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实验诊断学,LaboratoryDiagnostics,.,Chapter1概论(introduction),(一)Laboratorydiagnosis?是指医生的医嘱通过临床实验室分析所得到的信息为预防、诊断、治疗疾病和预后评价所用的医学临床活动。包括实验前、实验中和试验后3个部分。,一、实验诊断学的概念,标本,实验室检查,结果,物理化学生物免疫遗传,临床,临床,获得反映机体的客观资料病因病理变化功能状态,血液体液分泌物排泄物脱落细胞,诊断鉴别诊断病情观察疗效判断,实验前,实验中,实验后,临床血液学检验ClinicalHematology临床生物化学检验ClinicalBiochemistry临床病原学检查ClinicalMicrobiology临床免疫学检验ClinicalImmunology体液与排泄物检查Bodyfluidandexcretion,(二)主要内容,Chapter1概论(introduction),为临床医疗工作服务,开展健康咨询,进行社会普查,为预防工作提供依据,(三)实验诊断学的应用范围,Chapter1概论(introduction),(四)实验诊断学的发展趋势,Chapter1概论(introduction),个体化诊断:被检个体的基因背景及病理生理状态的综合分析的结果应用于该个体的预防、诊断和治疗上。包括:遗传基因、后天突变、疾病基因、代谢特征、药物敏感性等。,(五)实验诊断学的进展特点(development),Chapter1概论(introduction),床边检测:是指在病人医疗现场进行的医学检验。缺点:与常规检测结果缺乏连续性,价格高。,1.掌握常用项目的适应症;重点掌握其正常参考范围和临床意义;2.熟悉标本的正确采集及注意事项;3.了解各种检验方法的原理。,(五)学习方法和要求,Chapter1概论(introduction),(二)影响实验诊断的因素,Chapter1概论(introduction),二、实验诊断的质量体系和影响因素,实验前因素、实验室因素、实验室后因素,(一)完善质量保证体系,室内质控、室间质控、实验室质量体系,三、标本的采集与处理CollectionandDisposalofSpecimen,(一)血液标本(BloodSpecimen):全血:血细胞成分检查血浆:部分生化,凝血因子,游离Hb血清:大部分生化和免疫学检查,Chapter1概论(introduction),serum,1.种类,2.采血部位(LocationofCollection):(1)毛细血管:无名指端迟侧或耳垂,足跟(2)静脉:肘正中静脉或颈外静脉(3)动脉:股、肱、桡,隔离空气血气分析,Chapter1概论(introduction),(一)血液标本(BloodSpecimen):,3.采血时间(TimeofCollection):空腹采血:血糖,肝功特定时间采血:OGTT急诊采血:门诊病人,Chapter1概论(introduction),(一)血液标本(BloodSpecimen):,(1)抗凝剂(anticoagulant),EDTA-K2:血细胞分析仪,1-2mg/ml血枸橼酸钠(trisodiumcitrate):5mg/ml血凝血、血沉、输血保养液肝素(heparin):0.1-0.2mg/ml血红细胞有关检查、血气分析和部分生化草酸盐:红细胞比积(HCT),2mg/ml血,Chapter1概论(introduction),(一)血液标本(BloodSpecimen):,4.采血后处理(DisposalofSpecimen),(2)及时送检(3)微生物检验血标本:使用抗生素前,立即注入血培养皿中。,Chapter1概论(introduction),(一)血液标本(BloodSpecimen):,4.采血后处理(DisposalofSpecimen),(二)骨髓标本(BoneMarrowSpecimen),临床医师采集,立即制成涂片,迅速干燥。细菌培养;干细胞培养时肝素抗凝,(三)排泄物及体液标本,Chapter1概论(introduction),(一)正确选择实验室检查项目,Chapter1概论(introduction),四、实验诊断的临床应用和评价ClinicalapplicationandevaluationofLaboratorydiagnosis,确定诊断、辅助诊断、鉴别诊断,(二)常用诊断性实验的评价指标,诊断灵敏度(真阳性/所有病人);特异度(真阴性/非病人);准确度(准确结果/所有检验结果),遵循原则:针对性、有效性、经济性、及时性。,灵敏度越高,漏诊率越少。特异度越高,误诊率越少。