（基础兽医学专业论文）动物组织中喹诺酮类药物多残留检测方法的研究.pdf

中国农业大学博+ 学位论文中文摘要 中文摘要 喹诺酮类药物( q u i n o l o n c s ，q n s ) 是一类十分重要的人工合成的抗菌药物，对革兰氏阴性 菌、大多数革兰氏阳性菌，衣原体等具有杀灭作用，广泛应用于兽医临床。然而细菌对该类药物 较易产生耐药性。耐药菌株可通过食物链向人类传递，此外动物性食品中q n s 残留也可导致人体 内敏感细菌产生耐药性，该现象已引起了全世界的关注。目前对动物性食品中q n s 残留进行监测 是确保食品安全和人类健康的最后一道防线。本研究建立了动物组织中q n s 免疫亲和色谱柱净化 技术，并建立了可检测q n s 药物多残留的免疫亲和一高效液相色谱一荧光检测法、固相萃取一高效 液相色谱一荧光检澳6 法和免疫亲和色谱一液相色谱串联质谱法、固相萃取一液相色谱串联质谱法， 为监测动物性食品中q n s 药物的残留提供技术保障。 利用簇特异性的q n s 单克隆抗体制备了可同时净化麻保沙星( m a r b o f l o x a c i n ，m a r ) 、依诺 沙星( e n o x a c he n o ) 、氧氟沙星( o f l o x a c i n ，o f l ) 、培氟沙星( p e f l o x a c i 玛p e f ) 、诺氟沙星 ( n o n q o x a c i n ，n o r ) 、环丙沙星( c i p r o f l o x a c i n , c i p ) 、洛美沙星( 1 0 m e f l o x a c i n l o m ) 、单诺沙星 ( d a n o f l o x a c i l l ，d a n ) 、恩诺沙星( e n r o f l o x a c i n , e n p ) 、沙拉沙星( s a r a f l o x a c i n , s a r ) 、二氟沙星 ( d i f l o x a c i n ，d i f ) 、恶喹酸( o x o l i n i ca c i d ，o x o ) 、氟甲喹( f l u m c q u i n e ，f l u ) 等1 3 种q n s 的免 疫亲和色谱柱。本研究制备的针对喹诺酮类的i a c 柱，选用甲醇- p b s ( 7 ：3 ，v v ) 作为洗脱溶 液；以n m o l m lg e l 和n m o u m ll g g 为单位表示i a c 的动态柱容量和绝对柱容量，更能体现i a c 的特性。该i a c 柱对每种q n s 药物的动态柱容量为3 7 5 6 ，6 7n m o l m lg e l ( 1 4 2 5 - 2 1 3 5n g m lg e l ) ， 绝对柱容量分别为o 7 扣1 3 3n m o m ll g o ( 2 8 5 - - 4 2 7n g m g g o ) 。在上述优化的条件下，i a c 柱 重复使用1 2 次后，q n s 的柱容量仍能达到初始柱容量的3 8 4 5 ，满足q n s 残留分析要求。i a c 柱重复使用2 0 次后，药物的回收率与样品的净化效果无明显变化。 建立了动物肌肉、肝脏组织中l o 种q n s 多残留检测的免疫亲和一高效液相色谱一荧光检测法。 动物组织样品用p b s 溶液提取，提取溶液直接进行i a c 柱净化，用p b s 、水分别洗涤，用甲醇 - p b s ( 7 ：3 ，v v ) 洗脱。以0 5 1 0 0n g g 的浓度水平添加时，鸡、猪肌肉组织中l o 种q n s 药物 的平均回收率范围在8 1 7 r 一- , 1 0 0 4 之问，日内变异系数范围在2 7 一1 2 5 之间，日问变异系数 范围在6 9 - - 1 4 3 之间。鸡、猪肝脏组织中1 0 种药物的平均回收率范围在7 4 7 0 o - - 9 4 s 之间。 日内变异系数范围在3 9 0 一1 2 1 之间，日问变异系数范围在6 9 0 * - - 1 6 8 之间。方法的检测限均 为o 。1 5n g g ，定量限为0 5n g g 同时还建立了鸡、猪肌肉组织中1 0 种q n s 多残留检测的固相萃取一高效液相色谱一荧光检测 法。动物组织样品用p b s 溶液提取，h l b 固相萃取柱净化。以1 0 1 0 0n g g 的浓度水平添加时， 动物肌肉组织中1 0 种药物的平均回收率范围在7 2 8 0 o 1 0 6 8 之间，日内变异系数范围在 0 5 。7 4 之婀，日间变异系数范围在4 3 - - 1 0 3 之闯方法的检测限均为0 3n g g ，定量限为 1 0n g g 建立了动物肌肉、肝脏组织中m a r 、e n o 、o f l 、p e f 、n o r 、c i p 、l o m 、d a n 、e n r 、 s a r 、d i f 、o x o 、f l u 等1 3 种q n s 多残留检测的免疫亲和色谱一液相色谱串联质谱法。系统以 o 1 甲酸水溶液- o 1 甲酸乙腈溶液一甲醇为流动相，进行梯度洗脱。动物组织样品提取后i a c 柱净化，甲酵_ 2 氨水( 7 ：3 ，v v ) 洗脱，o 1 甲酸水溶液复溶，l c - m s m s 测定在0 3 、1 0 ， 中固农业大学博十学位论文中殳摘爱 1 0n g g 的浓度添加水平，空白猪、鸡肌肉组织1 3 种约物添加平均同收率范罔在6 8 3 - - 9 7 2 之 问，日内变异系数范同在6 6 - - 1 6 9 之问，日问变异系数范围在8 8 - - 2 3 3 之间。鸡、猪肝脏 组织中1 3 种药物的平均同收率范围在6 2 3 - - 9 3 8 之间，日内变异系数范阐在7 1 - - 1 9 3 之间， 日间变异系数范围住1 2 7 - 1 9 8 之间。方法的检测限均为o ，1n g g ，定鲑限为0 3n g g 。 同时还研究建立了动物肌肉中1 3 种o n s 多残留检测的同相摹取一液相色谱串联质谱法。在 0 5 、1 0 、1 0 n g g 的添加水平，上述1 3 种药物的平均同收率范嗣在7 0 7 - - 9 5 1 之间，日内变异 系数范围在3 6 1 8 8 之间，日间变异系数范嗣在8 9 1 8 2 之间。