析，加标回收率为9 0 6 - - - 9 6 7 之间，r s d 在1 7 8 - - 3 2 ( n = 6 ) 之间。用正交试验法优选得到的工艺稳定、 方法可行，适用于食品中维生素a 和e 的分析。 关键词：浊点萃取；液液微萃取；表面活性剂；中草药；h p l c a b s t r a c t s t u d y o i lt h eh i g hp e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y a n dp r e t r e a t m e n t t e c h n o l o g ya p p l i e d t oh e r b a lm e d i c i n ea n d f o o da n a l y s i s s p e c i a l t y ：a n a l y t i c a lc h e m i s t r y p o s t g r a d u a t e ：j i a n gl a n f a n g 一一 一 m e n t o r ：p r o f z h o ug u a n g m i n g a b s t r a c t h i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ( i - i p l c ) a sa ni m p o r t a n tm o d e m m e a s u r e m e n to fa n a l y s i sa n d s e p a r a t i o ni sd e v e o p l e do nt h eb a s i so fg a s c h r o m a t o g r a p h ya n dc l a s s i c a ll i q u i dc h r o m a t o g r a p h y d u et o i t s g o o ds e p a r a t i o n e f f i c i e n c y , h i g h - s p e e da n a l y s i s h i g hs e n s i t i v i t y , w i d er a n g eo fa p p l i c a t i o n sa n ds i m p l e o p e r a t i o n ，i th a sb e e nw i d e l yu s e di nt h ea r e a so fe n v i r o n m e n t ，b i o l o g ye n g i n e e r i n g ， p h a r m a c y , f o o d s t u f fa n dp e t r o l e u ms of a r a c t i v e c o m p o n e n t s i nt r a d i t i o n a lc h i n e s em e d i c i n e ( t c m ) a r ei t ss u b s t a n c e f o u n d a t i o n sf o ru s ei nc u r i n gd i s e a s e s t h ec o n t e n to ft h e s ea c t i v ec o m p o n e n t si n t r a d i t i o n a lc h i n e s em e d i c i n ea r ei m p o r t a n tf o rc o n t r o l l i n gp r o d u c tq u a l i t ya n de v a l u a t i n g i t ss e c u r i t y a sa ni m p o r t a n tp r o c e d u r eo fc h r o m a t o g r a p h ya n a l y s i s ，s a m p l ep r e p a r a t i o na l w a y s d r a w sm u c ha t t e n t i o n as i m p l e ，r a p i da n de f f e c t i v es a m p l ep r e p a r a t i o nm e t h o df o rt h e c o m p l e xm a t r i xc h r o m a t o g r a p h i ca n a l y s i si sa l w a y st h et a r g e tt h a tp u r s u e db yt h e a n a l y s t t h et h e s i si n c l u d e st w os e c t i o n s r e v i e wa n dr e s e a r c hr e p o r t i nt h er e v i e ws e c t i o n , i n f o r m a t i o na b o u th i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h ys u c h 嬲c h a r a c t e r i s t i c ，t h e d e v e l o p m e n to fc h r o m a t o g r a p h yt e c h n o l o g ya n dt h ei m p o r t a n c eo fs a m p l ep r e p a r a t i o n , t h em e t h o d sa n da p p l i c a t i o no fs a m p l ep r e p a r a t i o nw e r es u m m a r i z e d i nt h en e x t r e s e a r c hr e p o r ts e c t i o n , a n a l y s i sm e t h o d