无血清培养基的介绍.doc

无血清培养基的介绍 经历了天然培养基、合成培养基后，无血清培养基和无血清培养成为当今细胞培养领域的一大趋势。采用无血清培养可降低生产成本，简化分离纯化步骤，避免病毒污染造成的危害。 无血清培养基是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。但是它们可能包含个别蛋白或大量蛋白组分。虽然基础培养基加少量血清所配制的完全培养基可以满足大部分细胞培养的要求，但对有些实验却不适合，如观察一种生长因子对某种细胞的作用，这时需要排除其他生长因子的干扰作用。而血清中可能含有各种生长因子；又如需要测定某种细胞在培养过程中分泌某种物质的能力；或者要大规模的培养某种细胞，以获得它们的分泌产物。因此研制出无血清培养基一直是生物科学工作者努力的目标。无血清培养基的基本配方基本成分为基础培养基及添加组分两大部分。用于生物制药和疫苗生产的细胞在体外培养时，多数呈贴壁生长或兼性贴壁生长；而当其在无血清、无蛋白培养基中生长时，由于缺乏血清中的各种粘附贴壁因子如纤粘连蛋白、层粘连蛋白、胶原、玻表粘连蛋白，细胞往往以悬浮形式生长。添加组分包括以下几大类物质：(1)促贴壁物质：许多细胞必须贴壁才能生长，这种情况下无血清培养基中一定要添加促贴壁和扩展因子，一般为细胞外基质，如纤连蛋白、层粘连蛋白等。它们还是重要的分裂素以及维持正常细胞功能的分化因子，对许多细胞的繁殖和分化，起着重要作用。纤连蛋白主要促进来自中胚层细胞的贴壁与分化，这些细胞包括成纤维细胞、肉瘤细胞、粒细胞、肾上皮细胞、肾上腺皮质细胞、CHO细胞、成肌细胞等。(2)促生长因子及激素：针对不同细胞添加不同的生长因子。激素也是刺激细胞生长、维持细胞功能的重要物质，有些激素是许多细胞必不可少的，如胰岛素。(3)酶抑制剂：培养贴壁生长的细胞，需要用胰酶消化传代，在无血清培养基中必不可少须含酶抑制剂，以终止酶的消化作用，达到保护细胞的目的。最常用的是大豆胰酶；抑制剂。(4)结合蛋白和转运蛋白：常见如转铁蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加比较大，可增加培养基的粘度，保护细胞免受机械损伤。许多旋转式培养的无血清培养基都含有牛血清白蛋白。(5)微量元素：硒是最常见的。使用方法目前，血清仍是动物细胞培养中最基本的的添加物，尤其是在原代培养或者细胞生长状况不良时，常常会先使用有血清的培养液进行培养，待细胞生长旺盛以后，再换成无血清培养液。细胞转入无血清培养基培养要有一个适应过程，一般要逐步降低血清浓度，从10%减少到5%，3%，1%，直至无血清培养。在降低过程中要注意观察细胞形态是否发生变化，是否有部分细胞死亡，存活细胞是否还保持原有的功能和生物学特性等。在实验后这些细胞一般不再继续保留，很少有细胞能够长期培养于无血清培养基而不发生改变的。细胞转入无血清培养之前，要留有种子细胞，种子细胞按常规培养于含血清的培养基中，以保证细胞的特性不发生变化。为了使细胞适应无血清培养，关键的是使所培养细胞： 处于对数生长中期 90% 活细胞率 适应时以较高的起始细胞接种有两种方法使细胞适应无血清培养基:1. 直接适应细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基中。 一些类型细胞可直接从包含血清的培养基适应无血清培养基。对于直接适应，接种细胞密度应该:2.51053.5105细胞/ml。当细胞密度达到11063106细胞/ml时，传代培养细胞。当细胞密度在培养4到7天后达到21064106细胞/ml时，细胞完全适应了无血清培养基。每隔35天，当细胞密度达到11063106细胞/ml，细胞活率在90时，贮备的适应了无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养。2. 连续适应分好几步把细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基(SFM)中，与直接适应相比较，连续适应趋向对于细胞更加温和一些。 以2倍正常接种密度接种生长活跃的细胞培养物到75%有血清培养基：25SFM 混合培养基中，传代培养。 当细胞密度5105细胞/ml时，以2105到3105细胞/ml细胞密度，在有血清培养基：SFM为5050的混合培养基中传代培养。 