方法的检测限均为0 1 5 n g g ，定量限为0 5n g g 。 综上所述，本文建立的动物组织中q n s 多残留高效液相色谱荧光检测常规定蕈方法和液相色 谱串联质谱确证方法的灵敏度、准确度、精密度等各项参数均满足残留分析的要求，可片j 于实际 样品的检测。 关键词：喹诺酮类药物，多残留分析，免疫亲和色谱嗣相萃取高效液相色谱，液相色谱串联 质谱 中国农业大学博士学位论文a b s t r a c t a b s t r a c t q u m o l o n e s ( q n s ) a r eac l a s so f h i g h l yu s e f u ls y n t h e t i ca n t i m i c r o b i a la g e n t si nv e t e r i n a r yp r a c t i c e b e c a u s eo f t h e i rb r o a d - s p e c t r t m 【lo f a c t i v i t i e sa n dg o o do r a la b s o r p t i o n h o w e v e r , t h er e s i d u e so f q n si n e d i b l ea n i m a lt i s s u e se n t e r i n gh u m a nf o o dc h a i nr e p r e s e n t sp o t e n t i a lh a z a r dt oh u m a nh e a l t h s u c ha s t h ee m e r g e n c ea n ds p r e a do fd r u g - r e s i s t a n tb a c t o d a ls t r a i n s , a n du n a c c e p t a b l es i d e - e f f e c t s i ti s n e c e s s a r yt od e v e l o pap r e c i s e ，s p e c i f i c ，a c c u r a c y , a n ds e n s i t i v et e c h n i q u ef o rt h er a p i dd e t e c t i o na n d i d e n t i f i c a t i o no fq n si nf o o ds u p p l y i nt h i sw o r k , a ni m m u n o a f f i n i t yc o l u m nf o rc l e a n - u pq n sf r o m m a t r i c e sw a s d e v e l o p e d ， m o r e o v e r ,i a c - h p l c f l d , s p e h p l c f l d ，l a c l c m s m s 。a n d s p f l c - m s m sm e t h o d sw e r ee s t a b l i s h e dt od e t e r m i n a t i o na n dc o n f i r m a t i o no f q n si na n i m a lt i s s u e s a ni m m u n o a f f i n i t yc h r o m a t o g r a p h i cc o l u m nw a sf i r s t l y d e v e l o p e du s i n gab r o a d - s p e c i f i c i t y m o n e c l o n a la n t i b o d ym e d i a t e di m m u n o s o r b e n tt os e l e c t i v e l ye x t r a c ta n dp u r i f y1 3q n s ( m a r b o f l o x a c i n e n o x a c i i l ，o f l o x a c i n ，p c f l o x a c i n ，n o r f l o x a c i r bc i p r o f l o x a c i n ，i o m e f i o x a c i i l d a n o f t o x a c i n , e m - o f l o x a c i n ， d i f l o x a c i n , s a r a f l o x a c i n , o x o l i n i ca c i d , a n df l u m e q u i n e ) e l u t i o ns t r a t o g i e sw e r eo p t i m i z e da sw e l la s o t h e ro p o m t i n gs t r a t e g i e s ，a n de f f i c i e n te l u t i o ao f q u i n o l o n e sc a p t u r e db yi a cw a sa c h i e v e dw i t h4m l o f7 0 m e t h a n o li np b s t h ec o l u m nc a p a c i t i e so ft h ei a cw e r ei n v e s t i g a t e da n df i r s t l yd e m o n s t r a t e d a sm o l a ra n a l y t e sa g a i n s tm go fi m m o b i l i z e da n t i b o d i e si n s t e s do fn g m g t h ed y n a m i cc o l u m n c a p a c i t i e so f1 3q n sw e r ef r o m3 7 5t o6 6 7n m o l m l ( 1 4 2 5 - 2 1 3 