生物技术制药前半部分重点.doc

生物技术制药之晓波重点1.生物技术：生物技术是应用自然科学及工程学的原理，依靠微生物、动物、植物体作为反应器将物料进行加工以提供产品来为社会服务的技术。2.基因工程技术：是将一种生物体的基因与载体在体外进行连接，然后转入另一种生物体内，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。3.细胞工程技术：包括细胞及转基因细胞的离体培养、繁殖、再生、融合以及细胞核、细胞器的移植与改建等操作技术。4.酶工程技术：在一定生物反应装置中利用酶的催化作用，将相应的原料转化成有用物质的技术。5.发酵工程技术（工业生产）：培养活细胞以取得生物体或代谢产物的技术。6.生物制药：生物制药是指利用生物体、生物组织及其代谢产物或生物过程生产药物的技术。7.生物药物:从生物体中制取的各种天然活性药物及其人工合成或半合成的天然药物类似物。8.生物技术制药:是用现代生物技术制造生物药物的一门学科。9.生物技术药物:利用现代生物技术生产的蛋白质或核酸类等生物药物。10.什么是基因工程制药？ 利用基因重组技术将外源基因导入宿主菌或细胞进行大规模培养，以获得蛋白质药物的技术称为基因工程制药。11.基因工程药物制造的上游阶段主要包括哪些内容？分离目的基因,构建工程菌,目的基因的表达。12.基因工程药物制造的下游阶段主要包括哪些内容？工程菌的大量培养,产品的分离纯化,产品的质量控制。13.基因重组蛋白的主要纯化技术（层析）离子交换层析 亲和层析 凝胶过滤层析 反相色谱和疏水色谱14. 凝胶过滤层析分离纯化蛋白质的原理是什么？答：是根据蛋白质分子量的大小来实现分离纯化的。15.凝胶过滤层析的主要用途?脱盐 生物大分子的分级分离 生物大分子的分子量测定16. 由于目的蛋白质和杂蛋白分子量差别较大，拟根据分子量大小分离纯化并获得目的蛋白质，可采用（C）A、SDS凝胶电泳B、盐析法C、凝胶过滤D、吸附层析17.分离纯化早期，由于提取液中成分复杂，目的物浓度稀，因而易采用（A）A、分离量大分辨率低的方法B、分离量小分辨率低的方法C、分离量小分辨率高的方法D、各种方法都试验一下，根据试验结果确定18.简述亲和层析的主要步骤配体固定化 亲和吸附阶段 洗涤阶段 洗脱解离阶段 再生阶段19.下列哪种色谱依据蛋白质的分子大小进行分离？ (D)A. 离子交换色谱 B. 疏水色谱 C. 亲和色谱 D. 凝胶过滤色谱20.下列哪种色谱依据蛋白质的等电点和表面电荷进行分离？(A)A.离子交换色谱 B. 疏水色谱 C. 亲和色谱 D. 凝胶过滤色谱 21.基因重组蛋白的主要分离技术包括（ABCD）A.离心 B.沉淀 C.膜分离 D.双水相萃取 22.下列哪项是基因重组蛋白的纯化技术(B)A.有限稀释法 B.离子交换层析 C.分批式操作 D.微载体操作23.凝胶过滤色谱可用于：(C)A.配体固定化 B.等电点的测定 C.生物大分子脱盐 D.延长半衰期24.关于疏水层析的陈述，下列哪项是正确的(B)A.表面介质疏水性强 B.流动相是水相 C.分离的产物易变性 D.可用于分子量的测定25.基因重组蛋白的表达形式主要有分泌型表达 在周质表达 胞内可溶性表达 包涵体形式表达26.盐析后得到的重组蛋白能否直接进行：离子交换层析？否 疏水层析？能27.基因工程药物的杂质主要来源于宿主（蛋白）残留和宿主基因残留28.细胞工程制药：是利用动物、植物细胞培养、转基因动、植物细胞及转基因动、植物生产药物的技术。29. 动物细胞工程制药的主要内容是什么？培养动物细胞以获得多肽和蛋白质类药物；用转基因动物或转基因动物细胞生产疫苗、多肽和蛋白质药物。30.动物细胞生产药物的优点有翻译后修饰，与天然产品一致;分泌胞外、纯化方便。31.动物细胞生产药物的缺点培养条件高、成本高、产量低。32.实验室动物细胞培养的基本技术主要有细胞的原代培养 细胞的传代培养 细胞克隆培养 动物细胞的冻存与复苏 33.原代细胞：直接将动物组织或器官经过粉碎、消化而制得的悬浮细胞称为原代细胞。34.动物细胞原代培养方法有哪些？组织块培养法单层细胞培养法35. 什么是细胞传代？将细胞从一个培养器皿中消化、分散并接种至另一个培养器皿中的操作称为细胞传代(passage)。36.细胞克隆培养：细胞克隆培养即单细胞分离培养，是将动物组织分散后，将一个细胞从群体细胞中分离出来，由单个细胞培养成纯系细胞集群。37.下列哪项属于克隆(D) A.