高考生物生物技术实践课时分层集训35无菌操作技术苏教版.docx

课时分层集训训(三十五)(建议用时：45分钟)A组基础达标1(2018广东惠州模拟)日前微博传言手机细菌比马桶多。如图，央视和北京卫视通过实验展示调查结果。回答下列相关问题：(1)该实验需制备培养基，培养基一般都含有水、碳源、_。(2)据图，两电视台均采用_法接种，该方法需要_(多选)。A接种环 B酒精灯C移液管D涂布器E无菌水(3)通过观察菌落的_，可知手机屏幕和马桶按钮都存在多种微生物。两电视台实验操作均正确且完全一致，但报道结果截然不同，你认为原因是：_。(4)按图操作取样面积，实验员测定某手机屏幕的细菌数量，将10 mL菌悬液进行梯度稀释，分别取0.1 mL稀释倍数为102的样品液接种到三个培养基上，培养一段时间后，统计菌落数分别为48、50、52，则该手机屏幕的细菌数为_个/平方厘米。该实验对照组该如何设置_。解析(1)微生物培养基的成分一般包括水、碳源、氮源和无机盐。(2)根据图形分析，该实验的接种方法为稀释涂布平板法，该方法用到的工具有酒精灯、移液管、涂布器、无菌水等。(3)不同的菌落形态、大小不同，图示两个电视台调查的手机屏幕和马桶按钮都有多种形态的菌落，即存在多种微生物。两电视台实验操作均正确且完全一致，但报道结果截然不同，可能是因为手机的取样和马桶的取样都不相同。(4)根据提供的数据进行计算，某手机屏幕的细菌数(485052)31020.110(55)2104(个/平方厘米)。答案(1)氮源和无机盐(2)稀释涂布平板BCDE(3)形态、大小手机的取样和马桶的取样都不相同(4)2104取培养基涂布0.1 mL无菌水进行培养2.如图是某细菌纯化培养过程中划线接种的培养结果。回答下列问题。(1)在_(填图中编号)区域出现了单个菌落，产生每个菌落的最初细菌数目是_个细菌。据图分析，在培养基上划线接种时，划线的顺序依次是_(用编号表示)。(2)下表是某微生物培养基成分。编号成分含量编号成分含量粉状硫10 g(NH4)2SO40.4 gK2HPO44 gMgSO49.25 gFeSO40.5 gCaCl20.5 gH2O100 mL若培养从土壤中分离出来的自生固氮菌，该培养基应添加_，去除_。若要鉴别纤维素分解菌，可用_法，若要鉴别尿素分解菌，可在培养液中加入_。解析(1)从图中可知，号区域出现了单个菌落；1个菌落最初是由1个细菌形成；根据线条数量可判断，划线的顺序依次是。(2)自生固氮菌是异养生物，能自身固氮而获得氮源，但自身无法获得碳源，因而培养基中应添加碳源去掉氮源。鉴别纤维素分解菌可用刚果红染色法，要鉴别尿素分解菌，可在培养液中加入酚红指示剂。答案(1)1(2)碳源氮源刚果红染色酚红指示剂3(2016四川高考)图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA部分序列。(1)图中选择培养基应以_为唯一氮源；鉴别培养基还需添加_作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成_色。(2)在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。该过程采取的接种方法是_，每克土壤样品中的细菌数量为_108个；与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较_。(3)现有一菌株的脲酶由于基因突变而失活，突变后基因转录的mRNA在图乙箭头所示位置增加了70个核苷酸，使图乙序列中出现终止密码(终止密码有UAG、UGA和UAA)。突变基因转录的mRNA中，终止密码为_，突变基因表达的蛋白含_个氨基酸。解析(1)脲酶能够催化尿素水解释放出氨和二氧化碳，因此选择培养基中应以尿素为唯一氮源。挑取单菌落接种到加有酚红指示剂的鉴别培养基中，培养一段时间后，菌落周围的氨增加，pH升高，酚红指示剂将变红。(2)该过程采取的接种方法为稀释涂布平板法。利用稀释涂布平板计数法对细菌进行计数时，应选择菌落数在30300的平板，因此平板上长出的细菌菌落平均数为(156178191)3175个。每克土壤样品中的细菌数为1750.11051.75108。血细胞计数板计数法能将死细胞计算在内，而稀释涂布平板计数法只能计数活细胞(只有活细胞才能在平板上生长)，故一般血细胞计数板计数法要比稀释涂布平板计数法的结果大。(3)箭头处插入70个核苷酸，箭头后密码子的解读方式为*AG，UGA，GAA对比3种终止密码可发现，此处的终止密码为UGA。从起始密码到终止密码之前共有27372个碱基，因此突变基因表达的蛋白含115个氨基酸。