超敏反应疾病及检验PPT课件.ppt

临床免疫学检验 吉林医药学院检验学院 1 超敏反应性疾病的免疫学检验 2 型超敏反应 3 超敏反应 hypersensitivity 又称变态反应 是指机体再次接受相同抗原刺激后 发生的以组织细胞损伤或生理功能紊乱为主的特异性免疫应答 变应原 allergen 引起超敏反应的抗原称之为变应原 型速发型 型细胞溶解型 型免疫复合物型 型迟发型 4 第一节I型超敏反应性及检测 5 6 药物过敏性休克血清过敏性休克 1 全身性超敏反应 2 局部性超敏反应 呼吸道过敏反应消化道过敏反应皮肤过敏反应 一 常见 型超敏反应性疾病 7 结膜炎 哮喘病 8 荨麻疹 湿疹 9 体外检测 二 I型超敏反应免疫学检测 体内实验 激发试验 1 血清总IgE的测定2 特异性IgE的测定3 嗜酸性粒细胞计数4 嗜碱性粒细胞计数 10 一 激发试验 激发试验 provocationtest 是模拟自然发病条件 用少量超敏原引起一次较轻的超敏反应发作 达到确定超敏原的一种体内试验 不同类型变态反应的激发实验 11 1 皮肤试验 型超敏反应 12 型超敏反应 1 皮肤试验 13 相同超敏原不同稀释度 速发型15 30min内观察 迟发型48 72h内观察 0 01 0 03ml 针 4mm 针 方法 结果 1 皮内试验 14 比皮内试验敏感性稍低 但假阳性较少 皮试液浓度要比皮内试验高10 100倍 将试验抗原与对照液分别滴于试验部位的皮肤上 用针尖透过液滴轻挑一下以刺破皮肤而不出血为度 1min后拭 吸 去试验抗原液 2 点刺试验 15 16 17 第一次读 48小时打开斑试器 间隔30min待斑试器压痕消失后判定结果 第二次读 第3天或第4天 如怀疑光过敏 在斑贴试验的基础上给予紫外线照射 操作过程相似 3 斑贴试验 型超敏反应 18 19 询问病史 阳性对照 必备抢救药品和设施操作准确 避免假阳性或假阴性 4 皮肤激发实验的注意事项 适应证 阴性对照 皮试液浓度 20 5 皮肤激发实验的应用与评价 防治 型超敏反应性疾病预防药物或疫苗等过敏检测 型超敏反应预防皮肤接触过敏结核菌素试验评估机体细胞免疫功能 21 2 支气管激发试验 手捏式雾化器 bronchialprovocativetest BPT测定支气管吸入某种刺激性物质后产生收缩反应程度的方法 亦称气道反应性测定 吸入一定量的激发物 比较吸入前后肺通气功能指标 判断气道高反应性程度 22 雾化抗原颗粒 5微米 测定肺功能指标 用力肺活量 FVC 1秒用力呼气容积 FEV1 最大呼气流速 PEF 比气道传导率 sGaw 射流雾化器 23 观察症状 症状好转或减轻 导致 3 食物激发试验 基础饮食 吃可疑的过敏食物 症状加重 1周后 疑似 过敏原 重复3次 确定 某食物为过敏原 症状未减轻 1周后 排除 食物所致过敏 24 4 其他方法 结膜激发试验 将超敏原滴于一眼 阳性反应为结膜充血 水肿 分泌增加 搔痒 甚至眼睑红肿 注意假阳性对结果的干扰 25 体外检测 1 血清总IgE的测定2 特异性IgE的测定3 嗜酸性粒细胞计数4 嗜碱性粒细胞计数 二 I型超敏反应免疫学检测 体内实验 激发试验 26 二 血清总IgE的测定 化学发光免疫测定酶联免疫吸附实验 27 临床意义正常人群血清IgE水平受地域环境 种族 遗传 年龄 性别 寄生虫感染 测定法及取样等影响 结果有一定差异 参考值 0 1 0 9mg L 某些过敏体质者高于正常1000 10000倍 血清IgE高 特应症 支气管肺曲菌病 药物性间质性肺炎 麻风 寄生虫病及IgE型骨髓瘤等 28 二 特异性IgE的测定 用纯化的过敏原去检测相应的IgE抗体的一类试验 酶联免疫吸附试验 常用间接法测特异性IgE 免疫印迹技术 操作简单 能一次性测定多种变 应原的特异性IgE 故临床已普遍采用 放射性变应原吸附实验 29 4 底物显色 2 待检特异性IgE抗体 1 已知变应原包被载体 3 酶标动物抗人IgE 洗涤 洗涤 洗涤 结果 ELISA间接法检测特异性IgE 30 特异性变应原加入待检血清 转印至NC膜 NC膜 待检血清特异性IgE 抗 IgE HRP 底物 特异性抗原条带显色 NC膜 变应原 特异性IgE 抗 