将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA分子中B.将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内C.将鼠骨髓瘤细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞D.将某肿瘤细胞在体外培养繁殖成一个细胞株38.细胞冻存的注意事项：选对数生长期细胞；冻存前一天要换液培养；细胞密度1106 2 106个ml 冻存液加保护剂（DMSO、甘油） 冻存管封口后要检查其密封性；标签标注细胞名称，编号和冻存日期。39. 细胞复苏的注意事项戴面罩和手套；37水浴中迅速融化；用乙醇擦拭冻存管的外壁；尽早将细胞离心或稀释； 隔天看细胞，再换液一次。40.细胞冻存和复苏的原则为(A)A.慢冻快融 B.慢融快冻 C.慢融慢冻 D.快融快冻41.培养的动物细胞显著污染的标志是培养基的pH值迅速改变 细胞外形模糊。42.根据体外培养时动物细胞对生长基质的依赖性，可将动物细胞分为哪些类型?贴壁细胞 悬浮细胞 兼性贴壁细胞43.用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞(D)A.容易产生各种变异B.具有更强的全能性C.取材十分方便D.分裂增殖的能力强 44.实验室动物细胞培养基的消毒能否采用高压法灭菌？应该如何灭菌？不能采用高压法灭菌。用微孔滤膜过滤除菌、分装、储存45.Cell Line:原代培养物经首次传代成功即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。46.Cell Strain:通过选择法或克隆法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的细胞称为细胞株。47.生产用动物细胞有哪些种类? 原代细胞 传代细胞株 转化细胞株 工程细胞株48.转化细胞株:正常细胞经过某个转化过程，失去正常细胞的特点而获得无限增殖的能力，得到的细胞株。49.工程细胞株:利用转化细胞株，采用细胞融合技术或基因工程技术构建的细胞株。50.写出CHO细胞的中英文全称中国仓鼠卵巢细胞Chinese hamster ovary cell 51.什么是动物细胞的大规模培养?是指在人工条件下（设定温度、pH、溶氧等），在细胞生物反应器中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品的技术。 52.动物细胞的大规模培养方法有哪些 悬浮培养法 微载体培养法 多孔载体培养法 微囊化培养法 中空纤维培养法53.常用的动物细胞生物反应器有哪些?搅拌式生物反应器 气升式生物反应器 中空纤维式生物反应器 透析袋式或膜式生物反应器 固定床或流化床式生物反应器 一次性摇袋式细胞培养生物反应器54.动物细胞生物反应器的主要操作模式有哪些?分批操作 补料-分批操作 半连续操作 连续式操作 灌流式操作55.转基因动物:采用基因工程技术把外源目的基因导入动物生殖细胞（胚胎干细胞） 和早期胚胎，并在受体动物的染色体上稳定整合，再经过发育途径把外源目的基因稳定地传给子代，通过这项技术所获得的动物即为转基因动物。 56.常用的转基因动物生物反应器有哪些?乳腺 血液 尿液 鸡蛋 57.简述体细胞核移植技术流程?目的外源基因和标记基因的融合基因导入培养的体细胞中；筛选导入外源基因的体细胞；此体细胞的核移植到去核卵母细胞中。植入代孕母体。58.抗体工程制药:利用基因工程、细胞工程、发酵工程和转基因动、植物技术生产抗体药物的技术。59.人工制备抗体经历了哪三个阶段?第一代：多克隆抗血清 第二代：单克隆抗体 第三代：基因工程抗体60.抗体的2个主要功能是什么？识别并结合抗原; 结合后诱导免疫反应 61. 抗体可变区的功能: 特异性结合抗原62.抗体恒定区的功能: 可变区结合抗原后恒定区诱导免疫反应。63.抗原的主要来源途径包括：提取纯化的天然抗原 重组蛋白抗原 化学合成的多肽半抗原 天然小分子半抗原64.免疫方法有哪些?体内 体外 脾内65.用于细胞融合的骨髓瘤细胞必须处于对数生长期，活细胞计数 （95） ，在实验室连续培养时间1个月。66.应用何种试剂进行杂交瘤细胞的选择性培养并说明H、A、T的作用用HAT进行杂交瘤细胞的选择性培养。次黄嘌呤(H)氨甲喋呤(A)胸苷(T)。氨甲喋呤阻断核酸从头合成途径。细胞通过核酸补救途径利用H和T合成核酸。67.