（动物遗传育种与繁殖专业论文）家猪、野猪CAPN家族4个基因的克隆、表达模式和多态性研究.pdf

摘要 钙蛋白酶( c a l p a l n ) 是一种钙激活中性半胱氨酸内肽酶，在生物体内具有重要功能，在 神经发育、肌肉生长、信号转导、细胞凋亡及膜蛋白融合等方面起着重要的作用。c a l p a i n 家 族一方面与肌肉的生长和发育密切相关，能够参与成肌细胞的融合和分化，降解肌原纤维蛋 白，对肌肉生长、瘦肉率的提高有重要影响：另一方面在动物宰后肌肉蛋白质水解引起的肉 的嫩化中发挥重要作用，是宰后肉嫩化的基本酶类，所以该家族是与家畜重要经济性状密切 相关的酶。本研究以人鼠和牛的c a p n 基因为基础，通过比较基因组学和生物信息学等方 法首次克隆了猪c a p n 7 c a p n l 0 基因的e d n a 序列和c a p n i c a p n 3 、c a p n 7 基因的部 分基因组d n a 序列：采用r t - p c r 方法研究了这4 个基因的时空表达规律：并且以野猪、 民猪、大白、长白、杜洛克、野家杂种猪等为研究对象，采用测序、p c r s s c p 和p c r r f l p 等方法检测它们的多态性，探讨不同基因型在种间的分布规律。主要研究结果如下： 1 采用同源克隆、电子克隆和r a c e 相结合的方法首次克隆了家猪和野猪c a p n 7 基因 的e d n a 序列，并采用生物信息学方法对其编码的多肽链进行了结构分析和功能结构域查找。 猪c a p n 7 编码区长2 4 4 2b p ，编码8 1 3 个氨基酸。 2 采用电子克隆和r a c e 相结合的方法首次克隆了家猪和野猪c a p n i o 基因e d n a 序 列，并采用生物信息学方法对其编码的多肽链进行了结构分析和功能结构域查找。家猪和野 猪各得到两个变异剪接体，变异体i 的编码区长2 0 0 4b p ，编码6 6 7 个氨基酸，变异体2 编 码区长1 9 2 3b p ，编码6 4 0 个氨基酸。 3 首次克隆了家猪c a p n i 、c a p n 3 、c a p n 7 部分基因组d n a 序列。 4 半定量r t - p c r 方法检测了c a p n i 基因的表达特性，结果表明c a p n l 基因在出生、 3 、6 、9 、1 2 月龄猪的胃、肾、脾、肺、心、肝、大肠、小肠、子宫等组织中都表达；在野 猪的胃、肾、脾、肺、心、肝、大肠、小肠、子宫、性腺、肌肉、脂肪组织中都表达；大白 猪同一生长时期腿肌和背肌中的表达不存在差异；9 、1 2 月龄大白猪背最长肌中的表达量显 著低于出生到6 月龄猪。 5 半定量r t - p c r 方法检测了c a p n 7 基因的表达特性，结果表明c a p n 7 基因在出生、 3 、6 、9 、1 2 月龄猪的胃、肾、脾、肺、心、肝、大肠、小肠、子宫等组织中都表达：在野 猪的胃、肾、脾、肺、心、肝、大肠、小肠、子宫、性腺、肌肉、脂肪组织中都表达：大白 猪同一生长时期腿肌和背肌中的表达不存在差异：1 2 月龄大白猪背最长肌中的表达量晟高。 6 半定量r t - p c r 方法检测了c a p n i o 基因的表达特性，结果表明c a p n i o 基因在出生、 3 、6 、9 、1 2 月龄猪的胃，肾、脾、肺、心、肝、大肠、小肠、子宫等组织中都表达；在野 猪的胃、肾、脾、肺、心、肝、大肠、小肠、子宫、性腺、肌肉、脂肪组织中都表达：大白 猪同一生长时期腿肌和背肌中的表达不存在差异；在1 5 日龄、9 月龄和1 2 月龄大白猪背最 长肌中表达量最高。 7 半定量r t - p c r 方法检测了c a p n 3 基因在大白猪中的表达特性，结果表明c a p n 3 基 东北农业大学农学博士学位论文 因只在胃和骨骼肌中表达；同一生长时期腿肌和背肌中的表达不存在差异：在2 1 日龄、6 月 龄猪的背最长肌中表达量最高在7 日龄猪中表达量最低。 8 竞争性r t - p c r 方法检测了c a p n l 0 基因两个变异体在大白猪中的组织表达情况，结 果表明，在所检测的各种组织内变异体l 在m r n a 水平的表达量均明显高于变异体2 。 9 采用p c r s s c p 方法在c a p n l 基因上共寻找到1 7 个s n p s ，其中1 2 个位于外显子， 5 个位于内含子，外显子上的突变有4 个是错义突变。群体遗传学分析表明在各多态位点 上，大白猪与野猪、民猪间不同基因型的分布都存在着极显著的差异( p 0 0 1 ) ，而野猪和民 猪之间除了s l 引物3 种基因型的分布存在显著差异外( 0 0 1 p o 0 5 ) ，其他引物上差异不显 著( p 0 0 5 ) 。 1 0 采用直接测序的方法在c a p n i 基因3 u t r 寻找到7 个s n p s ，p c r r f l p 方法分析 了其中两个引起酶切位点增减的突变在东北民猪、大白、杜洛克、野猪及野家杂种猪等5 个 品种( 品系) 中的分布，结果表明：在这两个多态位点，基因型的分布都与品种( 品系) 存 在着极显著的关联( p o 0 1 ) 。 1 1 采用直接测序的方法在c a p n l 基因的内含子7 寻找到4 个s n p s ，其中3 个引起了 酶切位点的变化，p c r r f l p 分析了这3 个点突变在东北民猪、大白、长白、杜洛克、野猪 及野家杂种猪中的分布，结果表明在n a l i i 多态位点，基因型在品种( 品系) 间的分布都存在 着极显著的差异( p 0 0 1 ) ；s t ui 位点只在民猪中检测到三种基因型；h i n fi 位点只在野猪 中检测到三种基因型。 