,Chapter1概论(introduction),四、实验诊断的临床应用和评价,(三)检验结果解释与临床的结合,检验所得结果仅是静态的数据和现象,用来判断动态的复杂机体有一定的局限性。,(四)与非特异性检查项目的结合,(五)DRG,DRG(diagnosisrelatedgroups)即按疾病诊断相关分组付费,(一)参考范围,Chapter1概论(introduction),五、实验诊断的参考范围与医学决定水平ReferencerangeanddecisionlevelofLaboratorydiagnosis,平均值2标准差,(二)医学决定水平,绝大多数检验项目的检测值高于或低于参考值均有临床意义。临界值,(三)危急值:某些检验结果出现异常超过一定界值时,可能危及患者的生命,医生必须紧急处理。,第二章临床血液学检查(ClinicalHematologyExamination),第一节血液一般检查第二节溶血性贫血实验室检查第三节骨髓细胞学检查第四节血型鉴定与交叉配血试验,第一节血液一般检查(GeneralExaminationofBlood),一、红细胞和血红蛋白的检测二、白细胞的检测三、网织红细胞的检测四、血小板的检测五、血细胞沉降率检测六、血细胞比容测定和红细胞有关参数的应用七、血细胞直方图的临床应用,21,一、红细胞和血红蛋白检测,redbloodcell(RBC)andhemoglobin(Hb),RBC(1012/L)Hb(g/L)adultmale4.05.5120160adultfemale3.55.0110150newborn6.07.0170200,(一)参考值(ReferenceInterval),1)相对性:严重的呕吐、频繁的腹泻和大面积烧伤血液浓缩.2)绝对性:继发性、原发性,一、红细胞和血红蛋白的检测,1.增多(),(二)临床意义(clinicalsignificance),(2)原发性(primary):真红(PV),一、红细胞和血红蛋白的检测,(1)继发性(secondary):血中EpoEpo代偿性:与缺氧成正比.生理性:胎儿、新生儿、高原居民、剧烈运动、情绪激动等.病理性:肺气肿、肺心病、先心病等Epo非代偿性:与某些肿瘤或肾病有关.肾癌、肝癌、肾胚胎瘤、多囊肾等.,2)绝对性增多(),定义:单位容积血液中RBC数、Hb量、HCT低于参考值的下限。称为贫血(anemia),(1)造血原料不足:IDA、MA,(2)造血功能异常:AA、MDS、纯红AA,(3)RBC丢失过多:失血性贫血,一、红细胞和血红蛋白的检测,2.减少(),1)生理性:3个月15岁、老年人、妊娠中后期.统称为生理性贫血(physiologicalanemia),2)病理性:各种贫血。,(4)RBC破坏过多:HA,一、红细胞和血红蛋白的检测,(三)红细胞形态改变,正常形态,NormalErythrocyte,microcyte10um,HA,MAmegalocyte15um,MA,大小不均(anisocytosis)相差1倍.中度IDA,HA,失血贫;MA,(三)红细胞形态检查,2.RBC形态异常,椭圆形:HE,MgA,裂细胞:DIC,TTP,棘形:-LP缺乏,靶形:地中海贫血,镰形:HbS病,泪滴形:MF,HA,球形:HS,AIHA,口形:遗传症,DIC,缗钱状:MM,PMG,3.RBC染色反应异常,hyperchromic:MgA,HS,hypochromic:IDA,polychromatic:急性HA,MDS,4.RBC结构异常,嗜碱性点彩:铅中毒,MAbasophilicstippling,有核RBC(nucleatederythrocyte)(normoblast):HA,M6,MF,骨髓转移癌.,Cabotring:HA,MA,铅中毒,白血病,染色质小体(Howell-Jollybody):HA,MA,M6,白细胞分类(Differentialcount,DC),二、白细胞的检测,(whitebloodcell,WBC),neutrophilicstabgranulocyte,Nst,neutrophilicsegmentedgranulocyte,Nsg,monocyte,M,basophil,B,eosinophil,E,lymphocyte,L,WBC总数:成人(410)109/L6月2岁(1112)109/L新生儿(1520)109/L,(一)白细胞计数,二、白细胞的检测,【参考值】,WBC分类计数(DC):百分比%绝对值109/L中性杆状核(Nst):150.040.5中性分叶核(Nsg):507027嗜酸性粒(E):0.550.020.5嗜碱性粒(B):0100.1淋巴细胞(L):20400.84单核细胞(M):380.120.8,【参考值】,二、白细胞的检测,(二)白细胞分类计数,1)