医学生毕业论文答辩.ppt

氯吡格雷抵抗的血小板功能差异与遗传多态性研究,实习生河北北方学院周杏,指导老师309医院检验科孙彬,主要内容,一、研究背景二、研究目的三、技术路线及试验方法四、研究特色与创新之处五、预期结果,研究背景,1.处理已形成的血栓开通闭塞的血管恢复冠脉灌注溶栓治疗PCI治疗,2.防止新的血栓形成防止血栓扩展缩小损伤范围抗凝治疗抗血小板治疗,CHD特别是ACS的治疗原则,抗血小板药物抵抗,治疗反应性差异,血小板旁路途径活化,临床危险因素,基因多态性,依从性差/剂量不足,药物相互作用,药物的生物利用度,外部因素,内部因素,抗血小板药物抵抗的可能机制,研究内容,氯吡格雷的作用机制,氯吡格雷,氯吡格雷,无活性羧酸衍生物,2-氧-氯吡格雷,ADP对腺苷酸环化酶的抑制,磷酸蛋白（VASP）的磷酸化,纤维蛋白受体（GPb/a）活化,P2Y12受体,血小板聚集,酯酶,小肠吸收（50%）,肝内代谢（CYP2C19、CYP1A2、CYP2B6）,肝内代谢（CYP3A4/5、CYP2B6、CYP2C19、CYP2C9）,+,-,-,肝细胞色素P450酶（CYP450）,吸收环节：ABCB1代谢环节：CYP3A4、CYP3A5、CYP2C9、CYP2C19受体环节：P2Y12、GPb/a,影响氯吡格雷疗效相关基因,一、遗传多态性与氯吡格雷疗效差异的相关性,相关性,权重,体系,个体化,二、评价各种血小板功能检测技术，建立行业标准,TEGPM,PAF-100,PL-11,sc-2000,VerifyNow,血小板功能检测方法的比较,血小板功能检测在血栓病治疗、预防上具有重要价值；但现有的血小板功能检测方法、质量及标准不足以满足临床需要。-实验室检测诊断对抗血小板治疗的效能专题研讨会，2011年7月，美国亚特兰大，由AACC与美国心脏病学会联合举办,PL-11血小板功能分析仪检测原理,PL-11血小板分析仪采取“自动连续检测法”方法，直接对全血中血小板原始数量检测后，继续对加入诱聚剂后血小板数量进行连续计数检测，通过对比加诱聚剂前血液中血小板数量与加入诱聚剂后血小板数量的变化及血小板下降的速度，评价分析PL-11功能运用价值，建立行业标准。原始血小板数-聚集后最低血小板数100=MAR%原始血小板数*（原始血小板数-聚剂后最低血小板数=聚集的血小板数量）,sc-2000血小板聚集测试仪原理,本仪器采用光电比浊法测试血小板聚集:在特定的连续搅拌条件下，在富血小板血浆(PRP)中加入诱导剂，血小板发生聚集，PRP的透光度增高或浊度下降。将光浊度的变化转换为电讯号的变化，从而计算出血小板的聚集率。搅拌方式采用国际先进的磁棒搅拌方式。计算公式如下:PPP光电电压值-实测光电电压值聚集率=(1）100%PPP光电电压值-PRP光电电压值,*（PPP即贫血小板血浆）,技术路线及研究方法,技术路线,目的基因选择，引物设计,行PCI术的冠心病患者,血小板功能检测评估患者应用氯吡格雷后的血小板功能状态（低下or正常）,提取全血基因组,-测序*PCR最佳反应条件的建立*患者遗传多态性分析,缺血事件发生情况：致死或非致死性心肌梗死、急性或亚急性血栓（支架内再狭窄）、需要再次住院治疗的不稳定心绞痛、脑卒中,*评估基因多态性与氯吡格雷疗效的相关性，建立血栓性疾病抗血小板药物治疗的疗效的评估体系。*评价血小板功能检测技术的优缺点，选择最优技术，并建立行业标准。,诊断标准、纳入标准、排除标准,同一标本先进行血小板功能检测，再进行基因分析,标本采集,病例资料采集,*一般资料*实验室指标*冠脉照影结果*PCI手术情况,患者临床特征对TEG检测结果的相关性,随访6个月,随访6个月,随访6个月,不同临床类型的CHD患者的临床特征分析,血小板功能与基因多态性的相关性,血小板功能检测的同一标本,提取全血基因组,（反应条件的优化）,基因测序,多态性与缺血事件的相关性,研究方法,DNA,PCR,研究特色与创新之处,（1）在国内外的研究中，首次同时针对影响氯吡格雷疗效的吸收环节、代谢环节和受体环节的3个环节7个目的基因进行了遗传多态性研究，分析各目的基因对氯吡格雷疗效的影响权重，并考虑了多基因联合多态性的影响；（2）国内外首次探索建立一个以遗传多态性为核心，综合考虑患者其它临床信息，通过计算危险分数，评估患者氯吡格雷疗效的评价体系；（3）PL-11型血小板分析仪是最新的血小板功能检测技术，该仪器采取“自动连续检测法”方法，