（植物病理学专业论文）毛刺线虫科trichodoridae一些种群形态及分子系统学研究.pdf

研究生学号： 1 0 7 1 6 0 1 3 毛刺线虫科( t r i c h o d o r i d a e ) 一些种群 形态及分子系统学研究 论文评阅人： 答辩委员会主席： 答辩委员会成员： 论文答辩日期 m o r p h o l o g i c a la n dm o l e c u l a rp h y l o g e n yo ns o m e t r i c h o d o r i d a es p e c i e sa n dp o p u l a t i o n s b y x u q i n g l i ad i s s e r t a t i o n s u b m i t t e da sp a r t i a lf u l f i l l m e n to ft h er e q u i r e m e n t sf o r t h ed e g r e eo fd o c t o rw i t hm a j o ri np l a n tp a t h o l o g y l n z h e j i a n gu n i v e r s i t y s u p e r v i s o r ：p r o f j i n g w uz h e n g h a n g z h o u310 0 2 9 z h e j i a n g ，p e o p l e sr e p u b l i co fc h i n a a p r i l2 0 10 lill-，lii， l 一 i - ， i 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据 我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的 研究成果，也不包含为获得逝望盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。 与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 签字日期：年月日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解逝堑太堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙婆 盔堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印 或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。( 保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：导师签名： 签字日期： 年 月日 签字日期：年月 日 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 通讯地址： 电话： 邮编： 广 卜 l l l l 课题来源 国家自然科学基金( n o 3 0 8 7 0 2 7 4 ) 国家“十一五”科技支撑计划项目( 2 0 0 6 b a d 0 8 a 1 3 ) 致谢 本论文是在导师郑经武教授的悉心指导下完成的，从研究选题、实验设计、 结果分析到论文的撰写，都倾注了导师的大量心血。在五年的硕博学习期间，导 师不但在学习上亲加指导，而且在生活上也给与了无微不至的关怀。恩师渊博的 专业知识、严谨的治学态度、高度的敬业精神、兢兢业业、孜孜以求的工作作风、 平易近人的学者风范、无私奉献的精神令我终身难忘。他不但教会我如何做学问， 也教会我如何做人。恩师是“实实在在作人、踏踏实实做事”的楷模，他的身先 力行将鞭策我终身。值此论文完成之际，谨向导师致以最诚挚的谢意，感谢他无 私的帮助和大力的支持! 感谢中国农业科学院彭德良研究员、福建农林大学张绍升教授、云南农业大 学胡先奇教授及华南农业大学谢辉教授在样品采集时给予的便利；美国北卡州农 业部叶为民博士及天津进出境检疫局王金成先生惠赠的线虫样品。 感谢浙江大学农业与生物技术学院生物技术研究所提供的各项便利条件，使 本论文能够顺利地完成。 感谢本实验室的兄弟姐妹们，无论在实验方面给予的指导和帮助，还是生活 中的关心和鼓励，营造的团结互助的实验氛围使我能更加愉快的完成科研工 作这些温暖的点点滴滴将是我一生最美好的回忆! 也真心地祝愿你们的未来 更美好! 最后，要特别感谢我的父母，焉得谖草，言树之背，养育之恩，无以回报， 你们永远健康快乐是我最大的心愿。感谢所有支持我、关心我的亲人和朋友。 李戌清 2 0 1 0 年4 月于杭，i 1 华家池 目录 摘要i a b s t r a c t i v 第一章毛刺属及拟毛刺属线虫分类学研究进展1 1 1 毛刺属和拟毛刺属线虫的分类地位1 1 2 毛刺属和拟毛刺属线虫的形态学特征1 1 2 1 毛刺属线虫l 1 2 2 拟毛刺属线虫2 1 2 3 两属线虫的主要区别。