（食品科学专业论文）苦瓜皂甙及多糖的开发利用研究.pdf

江苏大学硕士学位论文 摘要 苦瓜是我国种植历史悠久的瓜菜之一，古今中外都有药食兼用之说。现代研 究表明，苦瓜具有显著的降糖功能。本文针对苦瓜中降糖成分简便快速的定性定 量检测方法和提取苦瓜降糖成分的工业化生产工艺展开了研究，主要研究内容和 结论如下： 1 研究制备了苦瓜皂甙单体和苦瓜均一多糖组分。采用甲醇回流浸提苦瓜 总皂甙，并经反复硅胶柱分离纯化，获得苦瓜皂甙单体m o r d i c o s i d ea 。采用 d e a e - 5 2 纤维素柱层析和s e p h a d e xg 一1 0 0 凝胶柱层析分离纯化，得到苦瓜多糖m c p ： 和m c p 。， s e p h a r o s e6 b - c l 凝胶柱层析和醋酸纤维膜电泳检测证明为均一组分。 气相色谱法和薄层层析法测定其单糖组成，凝胶过滤法测定其相对分子质量，结 果表明，苦瓜多糖m c p 2 为一半乳聚糖，m c p 。含有半乳糖、木糖、鼠李糖、阿拉伯 糖，二者平均相对分子质量分别为5 3 7 1 0 4 ，9 6 5 1 0 4 d a l 。 2 建立了苦瓜总皂甙和苦瓜多糖的测定方法。以苦瓜皂甙m o r d i c o s i d ea 为对 照品，选择波长5 4 5 n m ，香草醛、高氯酸显色测定苦瓜总皂甙含量；利用精制苦 瓜多糖测得其对葡萄糖的校正系数后，采用改良的苯酚一硫酸法测定多糖含量。 利用比色法测定总皂甙和多糖的方法适用于苦瓜制品生产企业的常规检测。 3 研究了苦瓜皂甙的有机溶剂提取方法和树脂吸附提取方法。通过分光光 度法及薄层层析对两种方法所提取的苦瓜皂甙的含量和纯度进行了对比。结果表 明，树脂吸附法提取率略高且步骤相对简单。 4 研究了苦瓜汁冻干工艺。得到了苦瓜汁的真空冻干曲线，并对真空冻干苦 瓜粉与鲜苦瓜汁所含的苦瓜总皂甙含量等指标进行了对比。结果表明，真空冷冻 干燥能较好地保持苦瓜的生物活性成分。 5 研究了苦瓜汁的喷雾干燥工艺。采用外循环蒸发器对苦瓜原汁进行低温浓 缩，有效保持了苦瓜汁中热敏性成分。采用喷雾干燥与喷雾制粒相结合的工艺， 以苦瓜汁自身喷雾干燥粉为晶种，使得产品纯度得到提高。喷雾干燥优化工艺为 进风温度1 3 5 ，出风温度6 0 。喷雾造粒工艺的优化条件为进风温度8 5 。c ， 出风温度6 0 ，二次进风温度9 5 。 关键词：苦瓜，皂甙，多糖，提取，工艺，测定 i a b s t r a c t m o m o r 破c ac h a r a n t i al ( m c ) i sp l a n t e di no u rc o u n t r ya s v e g e t a b l ea n d m e d i c i n ei nc h i n aa sw e l li nt h ew o r l d m o d e mr e s e a r c h e sr e v e a l e dt h a tm cc a n r e g u l a t eb l o o dg l u c o s ee v i d e n t l y i nt h i sp a p e r ，t h eq u i c ka n dc o n v e n i e n tm e t h o dw a s s t u d i e di nq u a n t i t a t i v ea n dq u a l i t a t i v em e a s u r e m e n to ft h eh y p o g l y c e m i ce l e m e n t so f b a l s a mp e a ra n di t s p r o d u c t s ，a n di nt h et e c h n i q u eo fe x t r a c t i n gi t sh y p o g l y c e m i c e l e m e n t s t h er e s e a r c hp r o c e s sa n dt h em a i nc o n c l u s i o n sa r ep r e s e n t e da st h e f o l l o w i n g ： 1 m o m o r d i c ac h a r a n t i al s a p o n i n sw e r ee x t r a c t e du s i n gac o n t i n u o u st h e r m a l m e o hr e f l u x m o r d i c o s i d eaw a so b t a i n e df r o mt h es a p o n i n s b yi s o l a t i o na n d p u r i f i c a t i o nw i t hs i l i c ag e lc o l u m n p o l y s a c c h a r i d eo fm cw a sp u r i f i e db yd e a e 5 2 a n ds e p h a d e xg 一10 0 t h ec o