（遗传学专业论文）1433epsilon在喉癌中表达和功能研究.pdf

中国医科大学研究生学位论文独创性声明 珊iilllllllllllilllllltlllllliiillllllllllllll,illll,iw i | | y 18 9 3 0 5 7 本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的 地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包 含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一 同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说 明并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 论文作者签名：继日期： 翌! ! ：垒圭乡 中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究 生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保 证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科 大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学 校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许 论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密 内容除外) ，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。 论文作者签名： 益堇聋 指导教师签名：缓 垒幽 日 期：抄( 1 氓2 ，芝 目录 一、摘要 中文论著摘要1 英文论著摘要4 二、英文缩略语7 三、论文 前言8 一和舌 材料与方法9 实验结果2 5 讨论3 6 结论4 0 四、本研究创新性的自我评价4 l 五、参考文献4 2 六、附录 综述4 6 在学期间科研成绩6 6 致谢6 7 个人简介一6 8 中文论著摘要 7 们七印s ii o n 在喉癌中表达和功能研究 刖舌 头颈部鳞状细胞癌( s q u a m o u sc e l lc a r c i n o m ao fh e a da n dn e c k ，s c c h n ) 被 世界公认为第六大肿瘤，在世界范围内每年报道5 0 多力新增病例。喉痛是呼吸道 第二大常见恶性肿瘤，占所有恶性肿瘤的2 3 ，在我国，特别是东北地区，喉 癌的发病率呈逐年上升趋势。早期喉癌通常以单纯放疗或手术切除为主，对于进 展期喉癌，在世界范围内，全喉切除术仍然是首选的治疗方法。 5 一氮杂胞苷( 5 - a z a c y t i d i n e ) 或5 - 脱氧氮杂胞苷( 5 - a z a - d e o x y - c y t i d i n e ， 5 a z a c d r ) 是d n a 甲基转移酶抑制剂。5 一氮杂胞苷通过降低基因启动子区域的 甲基化程度，使某些因启动子区被甲基化而失活的肿瘤抑制基因被重新激活，可 达到治疗肿瘤的目的。 前期，我们利用二维电泳( t w od i m e n s i o n a le l e c t r o p h o r e s i s ，2 - d e ) 和质谱技 术对经5 - a z a c d r 处理前后的喉癌h e p 2 细胞系进行筛查，鉴定出若干表达差异 蛋白如1 4 3 3 e p s i l o n 等。 1 4 3 3 e p s i l o n 参与多种生物过程如细胞周期、细胞增殖以及细胞凋亡等的调 控，并且在神经发生以及恶性肿瘤形成的过程中具有重要的作用。 目前，j 彳一3 3 e p s i l o n 在喉癌发生中的功能以及调节机制并不十分清楚，因此， 本研究将通过对j 4 3 3 e p s i ，d n 在l s c c 中的表达及生物特性的分析，探讨 1 4 - 3 - 3 e p s i l o n 在喉鳞状细胞癌( 1 a r y n g e a ls q u a m o u sc e l lc a r c i n o m a ，l s c c ) 的发生 和发展中的作用。 材料与方法 以喉鳞癌组织标本为实验材料，应用r t - p c r 和w e s t e r nb l o t 检测喉鳞癌组 织中j 4 3 3 e p s i l o n 基因的表达水平，应用统计学方法分析临床资料与j 4 3 3 e p s i l o n 表达水平之间的关系。 构建j 4 3 3 e p s i l o n - g f p 表达载体，转染喉癌细胞系h e p 一2 ，通过荧光显微镜 和r t - p c r 观察并检测转染前后h e p 2 细胞中1 4 3 3 e p s i l o n 基因表达水平。应用 m t t 、流式细胞术、t r a n s w e l l 分别检测过表达j ，彳一3 3 e p s i l o n 基因对h e p 一2 细胞增 殖能力、细胞周期、细胞凋亡水平以及体外侵袭能力等生物学特性的影响。 