应用何种物质筛选阳性克隆？应用免疫动物时使用的相应抗原来筛选分泌特异性抗体的细胞克隆。68.进行杂交瘤细胞克隆化的两种常用方法是? 有限稀释法 软琼脂法69.杂交瘤细胞抗体性状的鉴定包括哪些内容? 抗体特异性的鉴定 单抗的抗体类与亚类的鉴定单抗中和活性的鉴定 单抗识别抗原表位的鉴定 单抗亲和力的鉴定 抗体效价测定 70.大量制备单抗的两种常用方法：小鼠腹水法 体外大量培养法71.简述腹水中单抗的分离纯化方法：（1）分离：1000 g 5 min，20000 g 30 min，饱和硫酸铵沉淀。（2）纯化：凝胶过滤、阴离子交换层析、亲和层析。72.在制备单克隆抗体时为什么要进行两次筛选？第一次筛选的目的是用HAT筛选杂交瘤细胞。在HAT培养液中，骨髓瘤细胞不能生长，脾细胞不能在体外长期生存，只有脾细胞与骨髓瘤细胞的融合细胞（杂交瘤细胞）才能长期生长。第二次筛选的目的是从上述杂交瘤细胞中筛选分泌特异性抗体（抗免疫原）的细胞。73.制备单克隆抗体时为什么要选用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞?骨髓瘤细胞（肿瘤细胞）在体外培养能大量无限增殖，但不能分泌特异性抗体；而抗原免疫的B细胞能产生特异性抗体，但在体外不能无限增殖。将免疫脾细胞（B细胞）与骨髓瘤细胞融合后形成的杂交瘤细胞，继承了两个亲代细胞的特性，既具有骨髓瘤细胞能无限制增殖的特性，又具有免疫B细胞合成和分泌特异性抗体的能力。74.为什么要进行杂交瘤细胞的克隆化培养?经过特异性抗体检测筛选到的杂交瘤细胞孔分泌特异性抗体，但是不能保证一个孔内只有一个细胞克隆，可能会有数个甚至更多的克隆，可能包括抗体分泌细胞和抗体非分泌细胞；所需要的抗体（预定特异性抗体）分泌细胞和其它无关抗体分泌细胞。要想将这些细胞彼此分开，就需要克隆化。 75.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定HAT培养基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不能存活，增殖的细胞是(C)B淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞 A. B. C. D.76.关于单克隆抗体，下列叙述不正确的是(D)A.可以制成诊断试剂盒，用于疾病的诊断B.可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗C.可以利用基因工程技术生产D.可以在生物体内生产，不能体外生产77.（多选）下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中，正确的是(BCD)A.B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般不需要灭活的仙台病毒或聚乙二醇诱导B.融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单克隆抗体C.体外培养时，一个效应B淋巴细胞可以产生抗体，但不能无限增殖D.单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵敏度高，优越性明显78.筛选杂交瘤细胞（脾-瘤融合细胞）选用的培养基是(B)A、HT B、HAT C、RPMI 1640 D、BME79.科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是(A)A.经过免疫的B淋巴细胞B.不经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞D.不经过免疫的B淋巴细胞 80.用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是(B)A.将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞B.用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞C.用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合D.筛选杂交瘤细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体81.