生理性,2)病理性,下午上午新生儿、月经期、妊娠5个月及分娩餐后、运动、高温或严寒,急性感染或炎症严重组织损伤或坏死急性溶血急性大出血:内出血急性中毒:化学药物、生物、代谢性白血病、骨髓增殖性疾病及恶性肿瘤,WBC10109/L,(1)中性粒细胞增多,中性粒绝对值1.5109/L-粒少(neutropenia)中性粒绝对值0.5109/L-粒缺(agranulocytosis)1)感染:病毒、G-杆菌、原虫2)造血系统疾病:AA,非白血性白血病,恶组,PNH3)慢性理化因素:化学物质及药物,重金属,放射线4)单核-巨噬细胞系统功能亢进:脾亢5)自身免疫性疾病:SLE,WBC4109/L-白细胞减少(leukopenia),(2)中性粒细胞减少(neutropenia),右移,(3)中性粒细胞核象变化,(3)中性粒细胞的核象变化,1)核左移(nuclearleftshift):周围血中杆状核粒细胞及杆状核以前的幼稚粒细胞增多,超过5%.(Nst/Nsg1/13)再生性:核左移+WBC.机体反应性强,骨髓造血功能旺盛,释放增加.轻度6%;中度10%+晚幼粒;重度25%+晚幼以前粒.急性化脓性细菌感染、急性中毒、急性溶血、急性失血、类白血病反应.,(3)中性粒细胞的核象变化,1)核左移(nuclearleftshift):再生性:急性化脓菌感染、急性中毒、溶血、失血、类白退化性:核左移+WBC正常.骨髓造血功能减低,粒细胞成熟受阻(AA,粒缺);机体反应性低下,骨髓释放功能受抑(伤寒,败血症),2)核右移(nuclearrightshift):周围血中分叶核粒细胞分叶过多,核分叶在5叶以上的中性粒细胞超过3%时,称核右移.在疾病进展期突然出现核右移预后不良.见于:MA、恶性贫血、抗代谢药物治疗后,炎症的恢复期(一过性).,(3)中性粒细胞的核象变化,(4)中性粒细胞形态异常,1.中毒性改变:大小不等、中毒颗粒、杜勒氏小体、空泡形成、退行性改变2.棒状小体:白血病时出现,42,43,44,45,46,47,2棒状小体(Auerbody),2.嗜酸性粒细胞(eosinophil,E),(1)增多(eosinophilia):,1)寄生虫病:肠道寄生虫感染2)变态反应性疾病:过敏3)皮肤病:湿疹、皮炎、银屑病4)某些传染病:猩红热急性期5)血液病及恶性肿瘤:CML、MM6)内分泌病:脑垂体、肾上腺皮质功能减退,2.嗜酸性粒细胞(eosinophil,E),(1)增多(eosinophilia):,(2)减少(eosinopenia):长期应用肾上腺皮质激素后,大手术及烧伤等应激状态,伤寒、副伤寒早期.,3.嗜碱性粒细胞(basophil,B),(1)增多(basophilia)0.1109/L,过敏性疾病、CML、某些转移癌、骨髓纤维化、嗜碱性粒细胞性白血病。,(2)减少:无临床意义,(1)增多,1)生理性:,2)病理性:,ALL/CLL,淋巴瘤感染性疾病:主要为病毒感染急性传染病恢复期:结核、百日咳、梅毒移植后的排斥反应:GVHD,儿童期,4.淋巴细胞(lymphocyte,L),(2)减少(lymphocytopenia)0.8109/L,常见于:应用肾上腺糖皮质激素后、放射线损伤、免疫缺陷性疾病、丙种球蛋白缺乏症等。,一般病毒感染2%,10%,(3)异型淋巴细胞(abnormallymphocyte),4.淋巴细胞(lymphocyte,L),5.单核细胞(monocyte,M),生理性:2周内婴儿可达15%,正常儿童,病理性:,1)某些血液病:单核细胞性白血病、淋巴瘤、恶组、MDS.2)某些感染:疟疾、黑热病、结核病、亚急性感染性心内膜炎.3)急性感染的恢复期。,(1)增多(monocytosis)0.8109/L,(2)减少:一般无临床意义,【类白血病反应】(leukemoidreaction)1.概念:是指机体受某些疾病或外界因素刺激而产生白细胞总数显著增多,和(或)外周血中出现幼稚细胞,类似白血病表现的血象反应.2.分型:N、L、M、E、WBC不增多型3.特点:病因明确,易恢复;BM象仅有核左移和中毒性改变。,二、白细胞的检测,类白血病反应,白血病(CML),明确病因,临床表现,外周血WBC,不成熟WBC,嗜碱粒细胞,红细胞,血小板,有,无,与原发病有关,进行性贫血、出血、肝脾淋巴结肿大,中度增加100109/L,明显增加100200109/L,幼稚5%10%,原始5%,常很多,白细胞形态,感染病例见中毒颗粒及空泡,畸形,不增多,常增多,无明显变化,减少,可见幼红细胞,正常或增加,粒细胞白血病显著减少,二、白细胞的检测,【类白血病反应】(leukemoidreaction),4.