以2106到3106细胞/ml细胞密度，25有血清培养基和75% SFM中传代培养。 当细胞密度达到1106到3106细胞/ml(接种后4到6天)，在100SFM培养基中传代培养。 每隔3到5天，当细胞密度达到1106到3106细胞/ml，细胞活率在90时，贮备的适应了无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养。 建议备份前一次混合培养的培养物，直到每一次细胞适应了新的混合培养基。每一次减少血清前，可能需要在SFM/有血清混合培养基中进行几次传代。 在适应过程中，最好不要让细胞生长过度。这将增加选择亚群的可能性。需要注意，与有血清培养基相比，大部分SFM包含非常少的蛋白质，因而更易于受外界因素的影响。细胞培养适应替代血清：许多细胞利用连续适应方法能很好的适应，用包含FBS的的培养基和包含有替代血清的培养基11(vv)的混合培养基培养细胞。通过下列的混合培养基的方式，连续几代减少当前培养基的量：12，14，116和100替代培养基。每次适应改变血清比例时，传代细胞2到3次。培养可以直接从FBS转换到替代血清。一开始就使用相同于FBS的浓度的替代物或血清，生长的延迟可能会发生，4允许进行2到3次的传代，使生长率恢复到以前的水平。特别需要强调的是：配制无血清培养液必须使用高质量的水，如石英玻璃蒸馏器经三次蒸馏或超纯水净化装置制备的水。因为无血清培养基缺乏了血清中天然成分中和毒素、保护细胞的大分子，既便水中的有毒物质含量甚微，也可能对细胞产生致死性损害。这是无血清培养能否成功的关键因素之一。无血清培养基的优点增加确定性 性能更加一致 容易进行纯化和下游加工 细胞功能的精确评估 增强生长和/或产量 生理反应性的较好对照 增强细胞内中介物的检测 无血清培养基种类： UltraCULTURETM培养剂UltraCULTURE MEDIUM(Serum-free general purpose medium) 简介：一种通用的无血清培养剂 适用范围：培养贴壁和悬浮哺乳动物细胞，疫苗生产中病毒颗粒的制备 PC-1TM培养基PC-1Complete Serum-free Medium 5PC-1 Complete Serum-free Medium(powder plus supplement) PC-1 Supplement (50) 简介：是一种低蛋白，无血清培养基。PC-1培养基旨在应用于各种研究和工业用途，使用限定成份配制的培养基确保在维持最低蛋白成分同时使细胞获得最佳的生长状态。 适用范围：培养原代细胞和贴壁依赖性细胞 UltraMEM Reduced Serum培养基 UltraMEM Reduced Serum Medium (Low-protein medium containing L-glutamine &ITES)UltraMEM Reduced Serum Medium (Protein-free basal medium without L-glutamine) 简介：用于支持多种贴壁信赖性细胞在低血清浓度下的正常生长的限定培养基。 适用范围：培养贴壁信赖性细胞 UltraCHOTM培养基 UltraCHO Meidum(1*liquid with L-glutamine) 1L UltraCHO Meidum(1*liquid without nucleosides) 500mL UltraCHO Supplement(Non-sterile) 100ml 简介：培养基最适于培养转染和未转染的中国仓鼠卵巢细胞（CHO）细胞，表达重姐蛋白质。 适用范围：培养CHO细胞; 重组蛋白的合成。 UltraMDCKTM培养基 UltraMDCK Meida 简介：是一种无血清限定培养剂，适于高/低平板密度培养MADIN-DABBY犬肾细胞（MDCK） 适用范围：培养供体外诊断（IVD）用的MDCK细胞 Pro293TMCDM系统 PRO 293A-CDM 1PRO 293S-CDM 简介：用于293细胞（转化的人胚肾细胞）培养Pro293限定培养基系统是专为促进293细胞重组蛋白的合成和下游反应而开发的。