答案(1)尿素酚红红(2)稀释涂布平板法1.75少(3)UGA1154(2018广西桂林第一次联合调研)有机磷农药是用于防治植物病虫害的含磷有机化合物，广泛应用于农业生产中，有时会造成瓜果蔬菜等食品农药残留超标，不少品种对人、畜的毒性很强，人误食后如不及时医治就会危及生命，某班同学欲从土壤中分离高效降解有机磷农药的微生物。请回答下列问题： 【导学号：41780165】(1)为了获得能降解有机磷农药的微生物菌种，可在被有机磷农药污染的土壤中取样，并在含有碳源、氮源及_等的选择培养基上添加_进行选择培养。(2)将获得的3种待选微生物菌种甲、乙、丙分别接种在1 L含20 mg有机磷农药的相同培养液中培养(培养液中其他营养物质充裕、条件适宜)，观察实验开始到微生物停止生长所用的时间，甲、乙、丙分别为32小时、45小时、16小时，则应选择微生物_(填“甲”“乙”或“丙”)作为菌种进行后续培养，理由是_。(3)制备固体培养基的基本步骤是计算_溶化分装加棉塞包扎_倒平板。(4)若要测定培养液中选定菌种的菌体数，既可在显微镜下用_直接计数，也可选用_法统计活菌数目。解析(1)微生物生长所需要的营养一般包括水、无机盐、碳源和氮源。因筛选能降解有机磷农药的微生物，故培养基中需添加适量的有机磷农药。(2)从观察实验开始到微生物停止生长；丙所用时间最短，说明其对有机磷农药的降解能力较甲、乙强。(3)制备固体培养的基本步骤是计算称量溶化分装加棉塞包扎高压蒸汽灭菌倒平板。(4)菌体数测定可通过显微镜利用血细胞计数板直接计数，也可以利用稀释涂布平板法统计活菌数量。答案(1)水和无机盐 有机磷农药(2)丙微生物丙分解有机磷农药的能力比甲、乙强(3)称量高压蒸汽灭菌(4)血细胞计数板稀释涂布平板52016年7月郑州市卫生计生委发布的第3期卫生监测信息显示有15家美容美发场所的毛巾、理发(美容)用具大肠杆菌严重超标。如图甲为大肠杆菌含量检测操作简图，图乙为伊红美蓝培养基配方。 图甲图乙回答下列相关问题：(1)图甲中滤膜的孔径应_(填“大于”或“小于”)大肠杆菌。受此启发，对某些不耐高温的试剂可以怎样除菌？_。(2)配制图乙中的基础培养基时，除了水分、无机盐以外，还应加入_(一种营养成分)，以及_。待各成分都溶化后和分装前，要进行的是_和灭菌，对培养基进行灭菌的常用器具是_。倒平板时要待平板冷凝后，将平板倒置，其主要原因是_。伊红美蓝培养基上生长的大肠杆菌菌落呈现黑色，从功能上划分，该培养基属于_培养基。(3)用平板划线法分离样液中的大肠杆菌，操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线的目的是_。要检测样液中的大肠杆菌含量，取25 cm2毛巾样本，加5 mL蒸馏水，浸润半小时，然后在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL样液；在37 的培养箱中放置48小时，3个平板上的黑色菌落数分别为49、48和47。据此可得出25 cm2毛巾样液中的活菌数为_。解析(1)图甲中滤膜的孔径应小于大肠杆菌，滤膜过滤才能获得大肠杆菌，对不耐高温的试剂除菌时无法用高压蒸汽灭菌法，可以用滤膜过滤达到除菌目的。(2)配制图乙中的基础培养基时，除了水分、无机盐以外，还应加入氮源以及琼脂。配制的培养基在溶化后和分装前需要先进行调pH和灭菌。高压蒸汽灭菌法常用高压蒸汽灭菌锅对培养基等进行灭菌。倒平板后将平板倒置的主要原因是防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染。从功能上划分，伊红美蓝培养基属于鉴别培养基。(3)接种环灼烧灭菌后，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线的目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。在伊红美蓝培养基上，大肠杆菌的菌落呈黑色，据题意可知，25 cm2毛巾样本中的活菌数为(494847)30.152.4103。答案(1)小于用滤膜过滤除菌(2)氮源琼脂调整pH高压蒸汽灭菌锅防止培养血盖上的冷凝水落入培养基造成污染鉴别(3)将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落2.41036(2018河南郑州二测)某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下。将各种物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL，再经高温灭菌，制成固体培养基备用。KH2PO4Na2HPO4MgSO47H2O蛋白胨葡萄糖尿素琼脂1.4 g2.1 g0.2 g1.0 g10.0 g1.0 g15.0 g(1)根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌？_(填“能”或“不能”)原因是_。