吡蚜酮检测方法.doc

吡蚜酮检测方法1、分析目标化合物。吡蚜酮2、仪器设备带紫外分光光度检测器的高效液相色谱仪和液相色谱质谱仪。3、试剂除下列试剂外，使用附录2所列试剂。磷酸盐缓冲液（pH6）：0.2 molL 磷酸二氢钾溶液中加入0.2molL磷酸氢二钾溶液，调节至pH6。4标准品吡蚜酮：含吡蚜酮99以上，熔点为217。5试验溶液的制备a 提取方法 谷类和豆类将样品粉碎，通过420m的标准网筛后，称取其10.0g，加入20ml水，放置2小时。加入100mL甲醇和5ml 0.5molL碳酸钾，搅拌3分钟后，用涂布1cm厚硅藻土的滤纸抽滤于磨口减压浓缩器中，取出滤纸上的残留物，加入50ml甲醇，搅拌3分钟后，按上述同样操作，合并滤液于减压浓缩器中，45以下浓缩至约5ml。将其移入100mL分液漏斗中，用5mL水洗涤上述减压浓缩器的茄型瓶，合并洗液于上述分液漏斗中，再用20mL正己烷洗涤上述减压浓缩器的茄型瓶，合并洗液于分液漏斗中，缓缓振荡1分钟后，静置，弃去正己烷层，水层中再加入20mL正己烷，按上述同样操作，弃去正己烷层，在将水层移入磨口减压浓缩器中，用少量水洗涤分液漏斗，合并滤液于减压浓缩器中，45以下浓缩至约5mL，加入5mL水。 水果和蔬菜水果和蔬菜：准确称取约1 kg样品，必要时定量加入适量水，搅切混合均匀后，称取相当于20.0g样品的量。加入100mL甲醇和5mL 0.5molL碳酸钾溶液（梅：3molL碳酸钾溶液），搅拌3分钟，用涂布1cm厚硅藻土的滤纸抽滤于磨口减压浓缩器中，取冲滤纸上的残留物，加入50ml甲醇，搅拌3分钟后，按上述同样操作，合并滤液于减压浓缩器中，45以下浓缩至约5ml，加入5m水。b、净化方法 乙基甲硅烷基化硅胶柱和酰胺丙基甲硅烷基化硅胶柱色谱法在乙基甲硅烷基化硅胶小柱（1000mg）中注入10mL甲醇，弃去流出液。再注入10mL水，弃去流出液。柱中注入a 提取方法所得的溶液后，注入10mL水，弃去流出液。抽滤一分钟，除去水分。另外一根酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱（500mg）中注入10mL甲醇，弃去流出液，在酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱上面连接上述的乙基甲硅烷基化硅胶小柱，注入20mL甲醇，收集流出液于磨口减压浓缩器中，在40以下除去甲醇，残留物中加入5mL乙醇：正己烷（1：4）混合溶液溶解。 硅胶柱色谱法在硅胶小柱（1000mg）中注入10mL正已烷，弃去流出液。柱中注入乙基甲硅烷基化硅胶柱和酰胺丙基甲硅烷基化硅胶柱色谱法所得的溶液后，注入10mL乙醇：正已烷（1：4）混合溶液，弃去流出液，再加入20mL乙醇：正已烷（2：3）混合溶液，收集流出液于磨口减压浓缩器中，在40以下除去乙醇和正已烷，残留物中加入5mL水：甲醇（9：1）混合溶液溶解。 十八烷基甲硅烷基化硅胶柱色谱法十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱（1000mg）中注入10mL甲醇，弃去流出液，再注入10mL水，弃去流出液。柱中注入硅胶柱色谱法所得的溶液后，注入15mL水：甲醇（9：1）混合溶液，弃去流出液，再加入10mL水：甲醇（7：3）混合溶液，收集流出液于磨口减压浓缩器中，在45以下除去水和甲醇，残留物中加入2mL水：甲醇（4：1）混合溶液溶解，此为试验溶液。6、操作方法。a 定性试验按下列操作条件进行试验，试验结果应与标准品的一致。操作条件柱填充剂：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径5m）。柱：内径4.6mm、长250mm不锈钢管。柱温：40检测器：波长298nm。流动相：水：甲醇：磷酸盐缓冲液（pH6）（18：5：2）的混合溶液。调整流速使吡蚜酮在1012分钟流出。b 定量试验根据与a 定性试验相同的试验条件所得的试验结果，峰高法或峰面积法定量。c 确证试验按照下列操作条件，用液相色谱质谱仪测定，试验结果应与标准品的一致。此外，必要时用峰高法或峰面积法进行定量。操作条件柱填充剂：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径5m）。柱：内径2.0mm、长150mm不锈钢管。柱温：40流动相：水：甲醇（4：