so fd e t e r m i n a t i o no fc h i o r o g e n i ca c i d , r u t i na n d q u e r c e t i ni nh o n e y s u c k l ea n di s o f l a v o n e si nk u d z u v i nr o o tw e r er e p o r t e db yh p l c i i i 西南大学硕士学何论文 a n ds t a b i l i t y s t u d yo fv i t a m i n sa n dv i t a m i n s c o n t e n ti nf o o d sw e r er e p o r e db y 1 1 i g h p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y 1 m i c e l l e m e d i a t e de x t r a c t i o nf o rt h ea n a l y s i so fc h l o r o g e n i c a c i d ，m t i na n dq u e r c e t i n i nh o n e y s u c k l eb yh p l c - u v am m e h p l c v ) m e t h o dw a sd e v e l o p e df o rt h ed e t e r m i n a t i o no fc i l l o r o g e m c a c i d ，m t i na n dq u e r c e t i n , n o m o n i cs u r f a c t a n tt r i t o nx 一10 0w a su s e dt oe x t r a c ta n d p r e c o n c e n t r a t ea c t i v ei n g r e d i e n t sf r o mh o n e y s u c k l ep r i o rt ot h e i rd e t e r m i n a t i o nb y h p l c u v t h ee x p e r i m e n t a lc o n d i t i o n sw e r eo p t i m i z e db yal 1 6 ( 4 ) o r t h o g o n a la r r a y d e s i g n ( o n d ) w i t hf i v ef a c t o r sa tf o u rl e v e l su s i n gs t a t i s t i c a la n a l y s i s u s i n ga p h e n o m e n e xc l $ c o l u m n ( 1 5 0m i n x 4 6m i l l ，5 m ) ，t h em o b i l ep h a s eo fm e t h a n o l 一0 2 a c e t i ca c i dw i t he l u t i o n ，t h ef l o wr a t ew a s0 8m l m i n ，t h ed e t e c t i o nw a v e l e n g t hw a sa t 3 5 0a m ，t h ec o n t e n to fc h l o r o g e n i ca c i d ，m t i na n dq u e r c e t i nw e r ed e t e r m i n e db y e x t e r n a ls t a n d a r dm e t h o d u n d e ro p t i m u mc o n d i t i o n s ，i e 5 t r i t o nx - 10 0 ( w v ) ， l i q u i d s o l i dr a t i oo f4 0 0 ：1 ( m l 分1 ) ，u l t r a s o n i c a s s i s t e de x t r a c t i o nf o r3 0m i na t3 0 。c ， t h ee x t r a c t i o nc o n t e n to ft h ea c t i v ei n g r e d i e n t sr e a c h e dt h eh i g h e s tv a l u e w h e n c o m p a r e dw i t hc o m m o n l yu s e ds o l v e n t s ，5 t r i t o nx 一10 0y i e l d e di naw a yh i g h e rt h a n t h ee x t r a c t i o ne f f i c i e n c yo fm e t h a n 0 1 f o rt h ep r e c o n c e n t r a t i o no fc o m p o u n d sb y c l o u d - p o i n te x t r a c t i o n ，s o d i u mc h l o r i d ew a sa d d e dt ot h es o l u t i o nt of a c i l i t a t et h ep h a s e s e p a r a t i o n 1 1 l ep r e c o n c e n t r a t i o nf a c t o r f o re a c hc o m p o u n dw a sa b o u t1 2 5 t h e p r o p o s e dm e t h o dh a sb e e na p p l i e dt ot h ed e t e r m i n a t i o no fa c t i v ei n g r e d i e n t si nd i f f e r e n t s a m p l e sa