m p o n e n t so ft h es a c c h a r i d ew e r ed e t e r m i n e db yg ca n d t l c a n dt h e i rm w sw a sm e a s u r e db yg e lf i l t r a t i o n t h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h e m c p 4c o n t a i n sr h a m n o s e ，g a l a c t o s e ，x y l o s ea n da r a b i n o s ea n dm c p 2c o n t a i n s g a l a c t o s e t h e i ra v e r a g em w s w e r ee s t i m a t e dt ob e5 3 7 x 1 0 4a n d9 6 5 1 0 4d a l 2 am e t h o df o rd e t e r m i n a t i o no ns a p o n i n so fm cw a se s t a b l i s h e d ：t a k i n g m o r d i c o s i d eaa ss t a n d a r ds a m p l ea n ds e l e c t i n g5 4 5 n mw a v e l e n g t hb ys p e c t r o m e t r i c m e t h o d t h ec o n t e n to fm cp o l y s a c c h a r i d ew a sm e a s u r e d b yi m p r o v e d p h e n o l s u l f u r i ca c i dm e t h o d t h e s em e t h o d sa r es i m p l e ，b e i n gs u i t a b l ef o rt h eq u a l i t y e v a l u a t i o no fm cm a t e r i a la n d p r o d u c t s 3 t w om e t h o d sw e r es t u d i e di ne x t r a c t i o no fm c s a p o n i n s o n ei st h eo r g a n i c r e a g e n tm e t h o da n dt h eo t h e ri sa d s o r p t i o nc h r o m a t o g r a p h yb yr e s i nc o l u m n b e t w e e n t h et w oe x t r a c t i o nm e t h o d s ，ac o m p a r i s o nw a sm a d ew i t ht h eh e l po fa n a l y s i so fu v a n dt l c t h er e s u l t ss h o wt h a ta d s o r p t i o nc h r o m a t o g r a p h ym e t h o di ss i m p l ea n d a d v a n t a g e o u si ni m p r o v i n ge x t r a c t i v ey i e l d 4 f r e e z ed r y i n gt e c h n i q u e so fm c j u i c ew e r es t u d i e d av a c u u mf r e e z e d r y i n g c u r v ew a so b t a i n e d t h ec o n t e n t so f s a p o n i n si nt h ef r e e z e - d r i e dp o w e ra n dt h a ti nt h e i i 江苏大学硕士学位论文 f r e s hj u i c ew e r ec o m p a r e d t h er e s u l t ss h o wt h a tt h em e t h o do fv a c u u l t lf r e e z e - d r y i n g i sa d v a n t a g e o u si np r e s e r v i n gb i o l o g i c a la c t i v i t i e so fm c j u i c e 5 s p r a yd r y i n go fm cj u i c ei nd i f f e r e n td r y i n ga i d sa n do p e r a t i o nc o n d i t i o n s w e r es t u d i e d v a c u u mc o c e n t r a t i n gi sa