2 1 2 4 属内种的鉴定依据。3 1 3 毛刺属和拟毛刺属线虫分类学研究概况3 1 3 1 毛刺属和拟毛刺属线虫分类发展简史3 1 3 2 毛刺属和拟毛刺属线虫形态学分类方法概述4 1 3 3 毛刺属和拟毛刺属线虫的种类及分布2 4 1 3 4 毛刺属和拟毛刺属线虫分子鉴定与分类方法概述2 8 1 4 毛刺线虫和拟毛刺线虫的危害3 0 1 - 4 - l 直接危害和间接危害3 0 1 4 。2 传播植物病毒的介体线虫3 0 1 5 我国毛刺属和拟毛刺属线虫分类学研究现状3 2 第二章材料与方法3 3 2 1 材料3 3 2 1 1 供试线虫3 3 2 1 2 试剂与仪器3 5 2 2 方法3 5 2 2 1 线虫的分离3 5 2 2 2 线虫的杀死、固定及制片3 5 2 2 2 1 临时玻片的制作3 5 2 2 2 2 永久玻片的制作3 6 2 2 3 形态学观察及数值测量3 7 2 2 4 线虫d n a 的提取 3 7 2 2 5p c r 扩增3 7 2 2 61 8 sr n a 基因中部分区段p c r 扩增引物及程序3 8 2 2 7i t si 区p c r 扩增引物及程序3 8 l 2 2 8i t s 2 区p c r 扩增引物及程序3 8 2 2 92 8 sr n a 基因中d 2 d 3 区p c r 扩增引物及程序。3 9 i 2 2 1o 琼脂糖凝胶电泳一3 9 2 2 1 lp c r 产物的纯化3 9 2 2 12p c r 纯化产物的克隆4 0 2 2 1 2 1 连接4 0 2 2 1 2 2 大肠杆菌d h5 a 感受态细胞的制备( c a c l 2 ) 4 0 2 2 1 2 3 转化4 0 2 2 1 2 4 碱裂解法提取质粒4 1 2 2 1 2 5 重组质粒的p c r 鉴定4 1 2 2 1 2 6 重组质粒的酶切鉴定4 l 2 2 1 3d n a 序列测定与分析4 2 2 2 1 4r f l p s 分析4 2 第三章毛刺线虫属部分种群形态及r d n a 分子特征4 3 3 1 南京毛刺线虫。4 3 3 1 1 南京毛刺线虫不同群体的形态学比较研究4 3 3 1 1 1 形态描述4 3 3 1 1 2 分布及形态测量值比较4 4 3 1 2 南京毛刺线虫1 8 sr n a 基因中部分区段、r d n a i t s l 区、r d n a i t s 2 区与 2 8 sr n a 基因中d 2 d 3 区的扩增及分析5 2 3 1 3 小结5 5 3 2 巴基斯坦毛刺线虫。5 5 3 2 1 巴基斯坦毛刺线虫不同群体的形态学比较研究5 6 3 2 1 1 形态描述5 6 3 2 1 2 形态测量值比较5 6 3 2 2 巴基斯坦毛刺线虫1 8 sr n a 基因中部分区段、r d n a i t s l 区、r d n a ，i t s 2 区与2 8 sr n a 基因中d 2 d 3 区的扩增及分析6 3 3 2 3 讨论6 6 3 3 雪松毛刺线虫6 6 ： 3 3 1 形态与分子特征描述6 7 3 3 2 雪松毛刺线虫不同地理群体形态测量值比较研究7 1 3 4 毛刺线虫新种：t r i c h o d o r u sn s p 。7 6 3 4 1 形态特征与模式产地7 6 3 4 1 1 形态测量值7 6 2 3 4 1 2 形态描述7 6 3 4 1 - 3 模式生境与寄主7 6 3 4 1 4 鉴定依据。7 7 3 4 21 8 sr n a 基因中部分区段、r d n a - i t s l 区、r d n a i t s 2 区与2 8 sr n a 基因中 d 2 d 3 区特征7 7 3 4 3 讨论8 2 第四章拟毛刺线虫属部分种群形态及r d n a 分子特征8 6 4 1 胼胝拟毛刺线虫8 6 4 1 1 胼胝拟毛刺线虫不同群体的形态学比较研究8 7 4 1 1 1 形态描述8 7 4 1 1 2 分布及形态测量值比较8 7 4 1 2 胼胝拟毛刺线虫1 8 sr n a 基因中部分区段、r d n a i t s l 区、r d n a i t s 2 区与 2 8 sr n a 基因中d 2 d 3 区的扩增及分析9 l 4 1 3 讨论9 2 4 2 肾形拟毛刺线虫9 6 4 2 1 肾形拟毛刺线虫不同群体的形态学比较研究9 6 4 2 1 1 形态描述9 6 4 2 1 2 分布及形态测量值比较10 0 4 。2 2 肾形拟毛刺线虫1 8 sr n a 基因中部分区段、r d n a i t s l 区、r d n a i t s 2 区与 2 8 sr n a 基因中d 2 d 3 区的扩增及分析10 0 4 2 3 j 、! 省。1 0 1 4 3 较小拟毛刺线虫10 3 4 3 1 较小拟毛刺线虫不同群体的形态学比较研究1 0 4 4 3 1 1 形态描述1 0 4 4 3 1 2 不同种群形态测量值比较。1 0 5 4 3 2 较小拟毛刺线虫1 8 sr n a 基因中部分区段、r d n a i t s l 区、r d n a i t s 2 区与 2 8 sr n a 基因中d 2 d 3 区的扩增及分析。