PRRS的现状及其免疫.ppt

PRRS的现状及其免疫,曾亮明,福州大北农生物技术有限公司FuzhouDaBeiNongBiotechCo.Ltd,主要内容,一、PRRS的防控现状二、PRRSV的免疫机制三、佐剂改良PRRSV疫苗的研究,一、PRRS的防控现状,1、母猪繁殖障碍十分严重,急性流产流产率可达10%以上，有时可致母猪共济失调、转圈等神经症状，可导致14%的死亡率不规律的发情和不孕通常出现在急性流产期1周后，维持14个月不正常分娩妊娠100118产仔，产出弱仔、死胎、木乃伊胎,2、哺乳仔猪极高的死亡率,早产弱仔由母猪妊娠后期发生经胎盘感染所致死亡率可达60%伴有沉郁、消瘦、呼吸困难、眼结膜水肿个别病例出现震颤或划桨运动，水样腹泻,3、保育和育肥猪疾病复杂化,急性期表现为厌食、沉郁、呼吸困难、皮肤发红、生长减缓极易继发链球菌、副猪嗜血杆菌、肺炎支原体继发感染后，药物难以控制，死亡率高达1220%,4、PRRSV引起的PRDC异常严重,PRRSV是引起猪呼吸道疾病综合征的原发病原之一PRRSV感染可导致呼吸困难、发热和咳嗽等临床症状，严重影响猪群的生长速度和饲料转化率,5、PRRSV导致其它疫苗（特别是猪瘟）免疫效果差,PRRSV影响猪瘟抗体水平的现象早已有报道针对PRRSV影响猪瘟抗体水平的现象，应着眼于群体，若仅关注个体的对号入座与现实不符PRRSV阳性猪，猪瘟抗体不一定低PRRS活跃的猪群，猪瘟抗体合格率低福州大北农技术服务检测中心对全国200多个规模化猪场的母猪群跟踪调查发现，母猪群PRRS抗体不符合稳定标准，且S/P值离散度大于40%（变异系数），其猪瘟抗体合格率普遍低于60%,母猪群ELISAS/P值稳定性标准,二、PRRSV的免疫机制,1、体液免疫,IgM感染后57d出现，23周降至检测限以下IgG感染后710天出现，4周达高峰中和抗体（NAs）感染后3周出现，60d达高峰，并以较低水平长期存在,特异性体液免疫的局限性,许多抗体在感染后一周左右出现并持续存在数月，但与保护作用无关中和性抗体产生延迟，并以较低水平长期存在免疫后3周才出现低水平的中和性抗体不仅不能控制病毒的复制，反而增强PRRSV在肺泡巨噬细胞中的复制（抗体依赖性增强作用，ADE）PRRSV灭活疫苗临床应用的全面溃败，能给我们更多现实的启示,抗体依赖性增强作用（ADE）,低滴度的PRRSV中和抗体（亚中和水平抗体）可引起ADEPRRSV的ADE现象在体外和体内都已被证实在培养物中加入一定滴度的PRRSV抗体，可使PRRSV的增殖滴度提高10-100倍在病毒中加入加入一定量PRRSV抗体，再注射妊娠中期的胎儿，结果比单独注射PRRSV的致病性显著增强,2、特异性细胞免疫,T细胞对PRRSV的初次反应弱PRRSV特异性的IFN-分泌细胞最早在接种后3周后出现，之后10周在50100万单位/每百万外周血单核细胞（PBMCs）范围内不规律地波动感染1年后T细胞反应逐步增强在接种后48周IFN-分泌细胞增长到400500万单位/每百万PBMCs一般，如PRV，接种后3周IFN-分泌细胞数量在200300万单位/每百万PBMCs间波动这是PRV疫苗免疫有效的根源,3、巨噬细胞默许感染的改变,巨噬细胞默许感染的改变是针对PRRSV弱毒疫苗免疫假定赋予的功能有限的研究表明是免疫调节所致，但其完整机制尚未明了实验室和田间表明，这种机制对PRRS的防控作用是极其脆弱的免疫过的猪群仍然感染异源毒株发病,PRRSV免疫特性的现实启示,有效的体液免疫产生延迟，加上ADE现象的存在使PRRSV抗体临床保护意义不确定细胞免疫延迟且长期处于较低水平，使PRRSV特异性细胞免疫的临床保护只能成为奢望巨噬细胞默许感染的改变是目前大多数PRRS弱毒疫苗免疫的主要功能，保护力很脆弱,特异性免疫的缺席，免疫只能让猪群统一感染，这是多年来PRRS弱毒疫苗临床免疫的尴尬。