na d v a n t a g e o u st e c h n i q u ei n p r e s e r v i n g b i o l o g i c a la c t i v i t i e so fm cj u i c e i no r d e rt oi m p r o v et h ep u r i t yo fp r o d u c t s ，a c o m b i n a t i v et e c h n o l o g yo fs p r a y d r y i n ga n ds p r a yp r i l l i n gw a sa d o p t e d ，u s i n gt h e m c j u i c ep o w d e r s a st h ec r y s t a ls e e d s t h er e s u l t ss h o wt h a tt h eo p t i m a lc o n d i t i o n so f s p r a y d r y i n ga r ea sf o l l o w s ：h o ta i rt e m p e r a t u r ei s 135 c ，o u t l e ta i rt e m p e r a t u r ei s 6 0 。c ，f e e dr a t ei s2 4m l m i n ，a i rp r e s s u r ei s0 2 7 5m p a a n dt h eo p t i m a lc o n d i t i o n s f o rs p r a yp r i l l i n ga r el i s t e da sf o l l o w s ：i n l e th o ta i rt e m p e r a t u r ei s8 5 。c ，o u t l e t t e m p e r a t u r ei s6 0 c ，a n dt h es e c o n di n l e ta i rt e m p e r a t u r ei s9 5 。c k e y w o r d s ：m o m o r d i c ac h a r a n t i al ，s a p o n i n s ，p o l y s a c c h a r i d e ，e x t r a c t i o n ， t e c h n i q u e s ，d e t e r m i n a t i o n i i i 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定， 同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版， 允许论文被查阅和借阅。本人授权江苏大学可以将本学位论文的全部 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手 段保存和汇编本学位论文。 保密团 本学位论文属于，在弓年我解密后适用本授权书。 不保密口 学位论文作者签名： 彳喜扒 2 9 口歹年乞月f3e l 指导教师签名：营关 。刀移r 年月，8 日 独创性申明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容以外，本 论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过得作品成果。对本 文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。 本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名： 0 亍辱州 日期：2 0 d 5 年元月j f3e l 江苏大学硕士学位论文 第1 章绪论 1 1 苦瓜的化学成分及生物活性研究概况 葫芦科苦瓜属( m o m o r d i c a ) 植物在全世界共有4 0 余种，分布于热带、亚热带 地区。我国约产5 种，包括苦瓜( m c h a r a n t i a 三) 、木鳖( m c o c h i n c h i n e n s i s s p r e n g ) 、云南木鳖( m d i o c i ar o x b e x w i l l d ) 、喷瓜( me l a t e r i u ml ) 和臭苦 瓜( 膨f o e t i d as c h u m a c h ) 。 对于苦瓜属植物的药用价值，人们早有认识，在民间广为应用。苦瓜具有消 暑清热、明目解毒之功效，我国用于热病烦渴、中暑、痢疾、赤眼疼痛、痈肿丹 毒、恶疮等症的治疗，在印度还用于治疗糖尿病。木鳖的种子木鳖子作为一种中 药材载入我国药典，它具有散结消肿，攻毒疗疮的功能，用于疮疡肿毒、乳痈、 痔漏、干癣、秃疮等。云南木鳖可活血化瘀、清热解毒，在印度用于抗阿米巴原 虫及治疗毒蛇咬伤。喷瓜的口服煎剂在希腊民间用于治疗各种癌症。臭苦瓜在南 尼日利亚用于治疗多种疾病。 近年，随着该属植物降糖、抗肿瘤及抗病毒等药理活性的发现，对其药理作 用及活性成分的研究日益加深，其中尤以苦瓜的研究最为深入口1 。 