1 0 8 4 3 3 小结1l l 第五章毛刺属和拟毛刺属线虫部分种群r d n a 分子系统发育分析11 2 + 5 17 种毛刺类线虫r d n a 不同区段的序列长度差异11 2 5 2 基于1 8 s r n a 基因中部分区段的系统发育分析1 1 2 5 3 基于r d n a i t s l 区的系统发育分析1 1 2 5 4 基于r d n a i t s 2 区的系统发育分析1 1 3 5 5 基于2 8 sr n a 基因中d 2 d 3 区的系统发育分析1 1 3 3 5 6d 、结11 8 第六章植物寄生线虫1 8 sr r n a 基因多样性研究1 1 9 6 1 材料：1 2 0 6 1 1 供试线虫1 2 0 6 1 2 试剂与仪器1 2 0 6 2 方法。1 2 6 6 2 1d n a 的提取。1 2 6 6 2 2 用引物n e m f l 、1 8 s 扩增1 8 sr n a 区1 2 6 6 2 3 用引物a 、1 8 s 扩增1 8 sr n a 区1 2 6 6 2 41 8 sr n a 区p c r 产物的纯化、克隆和测序1 2 6 6 2 5 序列比对和系统发育树的构建1 2 6 6 3 结果。1 2 7 6 3 1 各引物对扩增片段长度1 2 7 6 3 2 基于n e m f l - 1 8 s 扩增所得1 8 s 区序列的系统发育分析。1 2 7 6 3 3 基于a 1 8 s 扩增所得1 8 s 区序列的系统发育分析1 2 8 6 4 讨论、1 31 参考文献1 3 2 附录a ：常用仪器1 4 3 附录b ：常用试剂1 4 3 附录c ：常用试剂的配置1 4 4 附录d ：常用缓冲液的配置1 4 6 4 摘要 毛刺属( t r i c h o d o r u sc o b b ，1 9 1 3 ) 和拟毛刺属( p a r a t r i c h o d o r u ss i d d i q i ，1 9 7 4 ) 线虫是 一类重要的植物外寄生线虫，可寄生于植物根部，影响根系生长，甚至引起根部生长停滞， 导致植物短粗根病。属内的许多种( 群体) 还是一些植物病毒的传播介体，对许多经济作物 如花卉、蔬菜、农作物、果树等都造成严重的经济损失，世界上许多国家和地区均将此类线 虫列为检疫对象。毛刺属和拟毛刺属线虫许多种群的形态特征极为相似，仅依赖形态学的分 类鉴定费时费力。本研究在对我国1 3 省市植物根围和比利时进境杜鹃上毛刺线虫样品形态 学及分子特征比较的基础上，报道了我国毛刺属、拟毛刺属主要种群的形态特征、分布和 r d n a 分子特征，主要研究结果如下： 1 通过对国内北京、山东、山西、河南、江苏、安徽、湖南、重庆、浙江、福建、云 南、海南和广东等1 3 省市及比利时进境杜鹃等植物根围1 5 4 6 份土壤样品的分离和鉴定发现： 6 3 的样品中有毛刺属、拟毛刺属线虫群体；总计在2 3 份样品中发现南京毛刺线虫( z n a n j i n g e n s i s ) 群体，在1 5 份样品中发现巴基斯坦毛刺线虫( zp a k i s t a n e n s i s ) 群体，在3 l 份样品中发现胼胝拟毛刺线虫( 户p o r o s u s ) 群体，在1 0 份样品中发现肾形拟毛刺线虫( 尸 r e n i f e r ) 群体，在8 份样品中发现较小拟毛刺线虫( 尸m i n o r ) 群体，分别占检测到毛刺线虫 和拟毛刺线虫种群总数的2 3 7 、1 5 5 、4 0 0 、1 0 3 和8 2 ，表明南京毛刺线虫、巴基 斯坦毛刺线虫、胼胝拟毛刺线虫是我国毛刺属和拟毛刺属线虫的优势种群，肾形拟毛刺线虫 和较小拟毛刺线虫是我国大陆首次较详细的系统报道。 在北京和浙江两省市的果园、桑园、观赏性花木等多年生植物根围分离到多个南京毛刺 线虫群体，其中该线虫北京群体检出率占北京样品采集总量的3 9 1 ，表明南京毛刺线虫是 北京市多年生植物根围植物寄生线虫优势种。通过对浙江群体与北京群体的形态及测量值比 较，我们发现不同地理群体间形态测量值差异很小，但北京美人梅( 1 2 9 ) 群体和水枸子( 0 8 8 ) 群体分别有2 条、1 条雄虫仅具l 枚腹中颈乳突。各群体1 8 sr n a 区扩增序列与g e n b a n k 登陆序列a j 4 3 9 5 7 9 、a j 4 3 9 5 8 0 相似百分比达到9 9 2 1 0 0 o 。对上述南京毛刺线虫群体 r d n ai t s l 区、i t s 2 区和2 8 sr n a 基因中d 2 d 3 区序列比较和酶切分析，结果显示三段序 列在南京毛刺线虫种内群体间都较为保守。 在海南、重庆、云南、福建4 省区的甘蔗、龙眼、荔枝等经济作物根围分离到1 5 个巴 基斯坦毛刺线虫群体，其中福建福州、厦门、漳州该线虫检出率占三地区样品采集总量的 2 0 6 ，福建群体占本研究中巴基斯坦毛刺线虫群体总量的8 0 ，显示巴基斯坦毛刺线虫是 福建果园毛刺线虫优势种。本文也是巴基斯坦毛刺线虫在海南和重庆的首次报道。