n das t a n d a r dr e f e r e n c em a t e r i a l ( s r m ) 2 s i m u l t a n e o u sd e t e r m i n a t i o no fi s o f l a v o n o i d si nk u d z u v i nr o o ts t a r c hu s i n gh i g h p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h ym i c e l l em e d i a t e de x t r a c t i o n am e t h o db a s e do nm i c e l l e - m e d i a t e de x t r a c t i o nw a sd e v e l o p e df o rt h es i m u l t a n e o u s d e t e r m i n a t i o no ff i v ei s o f l a v o n o i d si n c l u d i n gp u e r a r i n , d a i d z i 玛d a i d z e i n ，g e n i s t i na n d g e n i s t e i n f r o mk u d z u v i nr o o ts t a r c h b yr e v e r s e p h a s eh i 曲p e r f o r m a n c el i q u i d c h r o m a t o g r a p h y ( r p - h p l c ) m e t h o d s ：t h en o n - i o n i cs u r f a c t a n tt r i t o nx - 11 4w a s c h o s e na st h ee x t r a c ts o l v e n t t h es a m p l e sw e r ea n a l y z e do n ap h e n o m e n e xc , sc o l u m n 、析吐lm e t h a n o l - 0 2 5 ( v v ) a c e t i ca c i dg l a c i a la sam o b i l ep h a s eu s i n gag r a d i e me l u t i o n a n dd e t e c t e d 、析mau vd e t e c t o rs e ta t2 5 0n n l v a r i o u se x p e r i m e n t a lc o n d i t i o n sw e r e i n v e s t i g a t e dt oo p t i m i z et h ee x t r a c t i o na n dp r e c o n c e n t r a t i o np r o c e s s r e s u l t s ：3 o f t r i t o nx - 114s u r f a c t a n t ( w v ) ，l i q u i d s o l i dr a t i oo f10 0 ：1 ( r r l l g ) ，u l t r a s o n i c - a s s i s t e d e x t r a c t i o na t4 0 。cf o r3 0m i n ，t h ee x t r a c t i o ny i e l dr e a c h e dt h eh i g h e s tv a l u e f o rt h e p r e c o n c e n t r a t i o no fc o m p o u n d sb yc l o u d - p o i n te x t r a c t i o n , s o d i u mc h l o r i d ew a sa d d e d t ot h es o l u t i o nt of a c i l i t a t et h ep h a s es e p a r a t i o na n di n c r e a s et h ep r e c o n c e n t r a t i o nf a c t o r t h el i m i to fd e t e c t i o n ( l o d ) w a si n t h er a n g eo fo 016 - 0 0 7 9l x g m l 僻s n = 3 ) i n k u d z u v i nr o o ts t a r c h t h ea v e r a g er e c o v e r i e sw e r e9 3 7 9 8 9 c o n c l u s i o n ：t h i s n e wm e t h o di sl o wc o s t ，h i g he x t r a c t i o ne f f i c i e n c y ，f r i e n d l y - e n v i r o n m e n ta n ds i m p l e a b s t r a c t o p e r a t i o n ，a n ds u i t a b l ef o ru s ei nt h eq u a l i t yc o n t r o lo f f i v ei s o f l a v o n o i d sf r o mk u d z u v i n r o o ts t a r c h ， 3 s t a b i l i t ys t u d yo fv i t a m i n sa a n de b yh i g h p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y t h es t a b i l i t yo fv i t a m i n saa n dew e r ei n v e s t i g a