传统的鼠单抗在治疗应用方面有那些局限？鼠单抗被机体认为是外源蛋白质，在人体内引发严重的免疫反应。这种免疫反应不只中和了抗体的治疗作用，而且当机体再遇到此抗体时会发生严重的过敏反应。鼠抗体在应用中受到的第二个限制是其不能有效地激活效应物功能（ADCC和CDC），正是因为这一限制使其无法作为肿瘤治疗药物得以应用。82.什么是基因工程抗体?是通过（PCR）技术获得抗体基因或抗体基因片段，与适当载体重组后引入不同表达系统所产生的抗体，又称重组抗体。83.改造鼠源性单克隆抗体药物的首要目的是(C)A、降低相对分子量 B、增加组织通透性 C、降低免疫源性 D、延长半衰期84.(单链抗体)是利用DNA重组技术将抗体一条VH和一条VL基因通过一短肽链连接后表达出来的抗体片断。85.嵌合抗体是指用 （人抗体恒定区) 替换鼠抗体恒定区，保留抗体可变区。86.什么是双特异性抗体?bispecific antibody，bsAb，是含有两个不同表位结合位点的抗体分子。87.什么是抗体融合蛋白?将抗体片段连接到与抗体无关的其它蛋白上，创造出的一些抗体相关分子，称为antibody fusion protein。88.什么是免疫毒素?抗体与毒素的偶联物被称为免疫毒素（immunotoxin）。 89.什么是抗体酶?抗体与酶蛋白的偶联物被称为抗体酶（abenzyme）。 90.什么是免疫粘附素?利用Fc段所特有的生物学功能与某些有粘附或结合功能的蛋白融合又被称为免疫粘附素。 91.什么是人源化抗体?用鼠的互补决定区序列替换人的相应序列。也叫CDR移植抗体（CDR grafting antibody）或改型抗体。92.抗体融合蛋白的2种类型是?抗原结合部位与生物活性蛋白结合； 含Fc段的抗体融合蛋白。93.什么是噬菌体抗体库?用体外基因克隆技术将B细胞全套可变区基因克隆出来，插入噬菌体表达载体，转化工程细菌进行表达，在噬菌体表面形成噬菌体抗体的群体，即为噬菌体抗体库（surface display antibody library）。94.噬菌体抗体库技术是由哪2种技术相结合而产生的?是丝状噬菌体展示技术与抗体组合文库技术相结合而产生的技术。95.采用什么方法可获得部分或全部人源的治疗用抗体？人血清来源人杂交瘤单克隆抗体鼠单抗人源化噬菌体抗体库转基因小鼠重组人多克隆抗体技术从人外周血高效筛选分泌特异性单抗的单个细胞操作法96.简述噬菌体抗体库技术的基本方法扩增全套抗体可变区基因；构建表达载体；导入细胞、表达；淘选（Panning)；表达与鉴定。97.简述抗体库技术产生的三项技术基础RT-PCR：能够克隆全套抗体可变区基因；表达技术：抗体基因片段在大肠杆菌中的成功表达；噬菌体表面展示技术（phage display) 。98.阐述抗体药物的分类按抗体分子的构成可以将抗体药物分三类：a.抗体或抗体片段：完整的抗体包括嵌合抗体、人源化抗体和人抗体，抗体片段包括Fab，F(ab)2，ScFv等。b.抗体偶联物或称免疫偶联物：其由抗体或抗体片段与“弹头”物质连接而成，可用作“弹头”的物质有放射性核素、化疗药物与毒素。c.抗体融合蛋白：由抗体片段和活性蛋白两个部分构成。简述治疗性单克隆抗体的靶标过表达的蛋白（如乳癌细胞过表达的HER2，类风湿性关节炎的TNF或IL-1，器官排斥的CD3或IL-2等）细胞表面的标志蛋白（CD20、CD22或CD52等）100.简述已上市抗体药物治疗哪些疾病抗肿瘤 免疫疾病治疗 器官移植 抗感染 心血管疾病101.重组人多克隆抗体:重组表达的针对人体同一种疾病多个抗原表位的多种单抗的混合物。102.发酵：是用生物催化剂使培养物质转变成产品的生物化学反应过程。103.初级代谢产物：初级代谢产物是菌体 (对数生长) 期产生的产物，这类产物对菌体生长、分化和繁殖都是必需的。 104.次级代谢产物一般在菌体生长的 （稳定） 期合成。105 .菌种保藏方法中保藏时间最短的是 (A) A、斜面低温保藏法 B、石蜡油封存法 C、砂土管保藏法 D、冷冻真空干燥保藏法106.为了避免菌种衰退，应尽量（ 减少 ）传代次数。107.按化学本质和化学特征分类，微生物发酵生产药物的类型包括（ACD）A.抗生素类 B.微生物菌体 C.氨基酸类 D.核苷酸类108.发酵工程的上游阶段、发酵过程和下游阶段都包括那些内容？上游：菌种选育、培养基的配制、灭菌、扩大培养和接种。发酵：发酵过程。下游：产品的分离纯化、废物处理、副产品回收。109. 诱变育种：诱变育种是指有意识地将生物体