巴基斯坦 毛刺线虫雄虫具3 枚腹中颈乳突，通常排泄孔位于c p 2 和c p 3 之间。但本研究中福建六群 体( 代码分别为1 0 8 、1 0 9 、1 1 4 、1 1 9 、1 2 1 、1 2 2 ) 雄虫分别有1 1 1 、1 5 4 、1 4 3 、1 5 4 、 1 5 4 、2 3 1 排泄孔位于c p i 与c p 2 之间。各群体1 8 sr n a 区序列相似度达到9 9 3 1 0 0 o ，且与g e n b a n k 登陆序列a j 4 3 9 5 8 1 、a j 4 3 9 5 8 2 相似度较高，为9 8 5 9 9 3 。对上 述巴基斯坦毛刺线虫群体r d n a 中i t s l 区、i t s 2 区和2 8 sr n a 基因中d 2 d 3 区序列比较 和酶切分析，结果显示三段序列在巴基斯坦毛刺线虫种内群体间都较为保守。 通过对中国( 浙江宁波和杭州) 、日本及韩国十七群体的形态测量值比较，明确了雪松 毛刺线虫雌、雄虫瘤针在种内群体间存在较大的变异，可根据瘤针长短将该种分为两组，即 长瘤针组和短瘤针组，且在中日韩三国报道的群体中均存在长、短瘤针组线虫。对浙江群体 1 8 sr n a 区、i t s i 区、i t s 2 区及2 8 sr n a 基因中d 2 d 3 区扩增产物酶切和测序比较显示四 段序列在雪松毛刺线虫种内群体间具有较高的保守性。 根据形态学和分子特征两方面特征记述了毛刺线虫一个新种( t r i c h o d o r u sa s p ) ，该新种 模式生境为浙江杭州枇杷根围，在d e c r a e m e r 与b a u j a r d ( 1 9 9 8 ) 的多歧检索表中代码分别 为：雌虫d 1 - c 1 一l 2 一k 2 - a l ( 2 ) - b 2 - e 3 f 2 ( 1 ) g 7 h 3 1 2 3 j 1 m 1 n 1 0 1 p 1 q 7 r 7 s 5 ， 雄虫f 3 - d 3 p 2 - a l ( 2 ) - b 2 c 1 - e 0 - g o - h 3 - 1 2 j 2 k 3 - l 1 m 2 7 n 1 0 5 。新种形态与z t r i c a u l a t u s 较为近似，但雌虫阴道形状、雄虫交合刺形态和长度等都存在明显的差异，在多 歧检索表中相应代码均不同( 雌虫新种为h 3 ，zt r i c a u l a t u s 为h 1 ；雄虫新种为c 1 m 2 7 ， zt r i c a u l a t u s 为c l 2 m 2 7 6 ) 。 2 在湖南、浙江、福建、云南、广东5 省区多种植物根围采集到3 1 个胼胝拟毛刺线虫 群体，我们从中选取数个群体密度较大群体进行了形态学研究。在各群体内均未发现雄虫， 而且在雌虫子宫内未见精子。通过各群体18 sr n a 区扩增片段序列与g e n b a n k 登陆序列比 较，我们发现胼胝拟毛刺线虫中国群体与g e n b a n k 中d q 3 4 5 5 2 4 相似百分比为9 9 7 1 0 0 o ，与a j 4 3 8 0 5 9 ( 巴西群体) 相似百分比为9 5 5 一- 9 6 1 。 报道了寄生于浙江杨梅、枫树和月季根部的肾形拟毛刺线虫群体形态和r d n a 序列信 息，这是肾形拟毛刺线虫在中国大陆的首次报道。通过与天津进出境检疫局截获的比利时杜 鹃群体比较，发现中国群体与比利时群体形态、测量值、r d n a 序列等信息均相近。 从形态学和分子特征等方面对采自中国海南、云南、福建蔬菜和果园根围的8 个较小拟 毛刺线虫群体进行了详细地记述。通过对上述群体与美国三群体及g e n b a n k 登陆a j 4 3 8 0 5 3 ( 葡萄牙) 、a j 4 3 8 0 5 4 ( 巴西) 、a j 4 3 8 0 5 6 ( 美国) 1 8 sr n a 区序列比较发现各群体间相似 度达到9 9 1 1 0 0 o 。这是较小拟毛刺线虫在中国大陆形态特征和地理分布的首次较详细 的系统报道。 3 基于1 8 sr n a 基因中部分区段、r d n a i t s i 区、r d n a i t s 2 区和2 8 sr n a 基因中 d 2 d 3 区序列的特征构建了本研究中毛刺属及拟毛刺属线虫不同种群系统发育树。首次报道 了雪松毛刺线虫、毛刺属新种及中华胞囊线虫的r d n a 信息。 4 分别利用n e m f l 1 8 s 和1 8 s 两对引物对垫刃目、滑刃目、矛线目、三矛目9 4 个 植物寄生线虫种群1 8 sr n a 基因区进行了p c r 扩增，用m e g a4 软件对所得序列构建系统 囊 发育树，研究发现引物对a 与1 8 s 作为上下游引物进行p c r 扩增所得片段的序列包含了构 建植物寄生线虫系统发育树的较多信息，在以后开展植物线虫系统发育研究中可广泛使用。 