实验结果 l 、在喉癌组织中，j 4 3 3 e p s i l o nm r n a 及蛋白质表达水平明显低于癌旁对 照组织；1 4 3 3 e p s i l o n 蛋白质在转移淋巴结中的表达水平较喉癌组织中的表达水 平更低；1 4 3 3 e p s i l o n 蛋白质在喉癌临床i i i 期或i v 期癌组织中的表达水平明显 低于在i 期或i i 期癌组织中的表达水平。 2 、构建重组表达载体j 4 3 3 e p s i l o n g f p ，经双酶切及菌液测序检测，结果准 确无误。 3 、与空白对照组相比，在转染g f p 组及j 4 3 3 e p s i l o n g f p 组中，h e p - 2 活 细胞的百分数分别为7 1 6 84 - 1 2 1 0 和3 6 6 84 - 1 4 0 9 ( p 0 0 5 ) 。 4 、空白对照组、转染g f p 组和转染彳一3 3 e p s i l o n g f p 组中，h e p 一2 细胞处 于细胞周期s 期的百分数分别为2 2 4 74 - 3 3 6 ，2 8 1 74 - 3 9 7 和4 6 1 54 - 6 8 2 ( p o 0 5 ) ，处于凋亡亚g l 期的百分数分别为1 2 34 - 1 0 2 ，2 9 24 - 1 5 9 和1 3 7 24 - 3 8 9 ( p o 0 5 ) 。 5 、在空白对照组、转染g f p 组和转染j 4 3 3 e p s i l o n g f p 组中，晚期凋亡细 胞的百分数分别为0 8 44 - 0 2 5 ，1 0 84 - 0 2 4 以及2 9 34 - o 1 3 ( p o 0 0 1 ) 。 6 、在空白对照组、转染g f p 组以及转染j ，4 3 3 e p s i l o n g f p 组中，穿过 t r a n s w e l l 小室滤膜的细胞数分别为2 0 6 54 - 1 9 4 ，1 7 6 34 - 1 0 4 以及9 14 - 0 2 4 ( p 0 0 0 1 ) 。 结论 l 、j ，掣一3 3 e p s i l o n 在喉癌中的低表达促进了喉癌的发生及进展。 2 、j 4 3 3 e p s i l o n 在喉癌中具有促进癌细胞凋亡以及抑制癌细胞侵袭的能力。 2 关键词 1 4 3 3 e p s i l o n ；l s c c ；凋亡；细胞侵袭；s 期细胞阻滞 基金项目：国家自然科学基会( 3 0 1 7 1 0 0 8 ，3 0 7 0 0 9 8 0 ) ；8 6 3 子课题 ( 2 0 0 2 b a 7 1 1 a 0 8 1 8 ) ；辽宁省自然科学基金( 2 0 0 9 2 1 1 0 ) 3 英文论著摘要 r e s e a r c ho nt h ee x p r e s s i o na n df u n c t i o no f 1 4 - 3 - 3 e p s i l o ni nl a r y n g e a lc a r c i n o m a i n t r o d u c t i o n s q u a m o u sc e l lc a r c i n o m ao fh e a da n dn e c k ( s c c h n ) h a sb e e nc o n s i d e r e da st h e s i x t hm o s tc o m m o nc a n c e ri nt h ew o r l d m o r et h a nh a l f - m i l l i o nn e wc a s e so fh e a da n d n e c kc a n c e r sa r er e p o r t e da n n u a l l yw o r l d w i d e l a r y n g e a lc a r c i n o m ai sn o to n l yo n eo f t h em a i ns c c h n ，b u ti sa l s ot h es e c o n dm o s tc o m m o nm a l i g n a n tn e o p l a s mo ft h e r e s p i r a t o r yt r a c t ，w h i c hc o n s t i t u t e sa l m o s t2 t o3 o f a l lm a l i g n a n tt u m o r s a n di n c h i n a ，t h ei n c i d e n c eo fl a r y n g e a lc a r c i n o m ah a sb e e nr i s i n gg r a d u a l l y , e s p e c i a l l yi nt h e n o r t h e a s tp a r t e a r l ys t a g el a r y n g e a lc a r c i n o m ac a nu s u a l l yb em a n a g e ds u c c e s s f u l l y w i t he i t h e rr a d i o t h e r a p yo rs u r g e r y a d v a n c e ds t a g ec a r c i n o m ao f t e nu n d e r g o e sa c o m b i n a t i o no ft r e a t m e n tm o d a l i t