1 2 采用直接测序的方法在c a p n l 基因的内禽子2 1 发现1 个e c o r i i 酶切多态位点，群 体遗传学分析表明各基因型在品种( 品系) 间的分布都存在着极显著的差异( j p 0 0 1 ) 。 1 3 p c r s s c p 检测发现民猪c a p n 3 基因外显子1 与g e n b a n k 上公布的序列存在着较大 的差异，在民猪中所检测到的2 种等位基因间存在着2 个碱基的变异。 1 4 对c a p n 3 基因内含子区h i n t i i 多态位点的p c r - r f l p 分析表明基因型的分布在野 猪和其他品种( 品系) 问存在着极显著的差异( j p 0 0 5 ) 。 1 5 p c r s s c p 检测发现民猪c a p n i o 基因的外显子4 上存在3 个s n p s 。 关键词：猪；野猪；c a p n ：克隆；r t - p c r ：竞争性r t - p c r ：p c r - s s c p ：p c r - r f l p t h ec l o n i n g ，e x p r e s s i o np a t t e r na n d p o l y m o r p h i c a n a l y s i so nf o u rg e n e sf r o mc a p nf a m i l yo f p o r c i n e a b s t r a c t c a l p a i n s w h i c hh a v em a n yp h y s i o l o g i c a l f u n c t i o n ss u c h s i g n a lt r a n s d u c t i o n ，n e w e d e v e l o p m e n t , m u s c l eg r o w t h ，a p o p t o s i sa n dm e m b r a n ef u s i o n ，a r cc y t o p l a s m i cc y s t e i n ep r o t e a s e s r e q u i r i n gc a l c i u mi o n s f o r a c t i v i t y c a l p a i n sp l a ya ni m p r o t a n tr o l e i nm u s c l eg r o w t ha n d d e v e l o p m e n t , m y o b l a s tf u s i o na n dd i f f e r e n t i a t i o n ，a n dt h e ya r et h eb a s i ce n z y m e st h a tl e a dt ot h e t e n d e z a t i o no fm e a tb yc l e a v i n gm y o f l b r i l l a rp r o t e i ni n c l u d i n gt i t i n , n e b u l i na n dd e s m i n 1 1 1 i s s t u d yw n qd e s i g n e dt oc l o n et h ee d n aa n dp a r t i a lg e n o m i cs e q u e n c e so fp i gc a p n l ，c a p n 3 , c a p n 7a n dc a p n l 0g e n e sb a s e do nt h es e z l u e n c e so fh u m a n ，r a t , m o u s ea n de a t t i ec a p ng e n e s b y c o m p a r a t i v eg e n o m i c s a n db i o i n f o r m a t i c sa p p r o a c h e s ；t o i n v e s t i g a t e t h e e x p r e s s i o n c h a r a c t e r i s t i co f t h e s eg e n e sb yr t - p c r ；t od e t e c tt h ep o l y m o r p h i s m so f t h e mb yd n as e q u e n c i n g , p c r s s c pa n dp c r r f l pm e t h o d s t h em a i nm s u l t sa r ea sf o i l o w s ： 1 t h ee d n as e q u e n c e so fd o m e s t i cp i ga n dw i l db o a rc a p n 7g e n e sw e mc l o n e db y h o m o l o g o u sc l o n i n g , i ns i l i c oc l o n i n ga n dr a c em e t h o d s t h er e s u l t ss h o w e