关键词：毛刺属( t r i c h o d o r u s ) 拟毛刺属( p a r a t r i e h o d o r u s ) ；r d n a ：南京毛刺线虫( z n a n j i n g e n s i s ) 巴基斯坦毛刺线虫( 7 7 p a k i s t a n e n s i s ) ；雪松毛刺线虫( zc e d a r u s ) ；毛刺线虫 新种( t r i e h o d o r u sn s p ) ；胼胝拟毛刺线虫( pp o r o s u s ) ；肾形拟毛刺线虫( 尸r e n i f e r ) ；较 小拟毛刺线虫( 只m i n o r ) ；p c r r f l p ：系统发育分析：分类；鉴定 奄 a b s t r a c t s t u b b yr o o tn e m a t o d e s ( t r i c h o d o r u ss p p a n dp a r a t r i c h o d o r u ss p p ) a r eag r o u po f e c t o p a r a s i t i cn e m a t o d e st h a tn o to n l ya f f e c tr o o tg r o w t hb u ta l s o l e a dt or o o ts t a g n a t i o no f 锄 e x t e n s i v er a n g eo fc r o p sb yt h e i rf e e d i n go np l a n tr o o tc e l l s ，a n dt h ei m p o r t a n ti st h a ts o m eo f w h i c h 锄r ev i r u sv e c t o r sa n dc a r lt r a n s m i tv i r u s e st om a n ye c o n o m i c a l l yi m p o r t a n tc r o p ss u c h 笛 f l o w e r s ，v e g e t a b l e s ，c r o p s ，f r u i tt r e e s ，e r e m a n yc o u n t r i e sa n do r g a n i z a t i o n si nt h ew o r l dh a v e l i s t e dt h e ma sq u a r a n t i n ep e s t s d u et ot h em o r p h o l o g i c a ls i m i l a r i t yo ft h ek e yi d e n t i f i c a t i o n c h a r a c t e r sa m o n gt h es p e c i e s ，i ti s v e r yt i m e - c o n s u m i n ga n dl a b o r i o u so n l yb a s e do nt h e m o r p h o l o g i c a lc h a r a c t e r st oi d e n t i f yt h es p e c i e s i nt h i ss t u d y , t r i c h o d o r u sa n dp a r a t r i c h o d o r u s p o p u l a t i o n sf r o m13p r o v i e n c e so fc h i n aa n db e l g i u mw e r es y s t e m a t i c a ls t u d i e db a s e do nt h e m o r p h o l o g i c a la n dr d n a c h a r a c t e r s t h em a j o rr e s u l t so b t a i n e da r ea sf o l l o w s ： 1 a m o n g1 , 5 4 6s o i ls a m p l e sc o l l e c t e df r o m13p r o v i n c e so fc h i n a , i n c l u d i n gb e i j i n g , s h a n d o n g , s h a n x i ，h e n a n ，j i a n g s u ，a n h u i ，h u n a n ，c h o n g q i n g ，z h e j i a n g ，f u j i a n , y u n n a n ，h a i n a n a n dg u a n g d o n g , o ri n t e r c e p t e di na z a l e ai m p o r t e df r o mb e l g i u m ，6 3 o fw h i c hw e r ed e t e c t e dt h e p r e s e n c eo ft r i c h o d o r u sa n dp a r a t r i c h o d o r u sp o p u l a t i o n s ，a