IgE HRP 免疫印迹检测特异性IgE 31 第二节 型超敏反应 32 抗原 同种异型抗原 共同抗原 变性自身抗原 外来抗原抗体 IgG和IgM类抗体参与细胞损伤的物质 补体 吞噬细胞 NK细胞 1 参与反应主要物质 一 型超敏反应的发生机制 33 细胞溶解吞噬作用ADCC作用刺激或抑制靶细胞 组织损伤或器官功能改变的机制 34 输血反应新生儿溶血症自身免疫性溶血性贫血甲状腺功能亢进 刺激性抗体 重症肌无力 阻断或抑制性抗体 药物过敏性血细胞减少症肺出血肾炎综合征 二 常见 型超敏反应性疾病 35 1 直接Coombs试验 2 间接Coombs试验 三 型超敏反应免疫学检测 1 Rh抗体的检测Rh抗原 D C c E e 2 抗球蛋白检测 Coombs试验 36 作用 检测红细胞表面结合的不完全抗体 临床意义 新生儿溶血症和自身免疫性溶血性贫血的诊断 RBC为Rh IgG 体内发生 抗IgG 体外测试 抽血 直接抗球蛋白试验 37 检测游离在血清中的不完全抗体或红细胞表面的抗原 RBC为Rh 不完全抗体试剂 抗IgG 体外测试 间接抗球蛋白试验 38 III型超敏反应是指由可溶性免疫复合物沉积于局部或全身多处毛细血管基底膜 通过激活补体 并在血小板 嗜碱性粒细胞 中性粒细胞等的参与下 引起的以充血水肿 局部坏死和中性粒细胞浸润为主要特征的炎症反应和组织损伤 第三节 型超敏反应 39 40 可溶性抗原抗体 IgG IgM补体 C3a C5a C3b参与细胞 中性粒细胞 碱性粒细胞 肥大细胞 血小板 参与反应主物质 一 型超敏反应发生机制 41 局部免疫复合物病Arthus反应 类Arthus反应全身免疫复合物病血清病 链球菌感染后肾小球肾炎 类风湿关节炎 系统性红斑狼疮 二 常见 型超敏反应性疾病 42 免疫复合物 immunecomplex IC 指由抗原与相应的抗体结合而成的复合物 局部免疫复合物 沉积在机体的某一局部 循环IC circulatingIC CIC 血液中存在的IC 型超敏反应 在传染病或性病时 IC沉淀于局部后激活补体 最终导致组织损伤 形成IC病 43 免疫复合物的检测 物理法 PEG法ELISA补体法 C1q结合试验抗球蛋白法 mRF固相抑制试验细胞法 Raji细胞试验 三 型超敏反应免疫学检测 44 1 PEG比浊法 原理聚乙二醇 polyethyleneglycol PEG 为不带电荷 直链大分子结构的多糖 有强脱水作用 利用2 4 浓度的PEG可选择性沉淀大分子CIC 45 2 PEG沉淀大分子CIC 4 PEG沉淀较小分子CIC 超过5 PEG选择性沉淀CIC的特性消失 温度影响极大 需进行温差校正 低密度脂蛋白使浊度增加 空腹采血 高 球蛋白血症和标本反复冻融浊度增加 注意事项 46 2 ELISA法 1 基本原理ELISA法测定的CIC 是能够结合C1q的IgG类抗体与其特异性抗原形成的CIC 2 技术要点将聚苯乙烯包被上C1q 加入受检血清 CIC中IgG的Fc段与C1q结合 再加抗人IgG HRP 形成C1q CIC 抗人IgG HRP复合物 加底物显色 47 灵敏度高于PEG比浊法 检测到0 1mg L 重复性好等优点 C1q制品不易精制 纯品不稳定 只能检出与补体结合的CIC 方法评价 48 3 细胞法 Raji细胞法 Raji细胞是从Burkitt淋巴瘤分离建株似B细胞系 在体外繁殖传代 细胞表面有高密度的C1q C3b C3d等补体受体 而且不易脱落 基本原理 49 将定量待检血清 热聚合人IgG HAHG 和Raji细胞混合 使补体 CIC或HAHG与Raji细胞形成复合物 加入抗人IgG FITC 形成 Raji细胞 补体 CIC 抗人IgG FITC复合物检测荧光强度可分析CIC浓度 技术要点 50 培养条件能改变Raji细胞其表面受体的数量及亲和性 影响检测敏感性 待检血清中如有抗淋巴细胞的抗体 能和Raji细胞反应 SLE血清中的抗DNA也能和Raji细胞反应 使测定结果偏高 影响因素 51 4 抗球蛋白技术 单克隆RF mRF 凝胶扩散试验 基本原理IgG或IgM类自身抗体具有与IC中IgG的Fc段结合而不与游离IgG结合的特性 mRF与CIC亲和力较强 52 技术要点将mR