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文档简介

小鼠白介素-10说明书样品收集和储存:细胞培养上清液：离心除去沉淀，马上检测或分成几份在-20储存。避免反复冻融。注：严重溶血或高血脂样品不适合用此方法测定。样品准备：鼠血清样品用校准稀释剂RD5T2倍稀释。建议：75l样品+75lRD5T。试剂制备:使用前把所有试剂放置至室温。小鼠白介素-10试剂对照品：用去离子水或蒸馏水1.0ml重组试剂盒。测定未稀释的对照品。浓缩洗涤液：如果有晶体析出，加热至室温，轻轻搅拌至晶体完全溶解。25ml浓缩洗涤液用去离子水或蒸馏水稀释至625ml。底物工作液：显色剂A和B等体积混和，15分钟内使用。避光。每孔需要100l混合的显色剂。小鼠白介素-4标准品：用5.0ml校准稀释剂RD5T重组小鼠白介素-10标准品。不能混用不同批次的试剂。得到1000pg/ml的母液。可以把标准品放置5分钟并轻轻搅拌至溶解。 每个试管加200lRD5T。用母液配制稀释液（如下图）。每管在下次转移前都要充分混匀。未稀释的小鼠白介素-10标准品作为高浓度标准品（1000pg/ml）。RD5T作为0浓度标准品（0pg/ml）。检测程序：所有的试剂和样品使用前放置至室温。建议所有的样品、试剂、对照品要重复检测。1.按上一节的方法准备好试剂，稀释的标准品和样品。2.从板的框架中拿走多余的板条，把它们放回有干燥剂的箔袋，密封。3.每孔加50l检测稀释剂RD1-14。使用过程中RD1-14中可能有不溶物质。4.每孔加50l标准品、对照品或样品。轻轻敲打板的边框1分钟使其混匀。用准备好的粘合带盖上。在室温下培养2小时。板的布局为记录标准品和样品的检测结果作准备。5.吸出每孔中的液体并洗涤,重复此过程四遍，共洗涤五次。每孔用喷瓶，枪或自动洗板机加入洗涤液400l。每一步必须完全除去液体。最后一次洗完，用吸液针或倾析除去所有残留的洗涤剂。把板倒置，在滤纸上印干。6.每孔加100l小鼠白介素-10抗体工作液。用新的粘合带盖上。在室温下培养2小时。7.重复第五步的吸，洗。8.每孔加100l底物溶液。室温下30分钟。避光。9.每孔加100l终止液。轻敲板子，使溶液混合均匀。10.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。如果可以校正波长，调到540nm或570nm。如果不可以校正波长，要从450nm的读数中减去540nm和570nm的读数。这一步是对吸光度的校正。直接在450nm读数，而没经过校正，数值会偏高，不准确。简易程序和清单：1.所有试剂放置至室温 按要求准备好试剂和样品 把不用的组分按说明书上的储存温度存放2.每孔加50l检测稀释剂3.每孔加50l标准品，对照品，或样品 轻轻敲板1分钟，混匀 盖上板，室温下放置2小时4.吸，洗每个孔五次5.每孔加100l抗体工作液 盖上板，室温下放置2小时6.吸，洗每个孔五次7.每孔加1
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