n d2 3 ，15 ，31 ，10a n d8s o i ls a m p l e s c o n t a i nzn a n j i n g e n s i s ，zp a k i s t a n e n s i s ，pp o r o s u s ，pr e n i f e ，a n d 只m i n o r ，r e s p e c t i v e l y t h ef i v e s p e c i e sa c c o u n tf o r2 3 7 ，1 5 5 ，4 0 0 ，1 0 3 a n d 8 2 o ft h et o t a lt r i c h o d o r u sa n d p a r a t r i c h o d o r u sp o p u l a t i o n sd e t e c t e da n dt h i ss h o w s2 = n a n j i n g e n s i s ，zp a k i s t a n e n s i sa n d 只 p o r o s u sa r ep r e d o m i n a n ts p e c i e si nt h eg e n u st r i c h o d o r u sa n dp a r a t r i c h o d o r u so c c u r r i n gi n c h i n a , r e s p e c t i v e l y t h i si st h ef i r s td e t a i l e dr e p o r to fpr e n i f e ra n d 尸m i n o ri nm a i n l a n dc h i n a s e v e r a lp o p u l a t i o n so ft r i c h o d o r u sn a n f i n g e n s i sw e r ec o l l e c t e df r o mt h er h i z o s p h e r eo f c h i n e s em u l b e r r y , o r n a m e n t a lf l o w e r si nz h e j i a n gp r o v i n c e ，a n do r c h a r d si nb e i j i n g ，r e s p e c t i v e l y t h eb e i j i n gp o p u l a t i o n so fzn a n f i n g e n s i sa c c o u n tf o r3 9 1 o ft h et o t a ln e m a t o d ep o p u l a t i o n s d e t e c t e di nb e i j i n g ，w h i c hi n d i c a t e szn a n j i n g e n s i si sd o m i n a n ts p e c i e so fp e r e n n i a lp l a n t p a r a s i t i cn e m a t o d e si nb e i j i n g t h r o u g ht h em o r p h o l o g i c a la n dm o r p h o m e t r i c a lc o m p a r i s o n s ，i t r e v e a l e ds l i g h tv a r i a t i o nb e t w e e ni n t r a - s p e c i e sp o p u l a t i o n so fz = n a n j i n g e n s i sf r o md i f f e r e n t g e o g r a p h i cr e g i o n so fc h i n a ( b e i j i n g ，z h e j i a n g ) b u t2m a l e so fp o p u l a t i o n 。12 9a n d1m a l eo f p o p u l a t i o n0 8 8h a v eo n ec e r v i c a lp a p i l l a ei n s t e a do ft w o ，r e s p e c t i v e l y a c c o r d i n gt oc o m p a r i s o n s o f18 sr e g i o n so fr d n a ，i ti sf o u n dt h es i m i l a r i t yo fp o p u l a t i o n su s e di n t h i ss t u d ya n dt h o s e ( a j 4 3 9 5 7 9a n da j 4 3 9 5 8 0 ) i ng e n b a n ki si nt h er a n g eo f9 9 2 10 0 o s e q u e