i e s t i l ln o w ，t h et o t a ll a r y n g e c t o m yo r l a r y n g o p h a r y n g e c t o m yr e m a i n st h ep r o c e d u r eo fc h o i c ef o ra d v a n c e ds t a g el a r y n g e a l c a r c i n o m aa r o u n dt h ew o r l d 5 - a z a c y t i d i n e( o r5 - a z a - d e o x y - c y t i d i n e ，5 a z a - c d r ) i st h ed n a m e t h y l t r a n s f e r a s ei n h i b i t o r , w h i c hc a nb eu s e df o rc a n c e rt r e a t m e n tt h r o u g hi n h i b i t i n g m e t h y l a t i o ni nt h ep r o m o t e rr e g i o no ft u m o rs u p p r e s s o rg e n e ss oa st oa c t i v a t es u c h g e n e s i no u rp r e v i o u ss t u d y ，w es c r e e n e da n di d e n t i f i e ds e v e r a lp r o t e i n s ，i n c l u d i n g 14 3 - 3 e p s i l o n ，r e l a t e dt od n am e t h y l a t i o ni nl a r y n g e a lc a r c i n o m ah e p - 2c e l l st r e a t e d w i t h5 - a z a - - c d r b yt w o d i m e n s i o n a l e l e c t r o p h o r e s i s a n dm a s s - s p e c t r o m e t r i c t e c h n i q u e 1 4 3 - 3 e p s i l o nr e g u l a t e sd i v e r s eb i o l o g i c a lp r o c e s s e s ，i n c l u d i n gc e l lc y c l ec o n t r o l ， p r o l i f e r a t i o n ，a p o p t o s i s ，a n dp l a y sas i g n i f i c a n tr o l ei nn e u r o g e n e s i sa n dt h ef o r m a t i o n o fm a l i g n a n tt u m o r 4 h o w e v e r , t h ee x a c tf u n c t i o na n dr e g u l a t o r ym e c h a n i s mo f1 4 3 3 e p s i l o n i n c a r c i n o g e n e s i sa r en o tc l e a r i nt h i ss t u d y , w ew i l le x p l o r et h er o l eo f1 4 - 3 - - 3 e p s i l o ni n d e v e l o p m e n ta n da g g r e s s i o no fl s c cb ya n a l y z i n gt h ee x p r e s s i o na n db i o l o g i c a l c h a r a c t e r i s t i c so f1 4 - 3 3 e p s i l o ni nl s c c m a t e r i a l sa n dm e t h o d s l a r y n xs q u a m o u sc e l lc a r c i n o m a ( l s c c ) s p e c i m e n sw e r eo b t a i n e df r o mt h e s h e n y a n g4 6 3h o s p i t a lo fp l a t h ee x p r e s s i o nl e v e l so f1 4 3 3 e p s i l o nw e r ed e t e c t e d b yr t - p c ra n dw e s t e r n b l o t t h er e l a t i o n s h i pb e t w e e n1 4 3 3 e p s i l o ne x p r e s s i o n l e v e l sa n dc l i n i c a ld a t aw a sa n a l y z e db ys t a t i s t i c a lm e t h o d s t h e1 4 3 - 3 e p s i l o n - g f pe x p r e s s i o nv e c t o rw a sc