血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳.doc

教案与讲稿一、教案 课程名称生物化学实验授课专业和班级2005级临床本科及麻醉本科授课内容血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳授课学时4学时授课地点分析实验室日期2006.10.08节次6、7、8、9节教学目的掌握电泳的原理和概念；掌握醋酸纤维素薄膜电泳的操作方法； 教学重点电泳的原理和醋酸纤维素薄膜电泳的操作方法教学难点电泳的实验原理。教具黑板、粉笔、实验材料、实验仪器等。教学方法小班讲课 教学过程实验室规则以及每次上生化课的总体要求 10分钟简述实验过程，并对实验所用的实验仪器作介绍 5分钟阐述等电点的概念，简述人血清中各种蛋白质的特点 5分钟阐述电泳的概念和原理 30分钟血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳的操作（学生） 100分钟实验结果观察与讨论 10分钟参考书籍（1）张文峰，黄林邦主编分析与检测实验技术（江西高校出版社）（2）周爱儒主编生物化学（第六版，人民卫生出版社）思考题或/及作业（1）影响本次实验的因素？（2）怎样才能克服影响实验结果的因素？课后总结二、讲稿 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验室规则1.实验室纪律2.实验分组3.实验报告的书写4.试剂的使用须知5.安全须知7.器物的洗刷实验目的 掌握醋酸纤维素薄膜电泳的原理、操作技术。实验原理1 电泳：带电质点在电场中向着与其电性相反的电极移动的现象。2 蛋白质的等电点（PI）：在某种PH值溶液中，蛋白质所带正负电荷相等，这种溶液的PH值称为该蛋白质的等电点。3 血清中各种蛋白质各有其特有的等电点，各种蛋白质在各自等电点呈电中性状态。将蛋白质置于比其等电点较高的PH的缓冲液中，它们将形成带负电荷质点，在电场中向正极泳动。因为蛋白质的PI值大多在PH4.5-7.5之间，故我们采用PH=8.6的巴比妥-巴比妥钠缓冲液。4 电泳速度V=EQ/6r5 由于血清中各种蛋白质的PI不同，带电荷量多少有差异；蛋白质的分子量大小也不同，所以在同一电场移动速度也不同。按血清蛋白质移动速度及醋酸纤维素薄膜电泳的灵敏度可将血清蛋白质分成5条区带，从正极向负极依次为白蛋白（清蛋白）、1球蛋白、2球蛋白、球蛋白、球蛋白。操作步骤1 薄膜的准备（毛面铅笔标记编号、毛面朝下在缓冲液中浸泡5分钟、滤纸吸干多余水分）。点样（无气泡吸新鲜血清一滴于载玻片上、用盖玻片平整端蘸血清后在载玻片上正反各涂抹一下、后在点样线上垂直点样、只点一下、一点即起。）2 电泳（毛面朝下架于电泳槽、点样线架空不可碰到纱布、拉直拉平、正极对正极、负极对负极。通电计时：稳压80V、15分钟，稳压120V、50分钟。）3 染色:用镊子夹取薄膜直接浸泡于氨基黑10B染色液中4分钟左右后用自来水冲洗然后放入漂洗液中漂洗至背景无色为止。实验结果如下为实验结果的模式图：实验讨论 （学生） 实验结论用醋酸纤维素薄膜电泳可将血清蛋白质分离成五带，在薄膜上由正极向负极依次为白蛋白、1 球蛋白、2球蛋白、球蛋白、球蛋白。注意事项为避免造成污染，请勿直接用手触摸薄膜、镊子保持干净并只能夹取薄膜两端边缘。临床意义本实验结果配合分