n c ea l i g n m e n t so f i t s1 ，i t s 2r e g i o no fr d n aa n dd 2 d 3r e g i o no f2 8 sr n ag e n er e v e a l e dt h es e q u e n c ec o n s i s t e n c y b e t w e e nt h e s ep o p u l a t i o n s a m o n g s o i ls a m p l e sc o l l e c t e df r o mh a i n a n ，c h o n g q i n g ，y u n n a na n df u j i a no fc h i n a , f i f t e e n t r i c h o d o r u sp a k i s t a n e n s i sp o p u l a t i o n sf r o mt h er h i z o s p h e r eo fs u g a rc a n e ，l o n g a n ，l i t c h ia n do t h e r e c o n o m i cc r o p sw e r eg o t t h ef u z h o u , x i a m e n , z h a n g z h o up o p u l a t i o n so fzp a k i s t a n e n s i s a c c o u n tf o r2 0 6 o ft h et o t a ln e m a t o d ep o p u l a t i o n sd e t e c t e di nf u j i a n ，a n d8 0 o ft o t a lz p a k i s t a n e n s i sp o p u l a t i o n si nt h i ss t u d y , w h i c hm e a n szp a k i s t a n e n s i si sd o m i n a n tt r i c h o d o r i d i v t s p e c i e so ff u j i a no m h a r d t h i si st h ef i r s tr e p o r to fd i s t r i b u t i o no fz 删s t a n e n s i si nh a i n a na n d c h o n g q i n go fc h i n a t h em a l e so fzp a k i s t a n e n s i su s u a l l yh a v et h r e ec e r v i c a lp a p i l l a ew i t ht w o a n t e r i o ra n do n ep o s t e r i o rt ot h es - ep o r e ，b u ti nt h i ss t u d yi tw a sf o u n dt h a tt h e r ea r e 1 1 1 ， 1 5 4 ，1 4 - 3 ，1 5 4 ，1 5 4 ，2 3 1 m a l e si np o p u l a t i o n1 0 8 ，1 0 9 ，1 1 4 ，l1 9 ，1 2 1 ，1 2 2w i t ho n e c e r v i c a lp a p i l l a ea n t e r i o rt ot h es - ep o r e ，r e s p e c t i v e l y s e q u e n c ec o m p a r i s o n so f18 sr e g i o no f r d n ar e v e a l e dh i 曲s i m i l a r i t yb e t w e e ni n t r a - s p e c i e sp o p u l a t i o n so fzp a k i s t a n e n s i sf r o md i f f e r e n t g e o g r a p h i c a lr e g i o n so fc h i n a , a n dt h es i m i l a r i t yt ot h o s ei ng e n b a n k ( a j 4 3 9 5 8 1a n da j 4 3 9 5 8 2 ) i s9 8 5 - - 9 9 3 s e q u e n c ea l i g n m e n t sa n dr f l pa n a l y s i so fi t s l ，i t s 2r e g i o no fr d n aa n d d 2 d 3r e g i o no f2 8 sr n a g e n er e v e a l e dt h es e q u e n c ec o n s i s t e n c yb e t w e e nt h e s ep o p