dt h a tc o d i n gr e g i o n o f p i g c a p n 7 9 e n e i s c o m p o s e do f 2 4 4 2b p e n c o d i n g8 1 3 a a 2 t h ee d n as e q u e n c e so fd o m e s t i cp i ga n dw i l db o a rc a p n l 0 萨n e sw e r ec l o n e db y n s i l i c oc l o n i n ga n dr a c em e t h o d sa n dt w ot r a n s c r i p tv a r i a n t sw e ro b t a i n e d t h er e s u l t ss h o w e d t h a tc o d i n gr e g i o no f p i gc a p n i ot r a n s c r i p tv a r i a n tli sc o m p o s e do f 2 0 0 4b pe n c o d i n g6 6 7a a ， w h i l ep i g c a p n i o t r a n s c r i p tv a r i a n t2 i sc o m p o s e do f l 9 2 3b d e n c o d i n 9 6 4 0 a a 3 t h ep a r t i a lg e n o m i es e q u e n c e so f p i gc a p n l ，c a p n 3a n dc a p n 7g e n e sw e r ec l o n e d 4 1 1 l ee x p r e s s i o nc h a r a c t e r i s t i co fc a p n lg e n ew a si n v e s t i g a t e db yr t - p c r 1 1 r e s u l t s s h o w e dt h a tt h ec a p n l g e n ee x p r e s s e di ns t o m a c h ，k i d n e y , s p l e e n , l u n g , h e a r t , l i v e r , l a r g ei n t e s t i n e ， s m a l li n t e s t i n ea n du t e r u so fy o r k s h i r ea tt h ea g eo fb i r t h t h r e e m o n t h ，s i x - m o n t h ，n i n e - m o n t ha n d t w e l v e m o n t h ；e x p r e s s e di na l ld e t e c t e dt i s s u e sf r o mw i l db o a r t h e r ei sn os i g n i f i c a n td i f i e r e n e e b e t w e e nt h i g hm u s c l ea n di o n g i s s i m u sa tt h es a m eg r o w i n gp e d o d t h ee x p r e s s i o nl e v e li n i o n g i s s i m u so f y o r k s h i r ea tn i n e - m o n t ha n dt w e l v e - m o n t ha r es i g n i f i c a n t l yl e s st h a nt h a tf r o mb i r t h t os i x m a n t h 5 t h ee x p r e s s i o nc h a r a c t e r i s t i co fc a p n 7g e n ew a si n v e s t i g a t e db yr t - p c r t h er e s u l t s s h o w e dt h a tt h ec a p n 7 g e n ee x p r e s s e di ns t o m a c h , k i d n e y , s p l e e n , l u n g , h e a r t , l i v e r , l a r g ei n t e s t i n e ， s m a l ii n t e s t i n ea n du t e r u so fy o r k s h i r ea tt h ea g eo fb i r t h ，t h r e e - m o n t h , s i x - m o n t h ，n i n e - m o n t ha n d t w e l v e m o n t h ；e x p r e s s e di na l ld e t e c t e dt i s s u e sf r o mw i l db o a t t h e r ei s1 1 0s i g n i f i c a n td i f i e l n c c 东北农业大学农学博士学位论文 b e t w e e nt h i g hm u s c l ea n