苦瓜因具特殊苦味而得名，其未成熟的果实供食用。苦瓜在世界许多国家和 地区都有入药记载，苦瓜全株，特别是种子和果实具有很强的生理活性，具有明 显的降血糖、抗肿瘤、杀精和堕胎等药理作用。国内外对苦瓜的化学成分、药理 作用等做了许多研究，现将苦瓜的化学成分及药理作用的研究进展综述如下。 1 1 1 苦瓜的主要化学成分 苦瓜的化学成分研究由来已久，8 0 年代以来，随着分离鉴定技术的提高和现 代药理研究方法的完善，使苦瓜活性成分的研究更加广泛深入。从苦瓜中已分离 得到的化学成分包括三萜、甾类、蛋白、有机酸、生物碱及多糖类等d 1 。 1 1 1 1 三萜类成分 苦瓜属植物中的三萜类成分，主要为葫芦烷型四环三萜及少量齐墩果酸型五 环三萜。1 9 8 0 年日本学者o k a b eh 等对苦瓜子采用下列的提取分离方法：甲醇 渗滤，丁醇提取，硅胶柱层析，以氯仿一甲醇一水( 7 0 ：2 5 ：3 ) 洗脱，分得 m o m o r d i c o s i d ea 和b ；苦瓜子的甲醇：水( 1 ：1 ) 渗滤液，经浓缩放置析出无色嘧 1 啶甙结晶v i c i n e h l 。1 9 8 1 年他们又从苦瓜子丁醇提取部分，分离出三个三萜皂 甙m o m o r d i c o s i d ec ，m o m o r d i c o s i d eo ，m o m o r d i c o s i d ee 5 1 。1 9 8 2 年o k a b eh 等用甲醇提取未成熟苦瓜果实，提取液浓缩干后，用氯仿和正丁醇提取，正丁醇 部分用硅胶柱层析，甲醇：氯仿：水( 5 1 5 ) 和醋酸乙酯：甲醇：水 ( 5 0 ：2 ：0 5 ：4 0 ：2 ：0 5 ) 洗脱，分出m o m o r d i c o s i d eg ，f 1 ，f 2 ，i 引，k ，l 训。1 9 8 4 年m a y u m iy a s u d a 对苦瓜茎、叶用甲醇提取，提取物浸膏用氯仿和水分配，水层 用正丁醇萃取。氯仿部分经硅胶柱层析，分出m o m o r d i c i n ei ，丁醇部分分出 m o m o r d i c i n ei i 、i i i 8 】o 2 0 0 1 年日本学者t o s h i y u k im 等对苦瓜采用下列的提取分离方法：全苦瓜甲 醇提取，减压浓缩，乙酸乙酯脱脂，水层用正丁醇萃取。正丁醇部分正相硅胶柱 层析，以氯仿一甲醇一水梯度洗脱，再经反相硅胶柱层析，高效液相制备柱纯化， 分得g o y a g l y c o s i d e8 ，b ，c ，d ，e ，f ，g ，h 和g o y a s a p o n i ni 、i i 、i i i 呻1 等 2 4 个三萜类和甾体类单体化合物。 苦瓜中部分三萜类成分列于表1 1 ，部分三萜化合物结构式如图1 1 。 表1 1 苦瓜中已分离得到的三萜类成分 t a b 1 1t h et r i t e r p e n e sf r o mm o m o r d i c ac h a r a n t i a l 霉 化合物名称分子式( a ) 。 怒 含量来源 紊 im o m o r d i c o s i d e a c 4 7 h 7 2 0 i s 2 h 2 0 + 1 0 51 8 i 70 1 2 8 7 4 种子4 2m o m o r d i c o s i d eb c 4 7 h “) 0 1 9 3 2 h 2 0 + 6 1 52 3 8 4 20 0 0 8 9 8 种子4 3 m o m o r d i c o s i d ecc 4 2 h 7 2 0 1 5 h 2 0 + 1 3 9 2 2 4 70 o i1 4 1 种子5 4m o m o r d i c o s i d ed c 4 2 h 7 0 0 1 3 ( h 2 0 1 2 61 9 9 2 0 30 0 0 2 2 8 种子 5 5m o m o r d i c o s i d ee，0 0 0 3 6 5 种子5 6 m o m o r d i c o s i d ef ic 3 7 h 5 0 0 8 5 1 3 h 2 0 ll l 1 9 8 2 0 3o 0 4 3 4 0 未熟果实6 7m o m o r d i c o s i d ef 2 c 3 6 h ，s o s h 2 0 9 6 5 1 5 5 8 0 0 0 4 0 0 未熟果实 6 8m o m o r d i c o s i d eg c 3 7 l 6 0 0 s h 2 0 - 1 0 7 31 8 3 7o 0 1 2 3 6 未熟果实 6 9 m o m o r d i c o s i d eic 3 h 5 8 0 8 h 2 011 0 22 l o 60 0 0 8 1 3 未热粜实6 1 0m o m o r d i c o s i d ek c 3 7 h 6 0 0 9 i 2h 2 0 + 6 3 32 3 6 70 0 0 0 0 2 未熟果实 9 l lm o m o r d i c o s i d el c ，5 h ，s 0 9 2 h 2 0 + 5 7 32 2 7 3 1o 0 0 3 6 0 未熟果实 9 1 2 g o y a g l y c o s i d e ac 】7 h 6 0 0 9 - 1 0 1 4，o 0 0 0 0 8 果实种子9 1 3 g o y a g l y c o s i d e b c ，7 i - 1 6 0 0 9，o 0 0 0 0 5 果实种子 9 1 4 g o y a g l y c o s i d e - c c 3 s h 6 2 0 9 ，0 0 0 0 0 7 果实种子9 i5 g o y a g l y c o s i d e - - dc ，s h 6 2 0 9 ，0 0 0 0 0 8 果实种子9 1 6 g o y a g l y c o s i d e - ec 4 2 h 0 1 3 7 5 6，o 0 0 0 1 0 果实种子 9 1 7 g o y a g l y c o s i d e - f c 4 2 h 6 b o i ，- 5 1 90 0 0 0 0 9 果实种子 9 18 g o y a g l y c o s i d e - g c 4 3 h 7 0 0 7，0 0 0 0 0 6 果实种子9 1 9 g o y a g l y c o s i d e hc 4 2 h 7 0 0 i ， + o 7o 0 0 0 0 8 果实种子 9 2 江苏大学硕士学位论文 g o y a s a p o n i ni g o y a s a p o n i n i i g o y a s a p o n i nl l i m o m o r d i c i n el m o m o r d i c i n ei i m o m o r d i c i n c1 1 l m o m o r d i 髓c u c u r b i t a n el n o 】 m o m o r d i c ac u c u r b i t a n e3 m o m o r d i c ac i i c u r b i t a n e6 m o m o r c h a r a s i d ea 】 m o m o r c h a r a s i d cb m o m o r d i c i n 1 2 】 m o m o r d i c i n i n m o m o r d i c i l i n c 6 s h l 0 2 0 j l- 1 3 5 c h l i 0 0 3 5 c 4 9 h 7 6 0 1 9 一1 9 c 3 0 h j s 0 4 h z o + 8 1 3 c 3 6 h s s o s i ll c 弘h 如0 0 3 2 h 2 0 + 8 9 c 3 0 l h s 0 4 h 2 0 + 5 8 c 3 1 h 0 4 3 2 h z o + 4 8 9 c 4 2 h 7 2 0 1 5 2 h 2 0 + 0 8 c 3 6 h o 旷1 2 h 2 0 c31h5003+62 c h “0 2 + 5 4 c 3 d 6 0 0 3 + 4 2 1 2 5 8 | ， ， ， ， 1 7 0 2 1 8 6 9 1 2 i 2 1 4 6 7 1 7 0 l 0 0 0 0 10 o o 0 0 2 7 0 0 7 0 0 0 0 0 7 0 0 0 0 1 2 0 0 0 ， o 0 2 0 4 7 0 0 2 0 0 0 ， l 0 0 0 0 0 1 8 0 0 0 0 0 2 0 0 0 0 0 1 5 果实种子 果实种子 果实种子 叶子藤蔓 叶子藤蔓 叶子藤蔓 叶子藤蔓 叶子藤蔓 叶予藤蔓 种子 种子 未熟果实 未熟果实 未熟果实 o r ( 1 ) r = d d g l u ( 1 6 ) p - d g l u ，、一“。姥。川_ i ( 1 2 ) r = p d g l u ( 1 3 ) r = p - d a ll o p y ( 1 0 ) r l = d d - g l u ( ii ) r i = p d g l u r 2 = m e r 2 = h 3 ( 3 ) r = p d - g l u ( 1 6 ) d d g l u ( 1 4 ) r = 1 3 一d g l u ( 1 5 ) r = b d a ll o p y 0 7 ) r t = b d g l u 毗= p d a ll o p y 9 9 9 8 8 8 m m m 他 他 他 加 幼 乜 m 筋 ；昌 ” 嚣 如 甜 弛 弘 r ( 2 0 ，2 1 ) r l = 1 3 一d g a l a c t o p y r a n o s y l ( i - 2 ) - b - d - g l u c o p y r a n o s i d u r o n i ca c i d ( 2 0 ) r 2 = 8 - d - x y l o p y r a n o s y l ( i - - * 4 ) - a - l - r h a n m o p y r a n o s y l ( 1 2 h l - r h a m n