5n g m lg e l ) a n dt h es p e c i f i cc o l u m n c a p a c i t i e sw e r e f r o m0 7 5 t o1 3 3n m o l m li g g ( 2 8 5 - 4 2 7n g m gl g g ) ，r e s p e c t i v e l y t h ec o l u m n c a p a c i t yw a sa b o u t3 5 4 8 o ft h eo r i g i n a lc a p a c i t ya f t e r1 2c y c l e so fu a tt h eo p t i m i z e dp r o c e d u r e a f t e r2 0c y c l e s ，t h er e c o v e r i e sa n dp u r i f i e dc a p a c i t yw e r en o ts i g n i f i c a n td i f f e r e n tu s i n gt h ei a c as i m p l em u l t i r e s i d u em e t h o di sd e v e l o p e df o rt h ea n a l y s i so f1 0q n si n c l u d i n go f m a r b e f t o x a c i n , n o r f l o x a c i n ，c i p r o f l o x a e i n , l o m e f t o x a c i n ，d a n o f l o x a c i n ，e u r o f t o x a c i n , d i f t o x a c i n ，s a r a f t o x a c i n , o x o l i n i c a c i d , a n df l u m e q u i n eb yh p l c - f l d t h ea n a l y mw e r es e p a r a t e du s i n gf o r m i ca c i da q u c o u s s o l u t i o n - a c o t o n t d l es y s t e ma sm o b i l ep h a s ew i t hal i n e a rg r a d i e n te l u t i o np r o g r a m , a n dd e t e r m i n e db y p r o g r a m m a b l ef l u o r e s c e n c ed e t e c t i o n t h ed i f f e r e n tr e c o n s t i t u t e ds o l u t i o n sw e r es p e c i a l l yt e s t e d f o r t h e i ra b i l i t yt oo b t a i nt h em a x i m u mf l u o r e s c e n c er e s p o n s ev a l u ef o re a c hd r u g t h ep h o s p h a t eb u f f e r s a l i n e ( p b s ，o 0 1m o ll - ，p h7 4 ) w a su s e da s r e c o n s t i t u t e ds o l v e n t , a n dt h es e n s i t i v i t yf o rq n s d i s s o l v e di np b sm e d i u mc o u l di n c r e a s e1 8 - 3 2t i m e st h a ni nm o b i l ep h a s em e d i u m u n d e rt h e o p t i m u mc o n d i t i o n s ，e x c e l l e n tl i n e a t i t yw l 口 ep r e s e n t e d w i t hs a t i s f a c t o r yc o r r e l a t i o nc o e f f i c i e n t s ( f 2 o 9 9 ) i np b sm e d i u m ht h i ss t u d yt h ea n a l y t i c a lm e t h o df o r1 0q n sr e s i d mi na n i m a lm u s d ea n dl i v e r 豁嘴su s i n g i a c h p l c - f l dw a sf i r s t l ys t u d i c d t h es a m p l e sw c l - ce x t r a c t e dw i t hp b sa n dt h e nc l e a n e dt i pw i t l l i a cc o l u m nw h i c hw a sw 幽h e db yp b sa n dd e - i o nw 撕b e f o r ee l u t e du s i n g7 0 0 , 6m e t h a n o li np b s s o l u t i o n f o rt h e1 0d r u g s ，a t0 5n g g , 1 0n g g , 1 0n g g , a n d1 0 0n g gf o r t i f i e dl e v e l s ，r e c o v e r i e si n c h i c k e na n dp o r c i n em u s c l e sr a n g e df r o m8 1 7 t o1 0 0 4 w i t hi n a a - a n di l l 把m s s a yc o e f f i c i e n to f v a r i a t i o n s ( c v s ) o f 2 7 - 1 2 5 