di o n g i s s i m u sa tt h es a m eg r o w i n gp e r i o d t h ee x p r e s s i o nl e v e lw a st h e m o s ti ni o n g i s s i m u so f y o r k s h i r ea tt w e l v e - m e n t h 6 t h ee x p r e s s i o nc h a r a c t e r i s t i co fc a p n l 0g e n ew a si n v e s t i g a t e db yr t - p c r t h er e s u l t s s h o w e dt h a tt h ec a p n i og e n ee x p r e s s e di ns t o m a c h ，k i d n e y , s p l e e n ，l u n g ，h e a a ，l i v e r l a r g e i n t e s t i n e ，s i n a i li n t e s t i n ea n du t e r u so fy o r k s h i r ea tt h ea g eo fb i r t h ，t h r e e - m o n t h s i x m o n t h n i n e - m o n t ha n dt w e l v e - m o n t h ；e x p r e s s e di na l id e t e c t e dt i s s u e sf r o mw i l db o a r t h e r ei sn o s i g n i f i c a n td i f f e r e n c eb e t w e e nt h i g hm u s c l ea n di o n g i s s i m u sa tt h es a m eg r o w i n gp e r i o d t h e e x p r e s s i o nl e v e l w a st h em o s ti n i o n g i s s i m o so fy o r k s h i r ea tf i f t e e n d a y , n i n e - m o n t ha n d t w e l v e - m o n t h 7 t h ee x p r e s s i o nc h a r a c t e r i s t i co fc a p n 3g e n ew a si n v e s t i g a t e db yr t - p c r t h er e s u l t s s h o w e dt h a tt h ec a p n 3g e n ee x p r e s s e do n l yi ns t o m a c ha n dm u s c l e t h e r ei sn os i g n i f i c a n t d i f f e r e n c eb d h v e e nt h i g hm u s c l ea n di o n g i s s i m u sa tt h es a m eg r o w i n gp e r i o d t h ee x p r e s s i o nl e v e l w a st h em o s ti ni o n g i s s i m u so f y o r k s h i r ea tt w e n t y - o n e - d a y , s i x - m o n t ha n dt h el e a s ta ts e v e n - d a y 8 t h ee x p r e s s i o nc h a r a c t e r i s t i co fc a p n i ot w ot r a n s c d p tv a r i a n t sw e r ei n v e s t i g a t e db y c o m p e t i t i v er t - p c r t h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h ee x p r e s s i o nl e v e lo ft r a n s c r i p tv a r i a n t lw a s h i g h o rt h a nt h a to f t r a n s c r i p tv a r i a n t2i na l lt i s s u e sd e t e c t e d 9 1 7s n p sw e r ef o u n di nc a j d _ _ v ，g e n ob yp c r - s s c pm e t h o d 1 2o f w h i c hw e r ei ne x o n sa n d o t h e r sw o r ei ni n t r o n s a n dt h e r ew e r e4m i s s a n s e s p o p u l a t i o ng e n e t i c sa n a l y s e ss h o w e dt h a t i n e a c hp o l y m o r p h i cl o c u s ，t h e r ew e r es i g n i f i c a n td i f f e r e n c ea m o n gy o r k s h i r e ，m i np i ga n dw i l db o a r i nt h ed i s t r i b u t i o no f g e n o t y l p e s ( p o 0 1 ) ，w h i l en os i g n i f i c a n td i f f e r e n c ew e r ef o u n db e t w e e nm i n p i ga n dw i l db o a re x c e p tt h el o c u sd e t e c t e db yp r i m e rs i 1 0 7s n p sw e r ef o u n di n3 u t ro fc a p n lg e n eb yd n as e q u e n c i n ga n dp c r - r f l p m e t h o dw a sd e v e l o p e db a s e do nr e s t r i c t i o ne n z y m e 胁时i ，a w nit os c r e e nt h ep o p u l a t i o n t h e r e s u l t ss h o w e dt h a tt h ed i s t r i b u t i o no f g e n o t y p e sa m o n gm i np i g , y o r k s h i r e ，d u r o c ，w i l db o a ra n d c r o s sb r e dw e r es i g n i f i c a n td i l y e r e n c ei nt h et w ol o c i ( p 0 0 1 ) 1 1 4s n p sw e r ef o u n di ni n t r o n7o fc a p n ig e n eb yd n as e q u e n c i n ga n dp c r r f l p m e t h o dw a sd e v e l o p e db a s e do nr e s t r i c t i o ne n z y m eh i n fi a w nia n ds t uit os c r e e nt h e p o p u l a t i o n 1 1 l er e s u l t ss h o w e dt h a ta tt h e 囟s i t e t h ed i s t r i b u t i o no fg e n o t y p e sa m o n gm i np i g , y o r k s h i r e ，d u r o c ，w i l db o a ra n dc r o s sb r e dw e r es i g n i f i c a n td i f f e r e n c e ( p o 0 1 ) ，a n dt h r e e g e n o t y p e sw e r ef o u n do n l yi nm i np i ga tt h es t ui a n d 胁盯is i t e s 1 2 1s n pw a sf o u n di ni n , o n2 1o fc a p n lg e n eb yd n as e q u e n c i n ga n dp c r r f l p m e t h o dw a sd e v e l o p e db a s e do nt h er e s t r i c t i o ne n z y m ee c o ri it os c r e e nt h ep o p u l a t i o n t h e r e s u l ts h o w e dt h a tt h ed i s t r i b u t i o no fg e n o t y p e sa m o n gm i np i g ，y o r k s h i r e ，d u r o c ，w i l db o a ra n d c r o s sb r e dw e r es i g n i f i c a n td i f i f e r e n c e ( p o 0 1 ) 13 t h e r ew e r em a n yd i f f e r e n c e si no x e nlo fc a p n 3g e n eb c t w c e nm i np i ga n dt h a tf r o m g e n b a n l2s n p sw e r ef o u n di nm i np i gb yp c r - s s c pm e t h o d 1 4 p c r r f l pa n a l y s i so nt h ep o l y m o r p h i cl o c u sl e a d i n gt ot h ec h a n g eo fh n oi i r e c o g n i t i o ns i t ei ni n t r o no f c a p n 3g e n es h o w e dt h a tt h ed i s t r i b u t i o no f g e n o t y p e sw e r es i g n i f i c a n t a b s t r a c t d i f f e r e n c e ( p 磷脂酰肌醇，显示出带负电的磷酸极性头部对激活起重要作用( s a i d oc ta l ， 1 9 9 2 ) ，由此推测当磷酸根数目大于2 个，其激活作用应更强。