o n s t r u c t e da n dt r a n s f e c t e di n t o l a r y n g e a lc a r c i n o m ac e l ll i n eh e p 2 t h ee x p r e s s i o nl e v e l so f1 4 3 3 e p s i l o ni nh e p 一2 c e l l sb e f o r ea n da f t e rt r a n s f e c t i o nw e r et h e nd e t e c t e db yf l u o r e s c e n c em i c r o s c o p ea n d r t - p c r t h eb i o l o g i c a lc h a r a c t e r i s t i c so fh e p 一2c e l l st r a n s f e c t e dw i t h1 4 3 3 e p s i l o n ， i n v o l v i n gp r o l i f e r a t i o n ，c e l lc y c l e ，a p o p t o s i sa n di n v a s i o nw e r ea l s od e t e c t e db ym t t a s s a y , f l o wc y t o m e t r ya n dt r a n s w e l l ，r e s p e c t i v e l y r e s u l t s 1 t h em r n aa n dp r o t e i ne x p r e s s i o nl e v e l so f1 4 3 3 e p s i l o ni nl s c ct i s s u e s w e r es i g n i f i c a n t l yl o w e rt h a nt h o s ei nc l e a rs u r g i c a lm a r g i nt i s s u e s s t a t i s t i c a la n a l y s i s s h o w e dt h a t1 4 3 3 e p s i l o np r o t e i nl e v e li nt h em e t a s t a t i cl y m p hn o d e sw a sl o w e rt h a n t h a ti np a i r e dt u m o rt i s s u e s i na d d i t i o n ，t h ep r o t e i nl e v e lo f1 4 3 3 e p s i l o ni nc l i n i c a l s t a g ei i io ri vt u m o r sw a ss i g n i f i c a n t l yl o w e r t h a nt h a ti ns t a g eio ri it u m o r s 2 t h e1 4 3 3 e p s i l o n g f pe x p r e s s i o nv e c t o rw a ss u c c e s s f u l l yc o n s t r u c t e d ，w h i c h w a sv e r i f i e db yb g ti i - e c o r 1d i g e s t i o na n dd n a s e q u e n c i n g t h e1 4 3 3 e p s i l o ng e n e w a se x p r e s s e da sf u s i o n st ot h ec t e r m i n u so fg f p 3 c o m p a r e dt oc o n t r o lh e p 一2c e l l s ，t h ep e r c e n t a g e so fv i a b l ec e l l si nn e g a t i v e c o n t r o lo fg f pa n d1 4 3 3 e p s i l o n - g f pg r o u pw e r e71 6 84 - 12 10 a n d3 6 6 8 4 - 14 0 9 ，r e s p e c t i v e l y ( p o 0 5 ) 5 4 t h ep r o p o r t i o n so fsp h a s ew e r e2 2 4 7 士3 3 6 ，2 8 1 74 - 3 9 7 a n d4 6 1 5 士 6 8 2 ( p 0 0 5 ) ，a n dt h ea p o p t o t i cs u b - g 1p o p u l a t i o ni n c r e a s e df r o m1 2 34 - 1 0 2 ， 2 9 2 士1 5 9 t o1 3 7 2 士3 8 9 ( p 0 0 5 ) i nb l a n kc o n t r o l ，n e g a t i v ec o n t r o lo fg f p a n d1 4 3 3 e p s i l o n g f pg r o u p s ，r e s p e c t i v e l y 5 t h ep e r c e n t a g e so ft h ea p o p t o t