鉴别诊断:,类白血病反应,白血病(CML),NAP,骨髓象,Ph染色体,病理检查,显著增加,WBC,核左移,程度弱,极度增生,大量原始和幼稚细胞,无器官和组织白血病细胞浸润,治疗反应,原发病灶去除,迅速恢复,疗效差,粒细胞白血病显著减少,无,90%慢粒阳性,少数急淋、急粒阳性,器官和组织白血病细胞浸润,二、白细胞的检测,【类白血病反应】(leukemoidreaction),指晚幼红到成熟红之间的尚未完全成熟的红细胞。因胞质中含有嗜碱性物质,用煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色,成蓝绿色的网状结构,故得名。,网织红细胞89.5um,三、网织红细胞检测,(一)网织红细胞(reticulocyte,Ret)计数,1.定义:,(1)相对数成人:0.5%1.5%,平均1%。新生儿:2%6%,三月后与成人接近(2)绝对值(2484)109/L,2.参考值,三、网织红细胞检测,(一)网织红细胞(reticulocyte,Ret)计数,(1)反映骨髓的造血功能。:HA,急性失血贫;持续:慢性失血:AA(绝对值10034320-360MA、恶性贫血单纯8027320-360慢性感染、尿毒症小细胞性贫血肝病、恶性肿瘤小细胞8027320IDA、铁粒幼性贫血低色素性贫血慢性失血、地中海贫血,(二)红细胞平均值计算,【临床意义】主要用于贫血的形态学分类,(三)红细胞体积分布宽度,【定义】即红细胞体积大小分布的离散程度,常用RDW-CV表示,是反映外周血RBC体积异质性的参数。,【临床意义】用于贫血的形态学分类。缺铁性贫血的诊断和鉴别诊断。,【参考值】11.514.5%(15%),(Redbloodcellvolumedistributionwidth,RDW),贫血的MCV/RDW分类法,(三)红细胞体积分布宽度(RDW),(一)概论(二)白细胞直方图与临床应用(三)红细胞直方图与临床应用(四)血小板直方图与临床应用,七、血细胞直方图的临床应用,(一)概述,1.根据自动化程度:半自动、全自动、血液分析工作站、血液分析流水线。,2.根据DC情况:三分群:电阻抗型五分群:联合检测型(VCS),七、血细胞直方图的临床应用,七、血细胞直方图的临床应用,七、血细胞直方图的临床应用,3.血细胞直方图(hemocytehistogram):即细胞体积分布图形,横坐标细胞体积大小,纵坐标不同体积细胞相对数目。,(一)概述,意义:可信度、诊断、疗效观察,七、血细胞直方图的临床应用,35,90,160,450,(fl),小细胞区:主要是淋巴细胞,有核RBC,中间细胞区:包括单核细胞,嗜酸、碱细胞,幼稚细胞,大细胞区:主要是中性粒细胞,电阻抗法白细胞分群原理,REL.No.,(二)白细胞直方图,88,89,90,91,92,(三)红细胞直方图,94,95,大细胞性贫血(RDW轻度),见于叶酸,维生素B12缺乏引起的巨幼贫,96,大细胞性贫血(RDW明显),见于巨幼贫叶酸,维生素B12治疗初期,七、血细胞直方图的临床应用,(四)血小板直方图,七、血细胞直方图的临床应用,一、溶血性贫血的筛查检测二、红细胞膜缺陷的检测三、红细胞酶缺陷的检测四、珠蛋白生成异常的检测五、自身免疫性溶血性贫血的检测六、阵发性睡眠性血红蛋白尿症的检测,第二节溶血性贫血的常用实验室检测,概述(introduction),1.定义:溶血性贫血(hemolyticanemia,HA)指各种原因使RBC寿命缩短,破坏增多或加速,以致BM造血不能代偿RBC的破坏而引起的一类贫血,称为溶贫。,2.分类,RBC内在缺陷:膜、Hb异常、酶;PNH,RBC外在因素:免疫、理化、生物,(2)溶血部位,(1)病因,血管外溶血:慢性溶血-膜、Hb异常、脾亢,血管内溶血:急性溶血-酶、PNH,第二节溶贫常用实验室检测,结合珠蛋白Hp,Hb-Hp,肝脏,肾脏,大量溶血,(4)Hb尿,(5)含铁血黄素尿,肾小管上皮细胞重吸收,高铁血红蛋白,高铁血红素,白蛋白,血管内溶血:,(2)Hp减少,(1)血浆游离Hb增高,(3)高铁血红素白蛋白血症,血管外溶血:,肾脏,单核巨噬细胞系统破坏,游离胆红素(间),入血,白蛋白,胆绿素,结合胆红素(直),经胆道排入十二指肠,粪胆原(素),尿胆原(素),经门静脉入肝,(1)胆红素增高,黄疸,(2)粪胆原增高,(3)尿胆原增高,3.外周血RBC形态确定溶血病因(1)球形RBC25%-HS;(2)椭圆形RBC25%-HE;(3)靶形RBC-地中海贫血;(4)镰形RBC-HbS病.,第二节溶贫常用实验室检查,概述,一、溶血的筛查检测(一)血浆游离Hb测定:75%G-6-PD缺乏-还原率.,第二节溶贫常用实验室检测,四、珠蛋白生成异常的检测,(一)Hb电泳:协助诊断Hb病.HbA(
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