t e d 、析t i lh p l c t h es t u d ya c h i e v e d b yu s i n gap h e n o m e n e xcl g ( 15 0m i n x 4 6i n n li d ) c o l u m nw i t h10 0 m e t h a n a l 嬲 m o b i l ep h a s e ，a c c o m p l i s h e db yu s i n gs p d 一2 0 au vd e t e c t o r t h er e s u l t ss h o w e dt h a t v i t a m i nai ss t a b l et oh e a t i n g ，n e u t r a lt oa l k a l i ，r e d u c i n ga g e n t ，b u tu n s t a b l et oa c i d s o l u t i o na n do x i d i z i n ga g e n ta n dv i t a m i nei ss t a b l ei nt h ec o n d i t i o no fh e a t ，n e u t r a lo f f a i n t l ya c i ds o l u t i o n ，r e d u c i n ga g e n t ，b u ti tw a sv e r ys e n s i t i v et ob a s i cs o l u t i o na n d o x i d i z i n ga g e n t 4 d i s p e r s i v el i q u i d - l i q u i dm i c r o e x t r a c t i o nc o u p l e dw i t hh i g hp e r f o r m a n c el i q u i d c h r o m a t o g r a p h yf o rt h ed e t e r m i n a t i o no f v i t a m i n sa a n dei nf o o d a s i m p l e ，r a p i d a n de f f e c t i v e m e t h o d ，t h ed i s p e r s i v el i q u i d l i q u i d m i c r o e x t r a c t i o n c o u p l e d w i t h h i 曲p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ( d l l m e h p l c ) ，h a sb e e nd e v e l o p e df o rt h ee x t r a c t i o na n dd e t e r m i n a t i o no fv i t a m i n sa a n de i nf o o d t h es i xr e l e v a n tf a c t o r s ，s u c h 嬲t y p ea n dv o l u m eo fd i s p e r s i o na g e ma n d e x t r a c t i o ns o l v e n t s ，t h ee x t r a c t i o nt i m ea n di o n i c s t r e n g t hw e r ei n v e s t i g a t e da n d o p t i m i z e db yt h el 1 8 ( 37 ) o m l o g o l l a ld e s i g n 、) l r i n lt h ea v e r a g ee x t r a c t i o nr e c o v e r i e so f v i t a m i n saa n de 嬲t h ei n d e xd e t e r m i n e db yh p l c u n d e rt h eo p t i m i z e de x t r a c t i o n c o n d i t i o n s ，t h er e l i a b i l i t yo ft h ep r o p o s e dm e t h o dw a se v a l u a t e d ag o o dl i n e a r r e l a t i o n s h i pw a so b t a i n e di nt h er a n g eo fo 2 3 - 17 4p g m lo fb o t l lv i t a m i na a n d v i t a m i ne t h el i m i t so fd e t e c t i o nw e r e3 2 6n g ，7 6 n g ( s i n = 3 ) ，r e s p e c t i v e l y t h e r e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n sw e r e0 6 8 - 3 5 9 ( 刀= 6 ) t h ee n r i c h m e n tf a c t o r sr a n g e d f r o m7 5t o9 0 t h ed e v e l o p e dm e t h o dw a sa p p l i e dt ot h ed e t e r m i n a t i o no fv i t a m i n sa a n dei nf o o d ，t h ea v e r a g er e c o v e r i e sw e r e9 0 6 9 6 7 埘t i lr s do f1 7 8 一3 2 ( 刀= 6 ) t h eo p t i m i z e dt e c h n o l o g yi ss t a b l e ，f e a s i b l ea n ds u i t a b l