i cc e l l sw e r e0 8 44 - 0 2 5 ，1 0 84 - 0 2 4 a n d 2 9 3 士0 13 ( p 0 0 5 ) i nb l a n kc o n t r o l ，n e g a t i v e c o n t r o lo fg f pa n d 1 4 3 3 e p s i l o n - g f pg r o u p s ，r e s p e c t i v e l y 6 t h en u m b e ro ft h ec e l l sp e n e t r a t i n gf i l t e rm e m b r a n ei nb l a n kc o n t r o l ，n e g a t i v e c o n t r o lo fg f pa n d1 4 3 3 e p s i l o n g f pg r o u p sw e r e2 0 6 54 - 1 9 4 ，17 6 34 - 1 0 4a n d 9 1 士0 2 4 ，r e s p e c t i v e l y ，w h i c hs h o w e ds i g n i f i c a n td i f f e r e n c ea m o n g t h ed i f f e r e n tg r o u p s ( p o 0 0 1 ) co n c l u s i o n 14 3 3 e p s i l o nh a st h ea b i l i t i e si np r o m o t i n ga p o p t o s i sa n di n h i b i t i n gi n v a s i v e n e s s o fl s c c d e c r e a s e de x p r e s s i o no f1 4 3 3 e p s i l o ng e n e i nl s c ct i s s u e sm i g h t c o n t r i b u t et oi n i t i a t i o na n da g g r e s s i o no fl s c c k e y w o r d s 14 3 ，3 e p s i l o n ；l s c c ；a p o p t o s i s ；i n v a s i v e n e s s ；sp h a s ea r r e s t s u p p o r t e db yt h en a t i o n a l n a t u r es c i e n c ef o u n d a t i o no fc h i n a ( 3 0 1 7 1 0 0 8 ， 3 0 7 0 0 9 8 0 ) ，n a t i o n a l8 6 3p r o j e c to fc h i n a ( 2 0 0 2 b a 7 11a 0 8 18 ) a n dn a t u r es c i e n c e f o u n d a t i o no fl i a o n i n gp r o v i n c e ( 2 0 0 9 2 110 ) 6 英文缩略语 7 论文 7 彳勺刁印s ii o n 在喉癌中表达和功能研究 刖舌 头颈部鳞状细胞癌( s q u a m o u sc e l lc a r c i n o m ao fh e a da n dn e c k ，s c c h n ) 被世 界公认为第六大肿瘤【l 】全世界每年新增病例5 0 多力【2 1 。喉癌不仅是重要头颈部 鳞状细胞癌之一，也是呼吸道第二大常见恶性肿瘤，占所有恶性肿瘤的2 3 嘣3 1 。 在荷兰和美国，每年大约分别有7 0 0 和1 0 0 0 0 的新发病例被诊断为喉癌【4 5 1 。喉癌 在我国发病率相对较低，约占全身肿瘤的l 5 ，在耳鼻喉领域中仅次于鼻咽癌 和鼻腔、鼻窦癌，居第三位。好发年龄为5 0 - - 7 0 岁，男性较女性多见，比例约为 8 ：1 。东北地区是我国喉癌的高发区域，过去1 0 年中，随着现代工业的发展，喉 癌的发病率呈现上升的趋势 6 - s l 。早期喉癌( i + i i 期) 通常以单纯放疗或手术切 除为主，对于进展期喉癌( i i i + 期) ，在世界范围内，全喉切除术仍然是首选的 治疗方法【9 】。 肿瘤的形成是多种复杂因素共同作用的结果，其中包括癌基因的激活和抑癌 基因的失澍1 0 】。目前，用于诊断喉癌的生物靶点仍然是未知的，但随着分子生物 学的发展，生物标志物将作为诊断肿瘤的新靶点，而对喉癌分子机制的研究将为 喉癌诊断提供更多的分子标志物。 5 氮杂胞苷( 5 - a z a c y t i d i n e ) 或5 一脱氧氮杂胞苷( 5 - a z a - d e o x y - c y t i d i n e ， 5 a z a c d r ) 是d n a 甲基转移酶抑制剂【l l 1 朗。5 氮杂胞苷通过降低基因启动子区 域的甲基化程度，使某些因启动子区被甲基化而失活的肿瘤抑制基因被重新激活， 可达到治疗肿瘤的目的【1 3 ，1 4 1 。 l j i 期，我们利用二维电泳( t w od i m e n s i o n a le l e c t r o p h o r e s i s ，2 d e ) 和质谱技 术以及丰富的生物信息资源建立了喉癌5 - a z a c d r 相关的基因蛋白表达谱，对 5 - a z a c d r 相关的差异蛋白点进行质谱鉴定和分析，发现1 4 3 3 e p s i l o n 是差异表 达显著的蛋白质之一，提示j 4 3 3 e p s i l o n 基因可能是喉癌发生过程中的一个重要 基因。 