o p y r a n o s y l ( i - , - 3 ) 】 ( 2 1 ) r 2 = 1 3 d - x y l o p y r a n o s y l ( i - - * 3 ) - b - d - x y l o p y r a n o s y l ( 1 - - - * 4 ) - n - l - r h a m n o p y r a n o s y l ( 1 - - * 2 ) - 【a _ l - r h a m n o p y r a n o s y l ( i - - - * 3 ) 】 ( 1 8 ) r l = d d a l l o p y r 2 = b d g l u o r ( 9 ) r l = d d - g l u ( 6 ) r j = 1 3 一d g l u r 2 = h 毗= m e ( 7 ) r - = 1 3 - d a l l o p y融= h ( 1 6 ) r i = p d a ll o p y如= p d g l u ( 1 9 ) e = 1 3 一d g l u ( 1 - - 6 ) 1 3 - d g l u ( 2 2 ) r 2 嵋一d - x y l o p y r a n o s y l ( i - - - 2 ) 【b d - g l u c o p y r a n o s y l ( 1 - - - 4 ) 】 一3 - 0 一a c e t y l - 1 3 - d g i u c o p y r a n o s i d u r o n j ca c i d 图1 1 部分三萜化合物结构式 f i g1 1t h es t r u c t u r eo ft r i t e r p e n e s ( 3 1 ) 2 0 c h 3 1 1 1 2 甾体类成分 1 9 6 5 年s u c r o w 从苦瓜果实中分离出一种甾体皂甙和一种豆甾醇皂甙“3 | ； 第二年他又从干的苦瓜果实中分离出2 5 一豆甾二烯醇及它的3 d 一葡萄糖甙n 引， 并分出两种7 一甾醇1 5 1 。 4 江苏大学硕士学位论文 1 9 6 6 年，c o t l i k a rmm 从苦瓜果实中获得具有显著降血糖活性的植物甾醇 ( p 一谷甾醇一p d 一葡萄糖甙和扣2 5 一豆甾二烯醇- 3 1 3 一d 一葡萄糖甙的等分子混合 物) t 6 o1 9 9 6 年，r a m a n 再次报道了该成分c h a r a n t i n f o e t i d i n 即“苦瓜亭”n 7 1 。 1 9 9 0 年，朱照静从苦瓜籽中分得2 4 p 一乙基一5 仪一胆甾一7 ，反式- - 2 2 e ， 2 5 ( 2 7 ) 一三烯一3 p 一羟基一3 0 一p d 一吡喃葡萄糖甙n 引。同年g u e v a r a 用乙醇 浸提石油醚脱脂，氯仿部位经过反复硅胶柱层析，得到具有抗诱变活性成分 3 一o - 6 - 0 一p a l m i t o y l b e t a d g l u c o s y l s t i g m a s t a 一5 ，2 5 ( 2 7 ) 一d i e n n 射。 苦瓜中部分甾体类成分列于表1 2 ，结构式如图1 2 。 表i 2 苦瓜中已分离得到的甾体类成分 t a b 1 2t h es t e r o i d a l sf r o mm o m o r d i c ac h a r a n t i a l 霉 化合物名称分子式 ( a ) 。 慧 含量 豢 文献 i s t i g m a s t a 5 - 2 5 - d i e n e - 3 一b e t a - d g l u c o s i d e 果实 1 4 2 s t i g m 雒t a 5 - 2 5 - d i e n - 3 b e t a o i 【1 9 】 0 1 5 0 0 , 果实 1 4 、1 9 3 c h a r a n t i nc 3 0 l - 1 s s # , 0 0 6 - 4 4 2 6 6 80 1 5 0 0 * ,果实1 6 、1 7 s t ，m a s t ，7 - 2 2 果实n - 4 1 5i， 果实 l5 3 b e t a - o l 5s ，g f n 鹞们喇5 果实l ，i 果实 1 5 3 b e t a - o i c h o l e s t a - t r a n s - 7 t r a n s 2 2 - 2 5 ( 2 7 ) - t r i e n 一3 b e m - o l , 6c 3 5 1 - 1 5 6 0 6+ o 2 22 6 2 5 种子 i l 5 - a l p h a ：3 - o - b e t a - - d g l u co s y l - 2 4 - b e t a - e t h y l s t i g m a s t a 一5 - 2 5 ( 2 7 ) d j e n 3 7，ii 果实 1 8 b e t a o l ，3 - o - ( 6 - o p a l m i t o y l b e t a d g l u c o s y l ) 8 m o m o r d e n o lc 3 6 m s o s- 6 2 91 6 0 一10 0 0 0 0 3 果实 1 2 9 s i t o s t e r o l ，b c 协d 唱i u c j d c 2 0 】 果实 2 0 1 0 m 。