a n d6 9 1 4 3 f o r t i f i c a t i o na tt h er a n g eo f 0 5n g g 一1 0 0n g 售m e a l r e c o v e r i e sw e r e7 4 7 - 9 4 8 i nc h i c k e na n dp r o c i n em u s c l e s w i t i li n t m - a n di n t e r - a s s a yc v so f i l l 中国农业大学博卜学位论文 a b s t r a c t 3 9 - 1 2 1 a n d6 9 - 1 6 8 ，r e s p e c t i v e l y l i m i to f d e t e c t i o n ( l o d ) a n dl i m i to f q u a n t i t a t i o n ( l o q ) f o f q n sr e s i d u e i na n i m a l m u s c l e a n d l i v e r t i s s u e s w a s 0 1 5n e d g a n d 0 5n g g , r e s p e c t i v e l y t h es p e h p l c f l dm e t h o dw a sa l s oi n v e s t i g a t e df o rd e t e r m i n a t i o no fl oq n sr e s i d u ei na n i m a l m a s c l em a t r i c e s t h es a m p l e sw e r ee x t r a c t e dw i t hp b sp i r o rt oc l e a n - 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a c e t o n t r i l e m e t h a n o ls y s t e ma sm o b i l ep h a s ew i t hal i n e a rg r a d i e n te l u t i o np r o g r a m ， a n dd e t e r m i n e db yp o s i t i v ei o ne l e c t r o - s p r a yt a n d e mm a s ss p e c t r o m e t r y f o r t i f i c a t i o na t0 3n g gt o1 0 n e g g m e a nr e c o v e r i e sw e r e6 8 3 - 9 7 2 a n d6 2 3 - 9 3 8 w i t hi n t r a - a s s a yc v so f 6 6 - v 1 6 9 a n d 7 1 一1 9 3 a n di n t e r - a s s a yc v so f8 8 0 , 1 9 8 n a d1 2 7 - - - 1 9 8 i na n i m a lm u s c l ea n dl i v e rt i s s u e s t h el o da n dl o qf o rq n sr e s i d u ei na n i m a lm u s c l e sw a s0 1n g g ga n d0 3n g g , r e s p e c t i v e l y as p ec l e a n u pm e t h o dw a sa l s od e v e l o p e df o rv e r i f i e a t i o no f1 3q n sr e s i d u ei na n i m a lm u s c l e m a t r i c e sb yl c - m s m s f o r t i f i c a t i o na tt h er a n g eo f0 5n g g - 1 0n g g ，m e a nr e c o v e r i e sw e r e 7 0 7 - 9 5 1 w i t hi n t r a - a n di n t e r - a s s a yc v so f 3 6 一1 8 8 a n d8 9 - , - 1 8 2 i nc h i c k e na n dp r o c i n e m u s c l e s t h el o da n dl o qf o rq n sr e s i d u ei na n i t a a lm u s c l e sw a s0 1 5n e d ga n d0 5n g g , r e s p e c t i v e l y c o m p a r e dw i t hs p ep u r i f i c a t i o np r o c e d u r e 。i m m u n o a f f i e t yc h r o m a t o g r a p h yc l e a n u p i sm o r e p o w e r f u l a n de a o r et i m e s a v i n g n el o w e rl o d a n dl o qw e r eo b s e r v e d ，a n dl e s so p e r a t i o ns t e p sw e r e r e q u i r e du s i n gi a cp u r i f i e dp r o c e d u r ei nc o m p a r i s o n w i t hs p e k e y w o r d s ：q u i n o l o n e s ，m u l t i - r e s i d u ea n a l y s i s ，i m m u n o a f l i n i t yc h r o m a t o g r a p h yc o l u m n , s o l i dp h a s e e x t r a c t i o n , h p l c ，l