兔瘟组织灭活苗的制作ppt课件

兔病的综合诊断,1,流行病学诊断临床诊断病理诊断,2,微生物(Microorganism)形体微小、结构简单，须借助于光学显微镜或电子显微镜进行观察。病毒(包括噬菌体)；细菌、放线菌、立克次氏体、支原体、衣原体、螺旋体等；真菌：包括酵母菌（单细胞）、霉菌（多细胞）；单细胞的藻类以及原生动物等。,非细胞型微生物,单细胞原核微生物,真核微生物,3,细菌(bacteria)的细胞形态1、球菌单独存在时为圆球形，几个细菌联在一起时其接触面稍为扁平。按其分裂方向和分裂后排列状态，可以分为：单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌、葡萄球菌。2、杆菌细胞呈杆状或圆柱状，各种杆菌的长度与直径比例差异很大，有的粗短，有的细长，短杆菌近似球状，长杆菌近似丝状。一般来说，同一种杆菌其粗细比较稳定，而长度则经常因培养时间、培养条件不同而有较大变化。有的杆菌很直，有的稍弯，有的两端截平如炭疽芽孢杆菌，有的略尖，有的半圆。,4,（三）革兰氏染色革兰氏染色法于1884年由丹麦医生Gram创立，是延用至今的经典染色法。经革兰氏染色后可以把全部细菌分为G+和G-两大类。染色机制：与细菌细胞壁的结构和组成有很大关系。G+细菌：肽聚糖层厚，含量多，经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小，结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色，复染后不着色，保持结晶紫的颜色；G-细菌：肽聚糖层很薄，含量少，脂肪含量高，经乙醇处理后部分细胞壁脂类可能被溶解并改变其组织状态，细胞壁孔径变大或通透性增加，不能阻止溶剂透入，酒精将结晶紫与碘的复合物洗脱，细菌被脱色，经复染后染成红色。,5,肽聚糖,脂蛋白,磷壁酸,外膜,6,染色操作步骤涂片固定,7,革兰氏染色法,1.涂片、干燥及固定2.初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1-2分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。3.媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。4.脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约25秒，后立即用流水冲洗。5.复染：滴加番红染色液，染2分钟，水洗后用吸水纸吸干。6.镜检：观察染色结果图。,8,细水冲洗,结晶紫初染2min,碘液媒染1min,95%酒精脱色20s,蕃红复染12min,细水冲洗,细水冲洗,9,革兰氏染色成败关键：酒精脱色，脱色不够将G-转变为G+，脱色过度将G+变成G-；涂片要均匀、薄；菌龄影响染色，菌龄老、陈旧的细菌培养物，往往G+转变成G-，一般做革兰氏染色用18小时左右的细菌培养物，不要超过24小时，以免影响染色性。,10,油镜操作规程,1.先用低倍镜和高倍镜观察涂片，待看到目的物后，将其移到视野中央。2.在涂片上滴一滴香柏油，转动换转器使油镜针对通光孔。3.使油镜与香柏油接触，这时油镜头几乎与载玻片相接触，切记不能使用粗调，以免压碎载玻片。4.用细调旋钮慢慢提升镜头高度，直至物像清晰。切勿拧反方向。5.观察完毕后，使镜筒远离载物台。取下载玻片。用擦镜纸擦去镜头上的香柏油：先用干的擦镜纸擦12次，把大部分油去掉，再用二甲苯滴湿的擦镜纸擦2次，最后再用干擦镜纸擦1次。擦拭时要顺镜头的直径方向，不要沿镜头的圆周擦。擦拭要细心，动作要轻。,11,五、结果：,绘模式种、自选种镜检油镜视野图（比例、形状准确，注放大倍数，染色特性）,G+(金黄色葡萄球菌),G-（枯草芽孢杆菌）,G-（大肠杆菌）,12,GramStainofStaphylococcusaureus,GramStainofEscherichiacoli,AGramStainofaMixtureofGram-PositiveandGram-NegativeBacteria.,13,兔病毒性出血症的诊断及其组织灭活苗的制造,王海荣,14,兔的病毒性出血症（rabbitviralhemorrhagicdiseaze）是兔的一种急性败血性传染病，RHDV抗原性强，组织灭活苗效果极佳，安全可靠，目前广泛使用的是肝组织甲醛灭活苗，联苗兔瘟、巴氏杆菌二联苗也已使用。,15,组织灭活苗可分加佐剂和不加佐剂两种。含佐剂苗所产生的抗体水平较高于无佐剂苗，但产生免疫力的时间迟于无佐剂苗，而且生产程序较为复杂，成本也高。当发生免瘟时，作为紧急接种，选用无佐剂苗更为理想，因产生免疫力较快，可提早控制疫情，即使平时预防接种，无佐剂苗也极为有效。,16,一材料,（1）种毒强毒株组织毒1:10悬液感染成兔肌注1ml，4872小时引起发病死亡。（2）制苗动物3月龄以上未感染本病和未接种本病疫苗的健康免。组织捣碎机等,17,二、操作方法,1、攻毒取种毒2-5g制成1:10组织悬液，每毫升各加青链霉素1000IU单位,在4处理46小时，取上清液皮下或肌肉注射兔子，1ml/只，实验免接毒后的观察。,18,（1）抗生素可先配制成高浓度的原液，-20保存。（2）抗生素的最高使用浓度。青霉素钾1万单位/ml链霉毒钾：20mg/ml即1mg=1000Iu2万Iu/ml。抗生素的配置：1先配浓溶液20万/ml，25万/ml,19,2、RHD的临床诊断及实验室诊断临床上，RHD以神经症状为主，在免疫压力可表现出非典型变化。剖检以呼吸系统的严重出血和内脏实质器官的淤血肿大为特征。人工感染后的发病高峰时间接种后3672小时。,20,RHDV可凝集人的O型红细胞，温度对血凝无显著影响，PH4.4-7.2时血凝稳定，血凝具有特异性，能被高免血清所抑制。,21,10%肝悬液4000rpm，10-15分钟离心后取上清，1%人O型红细胞做HA，放置20-30分钟出结果，血凝现象的观察时间不超过45分钟。HA1160即为阳性阳性病料无论是自然死亡还是人工感染致死，其血凝价一般不低于25。健康兔只有2223，24。,22,RHD组织灭活苗的制造与检验,病料：PBS=1:10，生理盐水也可。捣碎、滤过，加入甲醛，使之含0.4%，371224小时，摇匀/2小时。用0.8%甲醛生理盐水对倍稀释，分装，37温箱内灭活48小时，每2小时摇匀一次，备检。,23,方法：,100g+400ml灭菌生理盐水高速组织、捣碎碎机匀浆（13）过滤用0.8%甲醛生理盐水对倍稀释分装37温箱内灭活24小时，每2小时摇匀一次，备检。,24,检验：,安全检验：23倍接种量1ml3ml(血液琼脂