b i o r e 等( 1 9 9 0 ) 观察到，在 上皮生长因子( e g f ) 的刺激下，分布在细胞膜上的磷脂酰肌醇激酶与受体形成复合体，促 使局部含多聚磷酸肌醇高盐区的形成，以及胞内局部c a 2 + 浓度提高，很可能起到对特定部位 c a l p a i n 的激活作用。 4 其它影响因素 c a l p a i n 的活性还受离子强度、p h 值，底物等因素的影响。在低p h 值和高离子强度作用 下，钙蛋白酶的作用有所下降。随着p h 值的增加p - c a p a i n 水解活性增加：随着离子强度 的增加。钙蛋白酶的水解活性降低，例如p - c a l p a i n 在高离子强度时对肌联蛋白( t i t i n ) 的分 解能力低子其在低离子强度作用下的能力。p h 或离子强度的改变可能导致钙蛋白酶构型的 变化，这一变化会引起它对水亲和力的增加或酶类的聚合。同样的，d h 或离子强度的变化 可以导致底物蛋白构型的变化，致使它们对- e a l p a i n 的敏感度下降。底物存在时，c a l p a i n 的活性下降慢，且不同底物作用下e a l p a i n 的话性表现会有所不同( m o h a m m a dc ta l ，1 9 9 2 3 。 钙蛋白酶是半胱氨酸蛋白酶。半胱氨酸残余物易于被氧化。因此氧化可能致使钙蛋白酶 钝化。事实上，有许多证据都指出氧化可能会可逆地阻止- c a l p a i n 催化的蛋白水解，但却不 能抑制酶类自溶( g u t t r a a n nc ta l ，1 9 9 7 ) 。 1 1 2 钙蛋白酶家族的其他戍员 与传统钙蛋白酶结构域i i 的序列同源性大于2 0 2 5 的基因都可以划归为钙蛋白酶家 族( s o r i m a c h ie ta l ，2 0 0 1 ) ，迄今为止。在人中已克隆鉴定了1 4 个钙蛋白酶基因( 表1 1 ) ， 其中两个的编码产物是3 0 k d a 小亚基，另外1 2 个都是8 0 k d a 大亚基编码基因的同源序列。 这些钙蛋白酶根据结构特点分为典型的钙蛋白酶和非典型的钙蛋白酶典型的钙蛋白酶都 含有i - c a l p a i n 和m c a l p a i n 中发现的4 个结构域( i - i v ) ，包括c a l p a i n l ，2 ，3 ，8 ，9 ，l l ， 1 2 和1 3 ，其中c a l p a i n l ，2 和9 能和3 0k d a 的小亚基形成异源二聚体，而c a l p a i n 3 ，8 1 2 7 东北农业大学农学博士学位论文 尽管含有结构域r v ，却不能与3 0k d a 小亚基相互作用。非典型的钙蛋白酶都没有结构域， 并且其它3 个结构域也存在缺失或替换现象，因此不能和小亚基形成二聚体，e a l l 3 a i n 5 ，6 ， 7 ，8 b ，l o 和】5 都是非典型的钙蛋白酶( 图1 - 6 ) 。根据钙蛋白酶基因的表达情况，又把它 们分为普遍存在的钙蛋白酶和组织特异的钙蛋白酶。其中e a l p a i n l ，2 ，5 ，7 。1 0 ，1 3 和1 5 是普遍存在的钙蛋白酶，在机体内广泛表达；c a i ，a i n 3 ，6 ，8 ，9 ，1 1 和1 2 是组织特异的钙 蛋白酶，只在特定的组织内表达，如c a l p a i n 3 在骨骼肌中特异表达( s o r i m a e b ic ta l ，1 9 8 9 ) e a l p a i n 8 在平滑肌内特异表达( s o r i m a c h ie ta l ，1 9 9 3 ) e a l p a i n 9 在消化道内特异表达。1 4 种 钙蛋白酶的详细情况见表l 一1 。 不同类型c a l p a i n 间的差异主要表现在大亚基n 末端序列长度和调节域结构的不同以及 钙结合域的有无，它们都含有保守的活性位点，即e a l p a i n 蛋白水解域。但并不是所有的 c a l p a i n s 都具有蛋白酶活性，如e a l p a i n 6 的活性c y s 被l y s 取代，破坏了半胱氨酸蛋白酶家 族所特有的催化三联体，失去了催化降解其他蛋白质的活性，只是作为蛋白质在机体内发 挥作用。有些钙蛋白酶还没有在蛋白质( 酶) 水平上进行充分研究，也不知道是否具有蛋 白酶活性，如e a l p a i n 7 和1 5 。 c - d l o a l n1t “c l 嘲努 蛳；彰潮哪；_i j -l - - - - - c ” 日n c _ i 叩l n2 mcl目疆；f 缸钐8 9 瞳敲ti i r 、-i - - -i c y -h l c ：叫o a i n3 _(pe4)髓f胄_；5 l l 并；： i s 畦j b 、l i l- 瞄一ii - - - - i c y n i = m l o i m l i l3 b0 - 0 8 2 ) 嘲j ， l 描：j。 1 1 1 1 ,i - -旧- - - c y 。