束永前胃癌新ppt课件.ppt

驱动基因及非编码RNA在胃癌研究及临床中的应用,束永前江苏省人民医院南京医科大学第一附属医院2019年12月14日,1,目录,2,晚期胃癌化疗药物,氟脲嘧啶类：5-Fu、卡培他滨、S-1紫杉醇类：紫杉醇、多西紫杉醇铂类：顺铂、奥沙利铂拓扑异构酶I抑制剂：伊立替康蒽环类：表柔比星,3,化疗药物常见biomarker,Miszczaletal.JExpclinCancer.Res，2008MeropoletalJClinOncol，2006Ichikawaetal.IntJCancer.2006,4,化疗药物常见biomarker,LuM,GaoJ,WangXC,ShenL.ChinJCancerRes.2011；Uranoetal.IntJOncol.2006Pandaetal.JMedChem.2011；Hirakawaetal.CancerChemotherPharmacol.2013,5,Challenge,胃癌化疗敏感性的biomarker研究多为回顾性研究尚无大型前瞻性研究加以验证上述biomarker的有效性一项肺癌biomarker指导下化疗前瞻性研究结果为阴性胃癌异质性强，信号通路复杂，靠1-2种biomaker预测一类药物敏感性不可靠,6,胃癌的分型,7,胃癌组织学分型与分子生物学,WHO,乳头状腺癌管状腺癌粘液腺癌低分化腺癌印戒细胞癌,Lauren,肠型未分化弥漫型,MattiV,etal.BestPractice20(4):651-674.,8,胃癌组织学分型与分子生物学,MattiV,etal.BestPractice20(4):651-674.,弥漫型胃癌遗传，10%-20%基因错误,肠型胃癌后天，80%-90%基因错误,正常,“遗传易感性”CHD1遗传突变,幽门螺旋杆菌,胃炎非萎缩性浅表,萎缩性胃炎肠化生,表达：CDX1/2COX-2hTERT,腺瘤增生,甲基化：CHD1，DAP-K，HRASLS，LOX，MGMT，p14，RAB-扩增：c-MET，K-SAM突变：CHD1，TP53表达：hTERT,CIMP/微卫星不稳定性甲基化：p16，COX-2，GSTP1，hMLH1，RASSF1A，RUNX3,TFF1扩增：Her2突变：K-RAS，TP53杂合性缺失：APC，MCC,TP53,突变：APC，TP53甲基化：APC，CDH1，DAP-KhMLH1，p14，THBS1，TIMP3表达：EGFR，TNF-,9,不同Lauren分型对化疗敏感性不同,1.WasaburoK,etal.LancetOncol2008;9:215221.；2.SeongHyunJeong,DigDisSci(2011)56:1311383.Shen,etal.JournalofTranslationalMedicine2013;11:73；4.YasunoriE,etal.SurgToday2008;38(11):1013-1020.5.WataruICHIKAWA,etal.Int.J.Cancer2004;112:967973,10,胃癌分子分型,EB病毒（EBV）感染型胃癌微卫星不稳定（MSI）型胃癌基因组稳定（GS）型胃癌染色体不稳定（CIN）型胃癌,11,CancerGenomeAtlasResearchNetwork.Nature.2014,12,CancerGenomeAtlasResearchNetwork.Nature.2014,13,胃癌四种分子分型的临床特征,CancerGenomeAtlasResearchNetwork.Nature.2014,14,胃癌四种分子分型的分子特征,CancerGenomeAtlasResearchNetwork.Nature.2014,15,常见位点体细胞拷贝数和突变情况,CancerGenomeAtlasResearchNetwork.Nature.2014,16,常见位点体细胞拷贝数和突变情况,CIN型胃癌：存在可靶向的RTK基因扩增。VEGFA基因扩增多见，抗血管生成作用明显。靶向VEGFR2的抗体ramucirumab对此型胃癌可显示出抗肿瘤作用，而其疗效是否由VEGFA基因扩增决定则有待验证。MSI型胃癌：未发现MSI型结直肠癌中的BRAFV600E基因突变，取而代之的则是可靶向的PIK3CA、ERBB3、ERBB2和EGFR基因突变。EBV型胃癌：DNA超甲基化（如CIMP），且PIK3CA基因突变频率高，PI3K抑制剂在EBV型胃癌中的疗效将成为研究重点。此外，此型胃癌中PD-L1/2水平升高，提示PD-L1/2拮抗剂可成为此类患者的治疗新选择。GS型胃癌：CDH1、ARID1A、RHOA基因突变或RHO家族GTP酶活化蛋白基因融合现象（CLDN18-ARHGAP融合）。GTP酶中的RHO家族有调节肌球蛋白动力及包括黏附、增殖和生存在内的细胞行为。RHOA信号通路与肿瘤细胞侵袭和转移密切相关，因而此型胃癌将关注转移相关研究。,CancerGenomeAtlasResearchNetwork.Nature.2014,17,不同亚型中驱动基因表达率,CancerGenomeAtlasResearchNetwork.Nature.2014,18,四亚型主要特征,CancerGenomeAtlasResearchNetwork.Nature.2014,19,胃癌靶向治疗,NatRevClinOncol.2013Nov;10(11):643-55.,20,小结,以肿瘤分子表达为特征的分子病理分型与个体化治疗密切相关。分型的不断发展，将对胃癌治疗的药物选择更有指导价值。分子分型将指导个体化治疗和靶向药物临床试验。