,三、佐剂改良PRRSV疫苗的研究,福建省农业科学院畜牧兽研究所P3实验室福州大北农生物技术有限公司,1、试验概况,2、细胞免疫特性研究,1、试验概况,实验材料“蓝定抗”抗原（CH1-R株弱毒）：产品批号2019002106.0TCID50/头“蓝定抗”专用佐剂（稀释液）：批号2019002PRRSV强毒（TJ株）：5代，48周龄抗原抗体阴性猪，肌注105.0TCID50/头，观察21d应5/5发病，致少3/5死亡（45，5/5，4/5）实验动物同一母猪生产的，30-35日龄断奶仔猪,没有免疫过任何其他疫苗实验前帅选项目：CSFV抗原Ag、抗体Ab、PRRSV抗原、抗体，PRVgE抗体，PCV-2抗体、抗原实验动物房：福州大北农质检中心无菌动物房,阴性猪筛选结果,试验猪分组,将16头34日龄仔猪随机分为A、B、C、D四组，每组分别饲养于相对独立的猪栏试验A组5头：肌注蓝定抗抗原1头份专用佐剂2ml试验B组5头：肌注蓝定抗抗原1头份常规稀释液2ml试验C组5头：空白对照组试验D组1头：肌注专用佐剂2ml,62日龄，攻毒TJ株,34日龄，分组免疫,31日龄，采血检测核定阴性猪,23日龄，采血检测确定阴性猪,免疫后1、3、5、7、14、21、28天采血检测,攻毒后1、3、5、7、14、21、28天采血检测,攻毒后至第28d试验猪死亡时间,3倍剂量TJ株攻毒：3105.0TCID50/头,无菌室内饲养，没有使用抗生素,2、“蓝定抗”细胞免疫特性研究,细胞因子检测,细胞亚型检测,IL-4(pg/ml)IFN-IL-18IL-12/IL-23P40,NK(个/ul)CD3+(T)CD3+CD4+CD8-(Th)CD3+CD4-CD8+(Tc+Ts)Th/(Tc+Ts),CD3+T细胞,CD3+CD4+CD8-（Th）,CD3+CD4-CD8+（Tc+Ts）,CD3+CD4-CD8-,CD3+CD4+CD8+,Th0Th1Th2,T细胞亚群的分布,CD3+CD4+CD8-（Th）细胞增殖与分化,细胞因子,检测方法：ELISA,IL-4IFN-IL-18IL-12/IL-23P40,invitrogen(2.0pg/ml)invitrogen(2.0pg/ml)invitrogen(23.1pg/ml)R&D(9.0pg/ml),细胞因子检测,*,#,#,IFN-浓度变化曲线,*,#,#,#,IL-18浓度变化,IL-12/23P40浓度变化,#,*,细胞因子检测总结,专用佐剂组，更多猪产生特异性细胞免疫力，攻毒后，更少猪产生炎症反应免疫7天后，专用佐剂组，80%的猪产生IFN-，普通稀释液组，40%的猪产生IFN-专用佐剂组，IL-18产生速度快（37天），浓度高，适时消减专用佐剂组IL-12/23P40浓度变化平稳，表明能维持稳定的细胞免疫状态,细胞亚型检测,细胞亚型,NK(个/ul)CD3+(T)CD3+CD4+CD8-(Th)CD3+CD4-CD8+(Tc+Ts)Th/(Tc+Ts),检测方法,方法：流式细胞技术FCM：BDFASCalibur试剂：CD8aPE、CD3FITC、CD4-AlexaFluor647、绝对计数管：BD公司,机体的抗感染免疫因素,*,*,NK细胞浓度变化,*,T细胞浓度变化,*,Th细胞浓度变化,*,Th细胞浓度变化,*,*,Tc