8 1 4 3 3 e p s i l o n 蛋白质是1 4 3 3 蛋白家族成员之一，属于酸性蛋白质，同时也 是生物进化过程中最保守的蛋白质之一，与1 4 3 3 蛋白家族其它成员相比， 1 4 3 3 e p s i l o n 蛋白质在不同的物种中具有高度的同源性。它参与多种生物过程的 调控，其中包括对细胞周期、细胞增殖以及细胞凋亡的调控，并且在神经发生以 及恶性肿瘤形成的过程中具有重要的作用【1 5 朋】。 目前，j 彳一3 3 e p s i l o n 基因在肿瘤( 包括喉癌) 发生中的功能以及调节机制并 不十分清楚，因此，本研究将通过对，乒3 3 e p s i l o n 基因在l s c c 中的表达及生物 特性的分析，探讨j 4 3 3 e p s i l o n 在喉癌发生和发展中的作用【2 0 1 。 一、实验材料 材料与方法 l 、组织来源 喉鳞癌( l s c c ) 标本取自解放军4 6 3 医院全军耳鼻喉中心，手术切取的癌组 织及距癌组织l 厘米以上的癌旁j 下常组织均经病理诊断证实。所有喉癌标本根据 i u a c ( i n t e r n a t i o n a lu n i o na g a i n s tc a n c e r ) 标准进行临床分期，患者术前均未接受 放疗或化疗。标本术后立即置于7 0 c 冰箱中保存。 表1 ，临床病例资料 m l b l e1 ，c h a r a c t e r i s t i c so fp a t i e n t s 病例信息 病例数共1 0 1 例( 1 0 0 ) 年龄 i a e i n0 0 0 z ； 1 1 2 ：i n 士堆轻辈v n l i mu o l ! e d a e f 矽，七b 游爵菇群瞠游爵群捅孙嗽弭3 d 一工乙固 h o | s d a - 一秒1 u ! t , m - g d q o s z d q 0 0 s 。( 擎) ( 9 0 0 8 0 0 o = d ) 游 爵掰牲箬群士斟导酉士冰娶擎朝v n l t t uu o l ! s d a f 。f 。1 , 1 审游彤群杪杪乙。0 千乙乙8 9 i 紧哥羽窜坼觇士朝聊，。移动u o l ! s d a e f l i 七b 砺砀鬈群8 e 6 0 。0 千t r s z ；6 0 椠耳羽习形 钉士朝叩了抄动u o l ! s d a f f p i 七b 谤砺群驻髯擗髟杀* 殇。( 乙国) 取擎朝v n l i t u u o l ! g d a e f p l 翠掣簖d 砺爵箬群唑谤彤群群辆孙嘞e l 翠些酉酱粝 r i d d - , l t 1 凿密噬碑士水娶辈v n 删u o l ! s 内，一 酱密砸鼍 a a trtr tr t u b u l i n 14 - 3 - 3 e p s u o n 图3 ，w e s t e mb l o t 检测喉鳞癌组织与癌旁组织中1 4 3 3 e p s i l o n 蛋白质表达水 平 t ：喉鳞癌组织；r ：癌旁组织 f i g 3 ，j f 4 3 3 e p s i l o np r o t e i nl e v e l so fl s c ca n dc l e a rs u r g i c a lm a r g i nt i s s u e s d e t e c t e db yw e s t e r nb l o t t ：t u m o rt i s s u e ；r ：c l e a rs u r g i c a lm a r g i nt i s s u e 表3 ，j ，4 3 3 e p s i l o nm r n a 和蛋白质在癌组织及癌旁正常组织中的表达水平 t a b l e 3 ，e x p r e s s i o nl e v e l so f1 4 3 3 e p s i l o nm r n aa n dp r o t e i ni nl s c ca n d c l e a rs u r g i c a lm a r g i nt i s s u e s ( g r a ys c a l er a t i o ，m e a n + s e m ) l4 3 3 e p s i l o nm r n a 1 4 3 3 e p s i l o n 蛋白质 例数7 2 1 0 1 肿瘤组平均灰度比值 0 9 2 8 4 士0 0 9 3 8 1 8 0 0 3 士o 1 8 6 7 癌旁组平均灰度比值 1 6 8 2 2 士0 2 4 4 7 2 9 3 2 8 士0 3 6 7 5 p 值0 0 0 8 0 0 0 2 三、喉癌组织中，争撕s i l o n 表达水平的临床分析结果 统计学分析结果表明，j 4 3 3 e p s i l o nm r n a 与蛋白质的表达水平无相关关系 ( r = 0 0 6 7 ，p = 0 5 7 7 0 0 5 ) ，并且在不同性别及年龄组的喉癌组织中，j 4 3 3 e p s i l o n 的表达水平无显著差异。在不同临床分期的喉癌组织中，j 4 3 3 e p s i l o nm r n a 表 达水平无显著差异，但j 4 3 3 e p s i l o n 蛋白质在i l i 期或i v 期喉