m 。r d i c ac h a 舢t i as t c r o i dg i y c o s d e 【2 1 】 果实 2 1 i i s t i g t n 船t e m i 【2 2 】 果实 2 2 1 2 胡萝h 甾醉“ 4，果实4，果实23291 1 3 b 一谷蹬醇 2 引 i i 1 3 2 4果实 2 4 ( 1 3 ) ：r = 1 3 - d - - g l u c o s y ( 2 ) ：r = h 5 垄苤大学硕士学位论文 ( 3 ，1 2 ) ：r = b - d - g l u c o s y ( 1 3 ) ：r _ h 图1 2 部分甾体化合物结构式 f i g 1 2t h es t r u c t u r eo fs t e r o i d a l s 1 1 1 3 生物碱类 i y e rr i 等人从未成熟的苦瓜果中，采用9 0 的冷甲醇提取，经阳离子交换 树脂d o w e x 5 0 、纸层析s e p h d a xl h 一2 0 柱层析，分离得到两种内源性细胞分裂素， 即玉米素核糖甙( z e a t i nr i b o s i d e ) 和玉米素( z e a t i n ) 渊。埃及学者e l - g e n g a i h i s 从苦瓜中分得一种生物碱，它含有5 一羟色胺及2 种具有嘧啶结构的甙类：蚕豆嘧 啶葡糖甙( v i c i n e ) 和阿拉伯糖甙嘧啶( c h a r i n e ) 乜引。 1 1 1 4 蛋白、多肽类 ( 1 ) 类胰岛素多肽( i n s u l i n 一1 i k e p e p t i d e ) 1 9 7 4 年k h a n n a 首次发现苦瓜中存在类胰岛素多肽p - i n s u l i n 乜7 1 。接下来，n g t b 等人对苦瓜中类胰岛素做了深入研究，发现苦瓜中存在多种类胰岛素的物质 口引。1 9 8 6 年，他们从苦瓜种子中纯化得到一种与半乳糖结合的植物凝集素乜引，相 对分子量为1 2 4 0 0 0 ，e h 3 个亚基组成引。1 9 8 7 年，n gt b 等又纯化得到两个分子量 均为8 0 0 0 的多肽，两个多肽有类似的氨基酸组成，但它们在阳离子交换柱上色谱 行为及其聚丙烯酰胺凝胶电泳行为有着较大的差异。 国内张世荣口2 1 等从苦瓜中分离出分子量分别为8 0 0 0 - 6 0 0 0 、2 5 0 0 - - - 2 0 0 0 、 6 江苏大学硕士学位论文 1 2 0 0 - - - 8 0 0 的3 种组分，均能降低高血糖模型小鼠和正常小鼠的血糖水平，其中分 子量2 5 0 0 2 0 0 0 的组分在纳克级即有明显效果。 ( 2 ) 苦瓜凝集素( m o m o r d i c ac h a r a n ti al e c tin ) 1 9 7 2 年，m t o mit 等人首先报道了通过琼脂糖凝胶亲和层析，从苦瓜中分 离得到具有凝集人o 型血红细胞，并为d 一半乳糖所抑制的凝集素，并且认为此凝 集素不能凝集y o s h i - d a 瘤细胞。随后，由于分离纯化方法的不同以及检测手段的 差异，出现了多种不同理化性质的苦瓜凝集素。 j y l i n m l 通过c m c e l l u l o s e 阳离子交换柱层析，从苦瓜种仁中分离得到有 毒和无毒的苦瓜凝集素，分别命名为m o m o r d i n 和m o m o r d i c aa g g l u t i n i n 。经 s d s - p a g e 测得它们的分子量分别为2 3 6 7 8 和3 1 7 6 2 ，都是由一条多肽链组成的。 s s 一l 朝通过d e a e a 5 0 阴离子交换层析、s e p h a d e x g 一1 5 0 凝胶过滤层析和 c m - 5 2 阳离子交换柱层析，分离得到两种不同的苦瓜凝集素，称为凝集素i 和i i 。 经s d s - p a g e 和s e p h a d e x 和g 一1 5 0 凝胶过滤层析柱检测可知二者都是由2 6 0 0 0 d 的亚 基所组成的，但它们的氨基酸组成却不相同，从而导致了凝血活性的差异m 1 。 v h o r e j s i 7 则通过o - a d 一半乳糖丙烯酰胺凝胶亲和柱层析法而得到苦瓜 凝集素的。其分子量为1 2 9 0 0 0 d ，由分子量分别为2 9 0 0 0 ，3 2 0 0 0 矛d 3 6 0 0 0 的三个亚 基通过二硫键相连而成的。含有4 1 的中性糖和0 5 的葡萄糖胺，并存在a s n 和 v a l 两个n 一末端氨基酸残基。 l u i g ib a r b i e r i 1 提纯的凝集素是采用s e p h a r o s e 4 b 和l l 酸处理的 s e p h a r o s e 6 b 亲和柱层析而得到的。