rl te 邮 c e l p a l n “( n c i - 2 ) 1 日；绷露钐、l 城、i i _ - - c y * - n c d p 刮n ( n e t - 4 )圈；4 l 每，；， ：r t 畦、il 脚t - - - - c - n c o p n 1 1圈j ；i 转j ；： l l hl 。i h -i - l - l - e “ cp圳n2目曩务j i 辞舅t i b| ￥- - - - - - n c 自i p a i n 1 ：3 1 n d 抽豳；l 符j 务。 b ；_ l _ “- - - - _ c p n b l c p n 3 似o p h 恤- s u b , j n l i t )l _- - - - c , p n 8 2 1 j o k - 2 ，c 自l l p a l r , 目_ u n n2 ，口- - - - - h “ c d 。口- n5 ( h i p l y , - 3 )_：l 籀藓棼 n b j _ ，曲：，l ti 1 1 1 “ c , , i i i t 3 a i nb ( c a n p x ) _f 尊 彭移n h 、l j 血r t i n c , l e i i l l n7 ( p i i b i - i )：燃g毡、1p b h r f i f l cvi - j n c 叫p hab(ncl-ze目? 鹈彰箩 1 i b l i 4 - o c b l 呻i n1 0 f 簟蟛；： t i b | ，1 1 1 1 | r 1 1i p 叫 n c 刮p 9 h 5 8 0 l h i 目日z n_ 日 s o l t i 图1 6 人钙蛋白酶家族成员的结构 f i g 1 - 6d o m a i ns t r u c t u r e so f h u m a ne a l p a i nf a m i l ym e m b e r s 8 表1 1 人中发现的钙蛋白酶 t a b 1 it h ec a l p a i n si d e n t i f i e di nh u m a n 擘白酶基因 别名布一数翟与善 c a l p a i n l i s s u e a m i n oa c i d g e n e o t h e r n l f f l c $ chrproteasea s s o c i a t i o n p r o t e i nd i s t r i b u t i o nr e s i d u e s a c t i v i t y w i t h3 0k c a l p a i n ic a p n i 岬帅i 孵u b i q i l j 咖 l l q l 2 7 1 4 + s u b u n i t - 1 3 i c a l p 矗i 茈 c a p n 2 m 哪i p a i “l 晔 c a l p a i n 3 c a p n 3 c a l p a i n 5 c a p n 5 s u b u n i t p 9 4 ， n c l - i h 1 r a - 3 n c l 3 c a l p a i n 6 c a p n 6c a n p x c a l p a i n 8 c a p n 8n c l - 2 c a l p a i n 9 c a p n 9 n c l - 4 c a l p a i n l 0capnl0 c a l p a i n l i c a p n i l c a l p a i n l 2 capnl2 c a l p a i n l 3 capnl3 c a l p a i n l 4capn|4 c _ a p a i n l 5 s o l hs o l h c a l p a i ns m a l l c a p n s ic a p n s is u b u n i t , 3 0 k , c a p n 4 c a p n s 2c a p n s 2 c a l 脚删l u b i q u i t o u si q 3 2 - 4 1 s k c i c t a l m i c 5 u b i q u i t o u s1 l q l 4 p l a t e n t a , e m b r y o n i cx q 2 3 m t l s c l c $ u b i q u i t o u s3 p 2 4 s t o m a c h i q 3 2 - 4 i d i g t ：s t v e1 q 4 2 。l t r a c t 4 3 u b i q u i t o u s2 q 3 7 3 t c s l i s 6 p 1 2 h a i r f o l l i c l e 1 9 q 1 3 u b i q u i t o u s2 p 2 1 - 2 2 n d 2 p 2 1 - 2 2 u b i q u i t o u s 1 6 p 1 3 3 7 + + 8 2 l+ 6 4 0+ 引3 + 7 + 6 9 0 4 -+ u b i q u i t o u s1 9 q 1 3 2 6 8 u b i q u i t o u s 1 6 a 1 32 4 8 9 n d + n d + n d + h i d + n d + n d + n d n d n d n d n d n d + m 他 伽 仍 ， 嘶 1 1 2 1o a i p a i n 3 c a p n j 有两个变异剪接体c a p n 3 a ( p 9 4 )