这些配方不需要任何动物来源的成分即可支持高密度的培养 适用范围：293细胞重组蛋白和合成 Insect-XPRESSTM培养基 Insect-XPRESS Medium 简介：采用一种无蛋白配方，适合培养来源于Spodoptera frugiperda(Sf9和Sf21)的昆虫细胞系。 适用范围：杆状病毒的增殖，重组蛋白的表达。 HL-1TM完全无血清培养基 HL-1 Complete Serum-free Medium(powder) 10L 简介：HL-1TM完全无血清培养基是一种限定培养基，蛋白含量低于30ug/ml. HL-1TM完全无血清培养基不含牛血清白蛋白和其它不明蛋白混合物。 适用范围：杂交瘤细胞和淋巴细胞来源的分化细胞的无血清培养。 UltraDOMATM培养基 BUltraDOMA Medium 500ml 简介：适用于中空纤维反应器中进行中，鼠和嵌合杂交瘤细胞的培养及上述细胞的批量培养。 适用范围：杂交瘤细胞的培养，单克隆抗体的制备。 UltraDOMA-PFTM无蛋白培养基 UltraDOMA-P.F.Protein-free Medium简介：一种不含蛋白的培养基，适于鼠，人和嵌合细胞来源的杂交瘤细胞系的培养。 适用范围：杂交瘤细胞和骨髓瘤细胞的培养，单克隆抗体的制备。 11. X-VIVO培养基 X-VIVO 10X-VIVO 10 with Gentamicin and Phenol RedX-VIVO 10 w/o Gentamicin and Phenol Red 简介：为了有助于在无血清环境中制备淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)而设计的。 X-VIVO 15 X-VIVO 15 with Gentamicin and Phenol Red X-VIVO 15 w/o Gentamicin or Phenol Red 简介：在组成上和X-VIVO 10相似，并且经过调整优化使之适合于无血清条件下肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）的增殖，其配方有助于外周学及人类肿瘤中分离纯化的CD3+细胞的增殖。同时还用于维持人类单核细胞、巨噬细胞及细胞系、粒细胞和自然杀伤细胞（NK）的生长。 X-VIVO 20 X-VIVO 20 with Gentamicin and Phenol Red, 1 L 简介：经过改进和优化有助于单核细胞耗竭的高密度的外周淋巴细胞制备LAK细胞。 存储条件：2-8 三种培养的部分细胞类型应用如下： 人和鼠淋巴因子激活杀伤细胞（LAK）；外周血淋巴细胞（PBL）；人和鼠肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）；人T细胞；人和鼠巨噬细胞；人和鼠造血干细胞（克隆形成和增殖）；人体组织的冰冻保存。 X-VIVO 产品的其他应用包括： PBL的增殖；TIL的增殖；器官的冰冻保存和移植；人单核细胞和巨噬细胞的培养；干细胞的培养；树突状细胞的培养。 无血清培养基精华贴汇总（原则：整理有价值的帖子，并将部分精彩内容提取出来，相关话题深入讨论看原贴，连接给出的可能是提问，也可能是回答。）1、无血清培养基的优缺点：/bbs/actions/archive/post/1597419_0.html优点：（1）无血清培养基完全采用人工合成的化合物，因此成分确定，可以排除血清中未知成分的干扰，实验结果更为可靠。（2）采用无血清培养基更容易发现一些在血清培养基中不容易发现的细胞因子。（3）采用无血清培养基可提高生物制品的质量，纯度，方便产物的分离纯化，减少过敏源。缺点：（1）成本较高。（2）针对性很强，一种无血清培养基仅适合某一类细胞的培养。2、无血清培养基介绍/bbs/actions/archive/post/1532143_0.html无血清培养基是设计用来在无血清条件下生长特殊类型的细胞或进行专门应用的培养基。无血清培养基的使用体现了一种重要的工具，它允许细胞培养在一套限定的条件下进行，尽可能免于干扰参数的影响。优点：增加确定性，性能更加一致，容易进行纯化和下游加工，细胞功能的精确评估，增强生长和增加产量，生理反应性的较好对照，增强细胞内中介物的检测。无血清培养基中没有添加血清，但可能包含个别蛋白或大量蛋白组分。无血清培养基的用途很广，如血液和骨髓细胞、杂交瘤细胞、昆虫细胞、293细胞、中华仓鼠卵巢（CHO）细胞、神经细胞、哺乳动物细胞等均有相应的无血清培养基可供选择。