,21,非编码RNA的定义及分类,22,真核生物转录组及非编码RNA的概况,23,非编码RNA在不同物种表达,LanderE.Nature,2001TaftRandMattickJ.Bioessays,2007,24,ncRNA可能是基因调控网络的重要元件,ncRNA,25,MiRNA在胃癌诊断中的价值,ZhuX,etal.DigDisSci,2013,合并敏感性：0.78(95%CI0.710.85),合并特异性0.89(95%CI0.820.94),合并的AUC：0.91.,Mir21文献报道最多,循环血液的microRNA可以作为检测胃癌的重要诊断指标,对已报道mir21的ROC曲线进行Meta分析,循环血液中mir21可作为胃癌的biomaker,26,MiRNA在胃癌治疗中的价值,Hummeletal.EJC2010,miR15b,miR16的上调可以增加多药耐药的胃癌细胞对长春新碱、阿霉素、顺铂及依托泊苷的敏感性。上调mir34a可以增强P53突变的胃癌细胞对阿霉素、铂类、吉西他滨、紫杉醇的化疗敏感性。,27,LncRNA在胃癌中的诊断价值,Songetal.JournalofTranslationalMedicine2013,lncRNA芯片,ROC曲线显示H19的曲线下面积为0.613；UC001为0.751；两者的联合为0.761.说明H19和UC001对胃癌的诊断有一定的辅助作用,28,LncRNA在胃癌中的预后价值,Sunetal.TumorBiol.(2014)35:1065-1073,MEG3癌组织表达下调,MEG3表达高低与肿瘤大小相关,MEG3表达高低与病人分期相关,MEG3表达高低与病人预后相关,29,科研新成果,我们鉴定了两条与胃癌发生发展相关的长非编码RNA：第一条：TINCR（与胃癌细胞增殖及凋亡相关）第二条：FENDRR（与胃癌的侵袭转移相关）,30,SP1-inducedupregulationofthelongnoncodingRNATINCRregulatescellproliferationandapoptosisbyaffectingKLF2mRNAstabilityingastriccancer束永前等.Oncogene.2015Mar2.doi:10.1038,31,本研究显示：1.胃癌组织及细胞中TINCR的表达出现明显的上调,且TINCR的表达水平与胃癌病人的临床分期，肿瘤的转移及术后生存期存在明显的相关性2.癌组织中TINCR的表达上调与转录因子SP1的激活相关3.TINCR能促进胃癌细胞的增殖并抑制凋亡4.TINCR可以通过调控KLF2mRNA的稳定性影响KLF2，P21及P15的表达。,32,TINCR在胃癌组织及细胞系中的表达和其启动子结合位点分析,T在癌组织和细胞系表达上调,T启动子与转录因子SP1结合位点验证,33,TINCR与病理分期的关系,34,TINCR在胃癌中的预后和诊断价值,T表达高的病人预后较差T高表达病人中位DFS：21月T低表达病人中位DFS：29.7月,TINCR的ROC曲线灵敏度：0.65特异度：0.782曲线下面积=0.701,35,TINCR对BGC923和SGC7901增殖和凋亡的影响,MTT实验,克隆形成实验,细胞周期实验,流式细胞仪实验,WB实验,36,TINCR通过影响KLF2，P21,P15表达调节细胞周期和凋亡,RNA转录组测序,KEGG数据库,GO数据库,qPCR实验,qPCR实验,WB实验,37,TINCR与胞浆蛋白STAU1相互作用形成复合物影响KLF2mRNA的稳定性和表达,RNAIP实验,Pulldown实验,38,KLF2对胃癌细胞系的增殖和凋亡的影响及其机制,MTT实验,克隆形成实验,流式细胞仪实验,动物实验,WB,qChIP,qChIP,39,胃癌组织及细胞系中KLF2表达水平,RT-PCR,qPCR,IHC,KLF2与临床分期,KLF2与预后,KLF2与TINCR相关性,40,动物实验验证TINCR的功能和KLF2，P21及P15的表达,41,42,Decreasedexpressionofthelongnon-codingRNAFENDRRisassociatedwithpoorprognosisingastriccancerandFENDRRregulatesgastriccancercellmetastasisbyaffectingfibronectin1expression.束永前等.JHematolOncol.2014Aug29;7:63.,43,本研究显示：1.胃癌组织及细胞中FENDRR的表达出现明显的下调,且FENDRR的表达水平与胃癌病人的临床分期，肿瘤的转移及术后生存期存在明显的相关性2.癌组织中FENDRR的表达下调与组蛋白去乙酰化相关3.FENDRR的表达下调能显著促进胃癌细胞的转移能力4.FENDRR同时在mRNA及蛋白水平调控靶基因FN1的表达。,44,FENDRR在胃癌组织及细胞系中低表达,F在癌组织表达下调,F在胃癌组织系表达下调,F的过表达及敲低效率,45,FENDRR的表达与胃癌的侵袭深度及淋巴结转移相关,46,FENDRR的低表达预示着病人的预后较差,47,48,组蛋白的去乙酰化可能与FENDRR的低表达相关,49,FENDRR在胃癌细胞中功能的鉴定（结果表明对细胞的增殖影响不大）,803-NC,803-F,823-NC,823-F,MTT实验,克隆形成,细胞周期,50,FENDRR可以抑制胃癌细胞的侵袭及转移,划痕实验,TRANSWELL实验,51,FENDRR在体内也可以抑制胃癌的侵袭及转移,52,FENDRR可以抑制FN1（粘连蛋白）的表达