c - m s m s 缩略语 英文缩写英文全称中文全称 a c na c e t o n i t r i l e 乙腈 a d i a e c e p t a b l ed a i l vi n t a k e 日许量 a p c i a l m o s p h e r i cp r e s s u r ec h e m i c a li o n i z a t i o n 大气压化学电离 a q a c i dq u i n o l o n e酸性喹诺酮 a s ea c c e l e r a t e ds o l v e n te x t r a c t i o n加速溶剂萃取 a s t e da u t o m a t e ds e q u e n t i a lt r a c ee n r i c h m e n to f d i a l y s a t e s自动序列透析，痕量富集 a u ca r e au n d e rc u r v e曲线下面积 b s ab o v i n es e r u ma l b u m i n牛血清白蛋白 c a cc o d e x a l i m e n t a r i u sc o m m i s s m n食品法典委员会 c a sc h e m i c a la b s t r a c t ss e r v i c e化学摘要编号 c c r v d fc o d e xc o m m i t t e eo nr e s i d u e so f v e t e r i n a r yd r u g si nf o o d s 食品兽药残留委员会 c d r c o m p l e m e n t a r i t yd e t e r m i n i n gr e g i o n 互补决定区 c e c a p i l l a r ye l e c t r o p h o r e t i c 高效毛细管电泳法 c i d c o l l i s i o n i n d u c e dd i s s o c i a t i o n 碰撞诱导解离 c i p c i p m f l o x a c i n 环丙沙星 c n b r c y c l o h e x y lb r o m i d e 溴化氰 c p g c o n t r o l l e d - p u r eg l a s sb e a d 控制孔径的玻璃珠 c vc o e f f i c i e n to f v a r i a t i o n变异系数 c z e c a p i l l a r yz o n ee l e c t r o p h o r e s i s 毛细管区带电泳 d a dd i o d ea r r a yd e t e c t o r二极管阵列检测器 d a nd a n o f l o x a c i n单诺沙星 d c md i c h l o r o m e t h a n e二氯甲烷 d i fd i f l o x a c i n二氟沙星 e d c 1 - e t h y l 一3 一 3 - d i m e t h y l a m i n o p r o p y l c a r b o d i i m i d e 乙基二甲氨基碳化二亚胺 e e c e u r o p e a ne c o n o m i cc o m m u n i t y 欧渊经济共同体 e l e l e c t r o ni m p a c ti o n i z a t i o n电子轰击离子化 e l i s ae n z y m el i n k e di m m u n o s o r b e n ta s s a y 酶联免疫吸附测定法 e n oe n o x a c i n依诺沙星 e n re m o f l o x a c i n恩诺沙星 e s i e l e c t r o s p r a yi o np , n r c e 电喷雾离子源 e t a e e t h y la c e t a t e 乙酸乙酯 e t o h e t h a n o l乙醇 f a of o o da n da g r i c u l t u r eo r g a n i z a t i o n 世界粮农组织 f c af r e u n d sc o m p l e t ea d j u v a n t 弗氏完全佐剂 v i i i 中国农业大学博士学位论文缩略语 f d a f i c a f l d f l u f q s g c h s a h p n c h p l c h p l l c i a c i s s i c 蛐 培g i u p a c k l h l c - m s l l e l o d l o m l o q m a e m a r m c a b m l a c m l s p e f c o h m r l m s ，m s m s p d n a l n h s n o e l n o r o d o d s o f l o v a f o o da n dd r u g a d m i n i s t r a t i o n f r e u n d si n c o m p l e t ea d j u v a n t f l u o r e s c e n c ed e t e c t i o n f l u m e q u i n e f l u o r o q u i n o l o n e s g a sc h r o m a t o g r a p h y h u m a ns e r u ma l b u m i n h 砷p e r f o r m a n c ei m m u n o a f f i n i t yc h r o m a t o g r a p h y h i 曲p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y h i g hp e f f o r m a n ct h i nl a y e rc h r o m a t o g r a m i m m u n o