它的分子量是11 5 0 0 0 d ，经s d s p a g e 检测含四 个亚基，分子量分别为3 0 5 0 0 ，2 9 0 0 0 ，2 8 5 0 0 矛0 2 7 0 0 0 口引。 ( 3 ) 仅一苦瓜素( 仅一m o m o r c h a r i n ) 和b 一苦瓜素( b m o m o r c h a r i n ) h w y e u n g 州等人采用丙酮分级沉淀、c m s e p h a r o s e 离子交换和 s e p h a d e x g l o o 凝胶过滤柱层析后得到的两种组分糖蛋白，分子量分别为2 9 0 0 0 矛1 2 8 0 0 0 ，各含有1 6 和1 3 的中性糖，n 一末端都含a s p 残基，而富含a s p a s n 和 g l u g l n 残基，二种蛋白质均无c y s 残基。此外，0 【一苦瓜素含有较少量的m e t 残基 而b 一苦瓜素则没有。 ( 4 ) 苦瓜抑制剂( m o m o r d i c ac h a r a n t i ai n h i b i t o r ，m c i ) m y u j u h 从苦瓜种子中分离出两种核糖体失活蛋白，分别称为m o m o r d i na 7 鎏苏大学硕士学位论文 和b ，并对它们的氨基酸组成和其它一些特性进行了检测。随后的一些报道中对二 者的全部氨基酸顺序和寡糖链的结构进行了测定h 羽，结果显示二种糖蛋白的寡糖 差别仅限于一个果糖分支的不同h 朝。 ( 5 ) 免疫缺陷病毒型苦瓜抑制剂( i n h i b i t o ro fh i v - i ) 1 9 9 0 年，l e e h u a n g “们从苦瓜种子和果实中分离出一个新的碱性蛋白质，被称 之为m a p 3 0 ，分子量约为3 0 k d 。2 0 0 1 年j i r a t c h a r i y a k u l m l 通过硫酸铵沉淀，凝胶 柱层析，从苦瓜种子和果实中分离出一个新的蛋白质，称为m r k 2 9 ，等电点 t 9 ， 分子量2 8 6k d 。 1 1 1 5 有机酸 y u w a ik e 从苦瓜果实中分得多种有机酸：o 【一桐酸( e l a e o s t e a r i ca c i d 。 a l p h a ) 、丁酸( b u t y r i ca c i d ) 、棕榈酸( p a l m i t i ca c i d ) 、棕桐油酸( p a l m i t o l e i c a c i d ) 、硬脂酸( s t e a r i ca c i d ) 、油酸( o l e i ca c i d ) 、月桂酸( l a u r i ca c i d ) 、 肉豆蔻酸( m y r i s t i ca c i d ) 、亚油酸( l i n o l e i ca c i d ) 、亚麻酸( l i n o l e n i ca c i d ) 等h 们。此外还含有羊蜡酸，胆固醇等。 1 1 1 6 小结 半个世纪以来，世界各国的科学工作者，陆续从苦瓜果实及种籽中分离到 2 5 0 多种单体化合物，它们主要是一些皂甙类和蛋白多肽类。其中三萜化合物已 报道6 5 种，甾体类有2 0 种，蛋白类有7 0 种左右。此外还有番茄红素等多种类 胡罗卜素、糖类化合物、单萜化合物及钙，铁等无机物。 1 1 2 苦瓜的生理活性 1 1 2 1 降血糖作用研究 在苦瓜的生理活性作用研究中，苦瓜降糖活性的研究最为广泛和深入。由 于提取方法、降糖成分及实验对象的不同，苦瓜的降糖效果结果不一。 ( 1 ) 苦瓜不同部位的的降糖活性的研究 大量的实验研究表明，苦瓜的果汁、种子和叶子对正常老鼠“7 一乳4 9 1 、四氧嘧 啶诱导糖尿病老鼠睛玑5 1 5 羽、链脲菌素诱导糖尿病老鼠陆3 一钉及基因诱变糖尿病老鼠 瞄副都具有显著的降糖活性。 ( 2 ) 不同提取方法导致降糖效果差异性的研究 8 江苏大学硕士学位论文 d a y 嘞1 等研究显示，苦瓜的水提物和碱性氯仿提取后的剩余物在1 h 可降低糖 尿病小鼠的血糖，而经碱性水冲洗的氯仿提取物再用酸性水恢复后，其降糖作用 与前二者相比显著推迟。 1 9 9 3 年，a 1 i 5 7 将苦瓜果汁和不含皂甙的果汁提取物的降糖效果进行了比较 研究，结果对于非胰岛素依赖型糖尿病老鼠，空腹血糖和餐后血糖都能明显降低， 而不含皂甙的果汁提取物的降糖效果更加显著。 2 0 0 1 年范玉玲陆踟筛选出苦瓜对化学性四氧嘧啶糖尿病模型有降糖作用的较 有效的部位，即用未加热方法直接冻干的果汁降糖效果最好。推断其降血糖成分 为水溶性受热易分解的成分。 2 0 0 2 年，r a t h i 拍钔等每天给糖尿病老鼠口服苦瓜水提物2 0 0 m g k g ，进行了为 期四个月观察。结果链脲菌素诱导糖尿病大鼠在1 、2 、3 、4 个月后血糖水平分 别显著下降了6 4 3 3 ，6 6 9 6 ，6 9 7 和7 0 5 3 ；同样方法，四氧嘧啶诱导 糖尿病大鼠在4 0 、5 0 、6 0 天时血糖水平分别显著下降了1 5 3 7 ，1 8 6 8 矛d2 2 8 6 。 2 0 0 3 年j a s