高中生物 第四章第2节蛋白质的提取和分离课件 北师大版选修1.ppt

第2节蛋白质的提取和分离 学习导航1 尝试蛋白质的提取和分离 2 解释蛋白质提取和分离的基本原理 一 乳酸脱氢酶同工酶的提取和分离1 实验原理 1 特点 可以与特定的底物进行反应 形成特殊的蓝紫色产物 2 提取时的要求 必须提供必要的 和 环境以保持其生物活性 3 分离方法 缓冲系统 低温 琼脂糖凝胶电泳 2 实验步骤 1 提取过程制备匀浆 取5g 的动物心脏 漂洗干净后 剪碎到预冷的玻璃匀浆器中 加入25ml 研磨成匀浆 获取酶 将匀浆收集到冰浴的离心管中 在4 条件下12000rpm离心10min 吸取 在4 条件下保存备用 新鲜 磷酸提取缓冲液 冰浴 上清液 2 分离过程制琼脂糖凝胶电泳板 用 配制质量分数为1 的琼脂糖凝胶 加热溶解后混匀 缓缓倒入胶床中 插入适当的梳子 室温冷却至凝胶凝固 拔出梳子 将凝胶放入 中 向电泳槽中加入适量的tbe电泳缓冲液 tbe电泳缓冲液 电泳槽 加样 电泳 取适量同工酶提取液与 的 混匀 取20 l加入 内 100v条件下进行电泳30min 染色 观察 当溴酚蓝指示剂电泳到 时切断电源 取出凝胶板浸入染色液中 37 染色15 30min后 取出 观察电泳结果 等量 载样缓冲液 样品孔 凝胶底部 水洗 为什么提取乳酸脱氢酶同工酶时选择的材料要用新鲜的 提示 新鲜的材料细胞中酶的活性高 想一想 二 相关基础知识1 同工酶指催化相同的化学反应 而酶蛋白的 乃至免疫学性质不同的一组酶 2 乳酸脱氢酶 1 种类 一般含有5种同工酶 2 特点 相对分子质量相同 但所带电荷不同 电泳的结果应该形成 个条带 分子结构 理化性质 5 1 同工酶之间的空间结构一定不同 2 乳酸脱氢酶的催化底物是乳酸 3 乳酸脱氢酶同工酶具有不同净电荷 相同的分子大小和形状 判一判 1 概念指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程 2 原理不同蛋白质的带电性质 电量 形状和大小不同 在电场中受到的作用力方向 大小 阻力不同 导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同 3 常用方法 1 琼脂糖凝胶电泳 由于琼脂糖本身不带电荷 所以 各种分子在电场中的迁移速度因各种分子的带电性质差异 分子大小 形状不同而不同 从而得以分离 2 聚丙烯酰胺凝胶电泳 右图表示对某蛋白质溶液进行琼脂糖凝胶电泳的结果 相似于纸层析法分离色素 下列相关叙述不正确的是 a 蛋白质上某些基团解离后可使蛋白质带电 电场中带电的蛋白质分子 或多肽 会向着与其所带电荷相反的电极移动b 蛋白质在琼脂糖凝胶中的迁移速度完全取决于其所带净电荷多少c 蛋白质在琼脂糖凝胶中的迁移速度主要取决于相对分子质量的大小 形状 所带净电荷d 电泳结果表明溶液中蛋白质可能有两种 解析 蛋白质的氨基与羧基可发生解离 使其带正电或负电 在电场中发生迁移 蛋白质在凝胶中迁移速率主要取决于其所带净电荷的多少和性质 分子的大小和性状 答案 b 1 如果蛋白质指的乳酸脱氢酶同工酶 b选项说法正确吗 2 如果是乳酸脱氢酶同工酶 电泳结果会出几条色带 提示 1 正确 因为乳酸脱氢酶同工酶相对分子质量相同 所带净电荷不同 2 5条 互动探究 1 凝胶材料所用的凝胶实际上是一些微小的多孔球体 这些小球体大多数是由多糖类化合物构成的 如葡聚糖或琼脂糖 小球体内部有许多贯穿的通道 2 原理凝胶色谱法也称作分配色谱法 是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法 分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙 路程短 流动快 分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部 路程长 流动慢 用凝胶色谱法分离蛋白质时 分子量大的蛋白质 a 路程较长 移动速度较慢b 路程较长 移动速度较快c 路程较短 移动速度较慢d 路程较短 移动速度较快 答案 d sds 聚丙烯酰胺凝胶电泳法中加入sds的作用是 a 增大蛋白质的相对分子质量b 改变蛋白质分子的形状c 掩盖不同蛋白质分子间的电荷差别d 减少蛋白质分子的相对分子质量 变式训练 解析 选c 在样品和凝胶中加入sds后 分子被解聚成多肽链 解聚后的氨基酸侧链和sds结合成蛋白质 sds复合物 所带的负电荷大大超过了蛋白质原有的电荷量 这样就消除了不同分子间的电1荷差异和结构差异 从而达到仅根据蛋白质相对分子质量的不同而分离蛋白质的目的 对凝胶色谱法和电泳法分离蛋白质混淆不清有关凝胶色谱法和电泳法的说法正确的是 a 它们都是分离蛋白质的重要方法b 它们的原理相同c 使用凝胶色谱法需要使用缓冲溶液而电泳不需要d 以上说法都正确 解析 凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的一种有效方法 电泳法是利用待测样品中各种分子带电性质的差异和分子本身的大小 形状不同 使带电分子产生不同的迁移速度 从而实现样品中各种分子的分离或鉴定 所以a正确 b错 这两种方法都用到缓冲溶液 以调节溶液的酸碱度 所以c错误 综上所述 答案选a 答案 a 纠错总结 1 分离不同蛋白质的基本原理根据蛋白质各种特性的差异分离蛋白质 如分子的形状和大小 所带电荷的性质和多少 溶解度 吸附性质和对其他分子的亲和力等等 2 缓冲溶液无论是凝胶色谱法还是电泳法均使用缓冲溶液 其目的是维持蛋白质的活性 或维持蛋白质所带电荷 3 应