(2)通常培养基用_方法灭菌，培养皿用_方法灭菌，待培养基冷却到_(填“20”“30”“40”或“50”)左右时，在_附近倒平板，等平板冷却凝固后，将平板倒过来放置，可以防止_，以免造成污染。(3)要统计每克土壤样品中活菌数目，宜采用_法接种，根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的_就能大约推测出样品中活菌数。(4)培养分解尿素的细菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_。(5)实验中使用过的培养基及其培养物必须经过_处理后才能丢弃，以防止微生物的扩散。解析(1)因培养基中有尿素以外的氮源蛋白胨，故该培养基不能用于分离土壤中分解尿素的细菌。(2)培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌。平板冷却凝固后倒置可防止培养皿皿盖上的水珠落入培养基造成污染。(3)稀释涂布平板法接种可用于菌体计数。因每个菌落均由单个菌体繁殖形成，故可以统计平板上的菌落数而推测出样品中的活菌数目。(4)将未接种的培养基在适宜温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生从而判断培养基是否被污染。(5)实验中使用过的培养基及其培养物必须进行灭菌处理，以防微生物污染环境。答案(1)不能培养基含蛋白胨，尿素不是唯一氮源，不能选择出只以尿素为氮源的微生物(培养基含蛋白胨，蛋白胨中含有氮元素)(2)高压蒸汽灭菌干热灭菌50酒精灯火焰培养皿皿盖上的水珠落入培养基(3)稀释涂布平板菌落数目(4)将未接种的培养基在适宜温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生(5)灭菌B组能力提升7(2018山东枣庄一模)运用所学知识回答下列与生物技术实践相关的问题。(1)某科普实验小组欲从石油污染的水域中筛选出能高效降解石油的微生物。请回答：从水体中分离纯化菌种时，若要获得纯净的菌株，常采用平板划线的方法进行接种，此过程所用的接种工具是_，操作时采用_灭菌的方法。在筛选过程中，应将菌液接种于以石油为唯一碳源的固体培养基上，在微生物培养前，需对培养基进行_，该培养基从功能上看属于_。(2)葡萄皮、籽中含有原花青素、葡萄皮红素和大量葡萄风味物质等，这些物质易溶于乙醇、乙酸乙酯中，因此常采用_法来分离提取，还可以用_和蒸馏等提取植物芳香油的方法。解析(1)平板划线法用接种环接种，接种环采用灼烧灭菌的方法灭菌。培养基要进行高压蒸汽灭菌。以石油为唯一碳源的固体培养基属于选择培养基。(2)葡萄皮、籽中含有原花青素、葡萄皮红素和大量葡萄风味物质等，这些物质易溶于乙醇、乙酸乙酯中，因此常采用有机溶剂萃取法来分离提取，除了萃取，还有压榨和蒸馏等方法。答案(1)接种环灼烧灭菌选择培养基(2)萃取压榨8(2018湖北调研)欲从腐乳中分离筛选出产蛋白酶活力高的毛霉菌株，设计了如下实验流程：回答下列问题：(1)毛霉属于_核生物。在腐乳制作中，主要利用毛霉等微生物产生的_酶将豆腐中的蛋白质和脂肪分解为小分子物质。(2)步骤进行涂布前，需将孢子悬浮液进行梯度稀释，进行梯度稀释的目的是_。若进行10倍稀释，一般吸取1 mL悬浮液注入_中，混匀。(3)孟加拉红培养基常用于分离霉菌及酵母菌，在孟加拉红培养基中加入氯酶素可以抑制细菌的生长。从功能上看，孟加拉红培养基属于_培养基。(4)毛霉产生的酶能将酪蛋白分解而产生透明圈，在酪蛋白培养基中筛选到三个单菌落甲、乙、丙，其菌落直径分别为3.2 cm、2.8 cm、2.9 cm，其菌落与透明圈一起的直径分别为3.7 cm、3.5 cm、3.3 cm。应选择菌落_作为产蛋白酶活力高的毛霉候选菌。解析(1)毛霉属于真核生物。在腐乳制作中，主要利用毛霉等微生物产生的蛋白酶和脂肪酶将豆腐中的蛋白质和脂肪分解为小分子物质。(2)将孢子悬浮液进行梯度稀释的目的是增加悬浮液的稀释度，涂布培养能分离到单菌落。若进行10倍稀释，一般吸取1 mL悬浮液注入9 mL无菌水中，混匀。(3)孟加拉红培养基常用于分离霉菌及酵母菌，据此可知：从功能上看，孟加拉红培养基属于选择培养基。(4)毛霉产生的酶能将酪蛋白分解而产生透明圈，透明圈与菌落直径的比值反映了毛霉菌株产蛋白酶活力的能力，因此应挑选透明圈与菌落直径比值最大的菌体。依题意可知：筛选到的三个单菌落甲、乙、丙的透明圈与菌落直径的比值最大的为乙，所以应选择菌落乙作为产蛋白酶活力高的毛霉候选菌。答案(1)真蛋白酶和脂肪(2)增加悬浮液的稀释度，涂布培养能分离到单菌数9 mL无菌水(3)选择(4)乙9(2013全国卷)临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致