在使用无血清培养基时，有些细胞需要逐渐适应的过程，即先将原来的培养基与无血清培养基混合培养，渐渐地再转为完全的无血清培养。有些贴壁生长的细胞，复苏时可用少量的血清（如5%）先培养，因为血清可助细胞贴壁，然后再换为无血清培养基。GIBCO公司有各种无血清培养基提供，我们使用过不少，效果不错。3、/bbs/actions/archive/post/1532382_0.html、我的一些看法：（1）无血清培养基一般用于细胞清洗，大部分细胞都不能用无血清培养基培养，否则细胞很难存活（2）部分细胞在消化培养后先用含血清培养基培养，待细胞完全贴壁后可换无血清培养基，以消除血清成分对实验处理因素的干扰（3）在生长因子、蛋白质工程、基因表达调控等研究领域，迫切需要用无血清培养基培养细胞，因为基因工程主要对象是蛋白质（4）无血清培养基目前发展还属于初级阶段，还不能取代完全培养基的主要地位4 无血清培养基的主要成分/bbs/actions/archive/post/1555260_0.html无血清培养基由下面成分组成：（1）基础培养液很多人工合成的培养基使用的是HamF12 和DMEM培养液（1：1混合），补加15mM的HEPES ,1.2g/升NaHCO3,根据不同的细胞需求还补加其它成分.（2）附加成分a,细胞外基质,能帮助细胞附着b,营养成分,能促进细胞增殖,如多种生长因子c,蛋白酶抑制物5无血清培养基主要商家的产品目录/bbs/actions/archive/post/1621910_0.html/bbs/actions/archive/post/1621928_0.html6无血清培养基配制/bbs/actions/archive/post/400105_0.html/bbs/post/view?bid=66&id=474213&sty=3&keywords=%CE%DE%D1%AA%C7%E5%C5%E0%D1%F8%BB%F97、实验中什么情况应该用无血清培养基/bbs/post/view?bid=66&id=3300423&sty=3&age=30&tpg=1&ppg=1#3300423/bbs/post/view?bid=66&id=3300869&sty=3&age=30&tpg=1&ppg=1#3300869血清是体外培养用的最多的天然培养基，在动物细胞生长培养基中起多方面的作用，但是在血清中成分复杂，存在许多未知因素，有时会干扰实验结果，掩盖培养细胞的 潜在的生理功能。例如，神经母细胞瘤系具有诸如轴突延伸，胞膜多极化，神经特异性酶活性等神经组织的特异性功能，而这些功能在无血清培养中要比在含血清培养中表达强。此外，在生理状况下，由于血脑屏障的存在，神经组织并不直接暴露于血浆的大部分成分中。因此，培养液中的血清成分可能干扰神经细胞正常的功能活动。血清中还含有一定的细胞毒物质和抑制物质，对细胞有去极化作用，影响细胞的功能的正常表达。无血清培养基是成分确定的培养液，可以排除含血清培养时血清中许多未知因素的干扰，使实验结果更为可靠。用无血清培养可能发现一些在有血清培养中不容易发现的因子，如细胞生长调节因子，激素等。我是养的神经细胞，在这里只能就神经细胞说说，在细胞培养一周左右（视细胞生长状况而定），就可以换成低浓度血清的培养基，过渡一到两天，再换成无血清培养基。应用无血清培养基，能有效的抑制非神经元的增殖。8、细胞培养正常对照组为什么要用无血清培养基/bbs/post/view?bid=66&id=3422270&sty=3&age=30&tpg=1&ppg=1#3422270（1）为血清培养基里面的血清成分比较复杂，对于分析药物本身的作用可能会有干扰，所以在分析结论的时候，不能得到令人信服的答案，如果用无血清培养基的话，那么就可以排除这种干扰，得到想要的结果。（2）在进行细胞原代培养时，加入5-溴脱氧核苷的目的主要是为了抑制其它细胞的增殖，比如在进行心肌细胞原代培养的时候，加入5-溴脱氧核苷可以抑制非心肌细胞的增殖。9、为什么用无血清培养基后再加含血清培养基后细胞死亡?/bbs/actions/archive/post/81054_0.html细胞撤除生长因子，会停止生长，时间过长，将导致凋亡。这是你的细胞在无血清培养基中的时间太长，此时细胞已启动了凋亡程序，所以虽然没有立即死亡，但也是无可救要。