a f f l n 玲c h r o m a t o g r a p h y l m m u n o s o r b e n t s h a l f o f i n h i b i t i o nc o n c e n t r a t i o n i m m u n o g l o b u l i ng i n t e r n a t i o n a lu n i o no f p u r ea n da p p l i e dc h e m i s t r y k e y h o l el i m p e th e m o c y a n i n l i q u i dc h r o m a t o g r a p h y i n a s ss p e c t r o m e t r y l i q u i d l i q u i de x t r a t i o n l i m i to f d e t e c t i o n l o m e f l o x a c i n l i m i to f q u a n t i l a f i o n m i c r o w a v e - a s s i s t e de x t r a c t i o n m a r b o f l o x a c i n m o n o c l o n a la n t i b o d y m u r i - i m m u n o a f f i n i t yc o l u m n m o l e c u l a r l yi m p r i n t e ds o l i d p h a s ee x t r a c t i o n m e t h a n o l m a x i m u mr e s i d u el i m i t t a n d e mm a $ ss p e c t r o m e t r y m a t r i xs o l i dp h a s ed i s p e r s i o n n a l i d i x i c i d n h y d r o x y s u c c i n i m i d e n oo b s e r v e de f 幅e c tl e v e l n o r f l o x a c i n o p t i c 蝴d e n s 时 o c t a d e c y l s i y lb o n d 酣p h a s e o f l o x a c i n o v a l b u m i n 美国食品药品管理局 弗氏不完全佐剂 荧光检测 氟甲喹 氟喹诺酮类药物 气相色谱 人血清白蛋白 高效亲和色谱 高效液相色谱 高效薄层色谱 免疫亲和色谱 免疫吸附剂 5 0 抑制率 免疫球蛋白g 国际纯化学与应用化学联盟 钥孔血蓝蛋白 液相色谱，质谱 液一液萃取 检测限 洛美沙星 定量限 微波辅助萃取 麻保沙星 单克隆抗体 多残留免疫亲和色谱 分子印迹固相萃取 甲醇 最高残留限量 串联质谱 基质固相分散 萘啶酸 n 掘基琥珀酰亚胺 无作用剂量 诺氟沙星 光密度 十八烷基键合硅胶 氧氟沙星 卵清白蛋白 中国农业大学博+ 学位论文缩略语 o x o o x o l i n i ca c i d 恶喹酸 p b s p c a b p e f p i r p q q n s q s a r r s d s a r s f e s i m s p e s p m e s r m t c a t e a t f a 珊 t i c 眦 t m b u f d u v w h o 、v t 、m x p h o s p h a t eb u f f e rs a l i n e p o l y c l o n a la n t i b o d y p e f l o x a c i n p i p e m i d i ca c i d p i p e r a z i n y lq u i n o l o n e q u i n o l o n e s q u a n t i t a t i v es t r u c t u r ea c t i v i t yr e l a t i o n s h i p r e l m i v es t a n d a r dd e v i a t i o n s a r a f l o x a c i n s u p e r c r i t i e a lf l u i de x t r a c t i o n s e l e c ti o nn a o m i t o r s o l i dp h a s ee x t r a c t i o n s o l i d - p h a s em i c r o e x t r a e t i o n ， s e l e c t e dr e a c t i o nm o n t o r i n g t r i c h l o r a c e t i ca c i d t r i e t h y l a m i n e t r l f l u o r o a c e t i ca c i d t e t r a h y d r o f u r a n t o t a li o nc h r o m a t o g r a p h y t h i nl a y e rc h r o m a t o g r a m 3 ，3 ，5 ，5 - t e t r a m e t h y l b e n z i d i n e u l t r a f i l t r a t i o nd i a l y s i s u l t r a v i o l e td e t e c t i o n w o r l dh e a l l ho r g a n i z a t i o n w i t h d r a w a lt i m e w o r l dt r a d eo r g a n i z a t i o n 磷酸盐水溶液 多克隆抗体 培氟沙星 吡哌酸 哌嗪基喹诺酮 喹诺酮类药物 计算机辅助药物设计 相对标准偏差 沙拉沙星 超临界流体摹取法 选择离子监测 固相柱萃取法 固相微萃取 选择反应监测 三氯乙酸 三乙胺 三氟乙酸 四氢呋哺 总离子流色谱图