ef o rt h ea n a l y s i so f v i t a m i n saa n dei nf o o d k e y w o r d s ：c l o u dp o i n te x t r a c t i o n ；d i s p e r s i v el i q u i d - l i q u i dm i e r o e x t r a c t i o n ； n o n - i o n i cs u r f a c t a n t ；t r a d i t i o n a lc h i n e s em e d i c i n e ；h p l c - u v v 第一部分绪论 第一部分绪论 1 高效液相色谱发展简况 色谱法作为一种分离技术与方法，最早是由俄国植物学家茨维特( t s w e t t ) 在 1 9 0 6 年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法( c h r o m a t o g r a p h y ) 因之得名。 后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法【l j 。 高效液相色谱法( h i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ，h p l c ) 的发展始于 2 0 世纪6 0 年代中后期，它是在经典液相柱色谱的基础上，引入气相色谱的理论和 技术，应用于液相色谱系统的设计，同时机械、光学和电子等技术上的进步，也 促进了液相色谱技术的发展，出现了具有高效色谱柱、高压输液泵和高灵敏度检 测器的近代高效液相色谱装置和仪器，在柱效、速度和灵敏度方面远远超过经典 液相色谱。2 0 世纪7 0 年代中期以后，微处理机技术用于液相色谱，进一步提高仪 器的自动化水平和分析精度。2 0 世纪8 0 年代新一代色谱仪是智能色谱仪，为色谱 分析在定性、定量方面又迈进了一大步【1 1 。目前，高效液相色谱分析方法已经广泛 地应用于石化分析过程、环境保护监测、生物样品分析、工业卫生调查和评价、 药物动力学和毒理学研究、食品分析、法庭取证分析、核能和燃料分析、制药过 程的监测、化妆品和香料组成分析、中草药质量监测等领域。 2 高效液相色谱技术在中草药分析中的应用 中草药是中国传统医学防治疾病的主要工具，曾为中华民族的繁衍昌盛做出 了卓越的贡献。随着人类文明程度的提高，人们要回归自然的要求日趋强烈，中 药作为天然药物由此受到青睐和重视，在今后的医疗保健事业中将起到非常重要 的作用。中草药研究，1 8 世纪以前一直采用的是传统的中医学方法，1 9 世纪中叶 以来，随着东西方文化的交流和相互渗透的增加，学者们开始用现代科学技术研 究中药，并且范围广泛、深度日益加深，特别是中药的有效成分及其药理作用和 机理。中药应用于临床的现代研究开展了深入广泛的探讨并取得了巨大成就。目 前更先进的技术是将中药有效成分提取后，采用中草药的有效成分来治疗一些疾 病，比如金银花提取的有效成分为绿原酸，在实验中发现绿原酸具有抗氧化性、 抗肿瘤、抗菌、抗病毒、免疫调节、降血糖等多种功效。每一个单味中药中都有 很多的有效成分组合，所以说中药治病既有效，又快捷，而且很少有副作用，正 是由于这些原因，中草药受到越来越多人们的关注，而中草药的品质也是至关重 要。由于中草药的成分非常复杂，以往常用的薄层色谱等方法因其精密度、准确 度、灵敏度、重现性差而不能满足现代中药的需要，因此，高效液相色谱以其高 灵敏度、高速、高压、高效率的优点在中草药有效成分的定性定量检测中起到非 西南大学硕士学位论文 常重要的作用。据统计，目前几百万种化合物中，8 0 的化合物宜采用液相色谱分 析，2 0 的化合物宜采用气相色谱分析。目前高效液相色谱己经广泛应用于生物碱 2 - 4 、皂苷【5 1 、黄酮【6 、葸酣引、香豆素【9 】、萜类物质【1 0 , 1 1 】、有机酸【1 2 , 1 3 1 等各种中药 有效成分的测定。 3 高效液相色谱技术在食品分析中的应用 食品是人类生活中不可缺少的必需品，也是人类生命活动能量的来源。食品 种类繁多，各种食品具有不同的特性和营养成分，它所包含的维生素、有机酸类、 氨基酸、糖类等是维持生命所必需的一类微量营养素，是维持人体生命活动 必须的有机物质，也是保持人体健康的重要活性物质，对机体的新陈代谢、 生长、发育、健康有极重要作用。如果长期缺乏其中的某种营养素，就会引 起生理机能障碍而发生某种疾病。随着社会的进步，人们对食品营养的需求和 要求越来越高，市场上声称含有各种营养成分的食品也越来越多。任何营养素都 有一个量的平衡与限度，营养素过少，可能会患营养缺乏症；营养素过多，则可 能会患心血管病、糖尿病、肥胖病等慢性病。目前，我国食品营养成分的标示和 检测方面还存在一些问题，如使用不适当的检测方法等。近年来高效液相色谱分 析法在食品分析中的应用日益增多，它比化学分析法操作简单、快速，并能给食 品营养成分的表示和检测方面提供更多的有用信息。m o r t e na k a l l t l 4 j 建立了以7 乙腈酸性缓冲溶液为流动相的等度洗脱反相高效液相色谱测定食品蔬菜中的水溶 性维生素b 6 的分析方法。该方法具有简便、快速、准确、分离效果好的特点。l a u r a y w a n g 1 5 等建立- f h p l c f d 测定血浆中的维生素k 1 ，该方法线性范围宽、 检测限低、回收率高。高效液相色谱法已经广泛应用于维生素【悼1 6 1 、有机酸1 7 , 1 8 】、 氨基酸【1 9 j 的检测应用。 4 样品预处理技术的重要意义及研究进展 样品前处理在色谱分析过程中是一个既耗时又极易引入误差的步骤，是色谱 分析技术发展的一个重要领域，样品处理的好坏直接影响色谱分析的最终结果， 所以色谱样品的处理一直是广大色谱工作者十分关注的问题。目前，色谱分析样 品制各方法正处在多种处理技术并存、已有的技术和新开发出来的技术不断组合 的局面下，这种局面的目的和结果就是要求实现快速、有效、简单和自动地完成 分析样品制备过程。除此之外，与各种样品制备技术相关的装置其操作程