10、请问无血清培养基中只有特定细胞会长吗？/bbs/post/view?bid=66&id=2992481&sty=3&keywords=%CE%DE%D1%AA%C7%E5%C5%E0%D1%F8%BB%F9由于血清成分非常复杂，对一些要求较高的基础研究的结果影响较大，同时血清中也含有一定的细胞毒性物质和抑制物质，对细胞有去分化作用，影响某些细胞功能的表达，因而现在出现了无血清培养基。现在已有商品化的无血清培养液供应。但现在尚无对所有细胞通用的无血清培养液，各种无血清培养液的针对性很强，因为各种细胞所需的成分不完全相同。由于血清中含有许多细胞因子，有的能刺激干细胞分化，所以如果想保持干细胞的未分化状态，往往不添加血清。11、STEMCELL公司的无血清培养基的资料/bbs/actions/archive/post/896405_0.html12、在无血清培养基中加入NH4Cl的目的。/bbs/post/view?bid=66&id=2963356&sty=3&keywords=%CE%DE%D1%AA%C7%E5%C5%E0%D1%F8%BB%F913、请问无血清培养基培养细胞，是否需要加入青链霉素?/bbs/actions/archive/post/1949737_0.html如果要加的话浓度要减半，因为血清可以结合一部分抗生素，减少对细胞的毒性，无血清培养基剂量就要减半，否则细胞受影响。14、有关转染时无血清培养基对细胞状态的影响问题/bbs/actions/archive/post/738286_0.html转染细胞本来对细胞就是一种强冲击，而且转染进的质粒要用细胞内的系统进行表达，这都是对细胞较强的冲击。加上转染试剂一般对离子，PH比较敏感，所以转染时使用无血清培养液，细胞缺乏了营养必需，更不会长得好了。也就是说细胞转染时细胞长得不好是正常现象，只要有结果就不要担心。15、无血清培养基需换多少时间可以取其中的分泌性蛋白/bbs/actions/archive/post/1216322_0.html（1）一般是无血清培养48小时提取细胞培养上如此介绍（2）可以作一个time course.看看您要的分泌性蛋白在几天的表达最强16、请问无血清培养基可以用含0.3的BSA的培养基代替吗/bbs/post/view?bid=66&id=3388208&sty=3&age=30&tpg=1&ppg=1#3388208肯定不可以代替17、食管癌细胞能用无血清培养基培养吗？/bbs/actions/archive/post/1696348_0.html能! 可以用MCDB151培养基含转铁蛋白，氢化可的松，EGF，胰岛素，牛垂体提取物（Sigma公司）18、无血清培养基中可以长出普通细胞的克隆吗？/bbs/post/view?bid=66&id=2786990&sty=3&age=30&tpg=1&ppg=1#2786990完全可以。19、无血清培养基与细胞因子/bbs/actions/archive/post/880229_0.html对这个问题的本身概念的探讨，我觉得没有太大的意义。关键是对于不同的细胞实验模型，最终所采用的血清的最适浓度是需要摸索的。如果你是研究细胞因子之类的，理论上最好采用完全没有血清的培养基；但事实上好多时候，如果你完全不加血清，有些细胞很难生长，或者是根本不生长，所以我们就用最适浓度的血清含量（能使细胞生长的最小浓度）来代替“无血清培养液”，使得“血清”这一影响因素达到最小。20、无血清培养CHO细胞的方法？/bbs/actions/archive/post/451690_0.html培养CHO细胞最好用F12，并且由于F12中加入了一些微量元素与无机离子，因此可以在血清很少的情况下应用，是无血清培养中常用的基础培养基，特别适合进行单细胞培养和克隆化培养。我们的前辈曾用F12在无血清的条件下成功的克隆出CHO细胞。无血清培养CHO细胞有两种方法：一种是直接向试剂公司购买只适用于培养CHO细胞的无血清培养基（好像HyClone就有）；第二种方法实际上是有血清培养，只不过血清浓度很低罢了，可以近似的认为无血清。在第二种方法里，又可以分出两条途径：你可以分步进行，也可以一步到位。分步法是，CHO细胞先在含10血清的常规培养基里培养，再到含5血清的培养基里培养，再到含2.5血清的培养基里培养，依此类推，培养基里的血清不