细胞培养资料

Procell 武汉普 诺 赛生命科技有限公司  2015.9 武汉普诺赛（ Procell）生命科技有限公司坐落于武汉国家生物产业基地 -光谷生物城，是一家提供生命科学领域内细胞相关产品和服务的高科技企业 。  拥有 完善的生物学实验室和质量保证体系，建有 2大细胞库 -细胞系库、原代细胞库和 3大技术服务平台 -分子生物学平台、免疫学平台、细胞生物学平台。  产品方面： 我们可以 提供 500多株 细胞系、人 /大鼠 /小 鼠近 200种原代 细胞、基础培养基、无血清培养基、血清、胰酶、生长因子等细胞培养相关产品，对每一批产品进行多项检测，严格控制批间差和批内差，保证产品质量的稳定性，以专业的研发和生产团队为客户提供高性价比的产品。  技术服务方面： 基于 3大技术服务平台，我们可以提供分子克隆、 PCR、 RNA干扰、免疫组化、 western blot检测、细胞凋亡及增殖检测、病毒包装、动物建模等服务，为生命科学研究人员提供全方位的技术支持、培训和外包服务。  “严谨求实、不断创新”是普诺赛每位员工牢记的企业文化，我们承诺为广大客户提供专业、高效、优质的服务！  公司简介  Procell 细胞  基础培养基  完全 培养基  血清  胰酶、双抗  平衡盐溶液  产品  公司简介  Procell 实验室  公司简介  Procell 1. 基本概念  细胞系  （细胞株）  原代细胞  取新鲜组织在体外培养，细胞状态与 体内生长特性相近，适合作药物测试、细胞分化等 实验 研究  传代次数有限，一般不建议冻存，收到细胞后即开展实验  免疫荧光检测细胞标志性蛋白，如上皮细胞  CK-18；成纤维细胞  Fibronectin；平滑肌 细胞  alpha-SMA 经过永生化处理，可以无限增殖、传代  可 液氮冻存，需要时 复苏   STR鉴定（类似亲子鉴定，与官网位点信息对比）  细胞 相关 知识  Procell 2. 需要的试剂、耗材及设备  试剂： 基础培养基（ MEM、 DMEM、 M199、 1640、 L-15、 McCoys 5A等 ）  血清（胎牛血清、小牛血清、马血清）  消化酶（胰酶、弹性蛋白酶、胶原酶）  添加因子（胰岛素、 VEGF/BFGF细胞因子、 B27、 NEAA、 ITS等）  耗材 ：培养瓶（ T25,T75等）、培养板  移液管、离心管、冻存管  设备： CO2培养箱、超净台、倒置显微镜、离心机、水浴锅、液氮罐  细胞 相关 知识  Procell 3. 细胞 传代  细胞生长过程中在一定面积内密度增加，细胞相互接触后停止分裂，增殖受到 抑制 -接触抑制  传代     将部分细胞转移到新的培养瓶内，以降低细胞密度  但也不是密度越低越好，细胞生长需要有一定的起始密度，密度太低细胞也不增殖 -密度 依赖  建议： 刚收到的细胞初次传代以 1:2比例传代，熟悉了解细胞生长特性后再调整传代比例  细胞 相关 知识  Procell 基础培养基  + 10% FBS 弃去培养基  PBS润洗细胞  胰酶消化细胞  将细胞分到新培养皿  加入新鲜培养基  贴壁细胞  细胞 相关 知识  Procell 悬浮细胞  基础培养基  + 10% FBS 转移到离心管  1000rpm，离心 5min 弃上清，留细胞沉淀  新鲜培养基  重悬细胞沉淀  将细胞分到新培养皿  加入新鲜培养基  细胞 相关 知识  Procell 细胞系  货期 2周左右  不同细胞生长速度不一样，增殖慢的细胞需要时间较长  发货流程  Procell 销售下 单  每周二、周四、周五复苏细胞  细胞培养  质检、发货  原代细胞  货 期 3-4周  发货前技术会电话告知细胞培养信息、生长特性及注意事项，E-Mail发货时细胞状态  销售下 单  新鲜组织取材分离细胞  细胞培养  质检、鉴定、发货  发货流程  Procell 常温 -T25细胞瓶                   干冰 -冻存管 2支                    1. 观察 细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等 现象  2. 先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时（ 4h左右），稳定细胞 状态  3. 静置后镜检，拍照，记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况 。 -售后依据  4. 贴壁细胞：若细胞密度超过 80%，可正常传代；若未超过 80%，收集细胞瓶内的培养基，留8ml继续培养至 80%左右再传代，瓶盖可稍微拧松 。  5. 悬浮细胞 ：将细胞瓶内液体都转移至无菌离心管内， 1000 转 /分钟离心 5min，培养基上清可备用，管底细胞沉淀用培养基重悬。镜检时若细胞密度超过 80%，可将细胞悬液分至 2个细胞瓶内培养；若密度未超过 80%，细胞悬液移至原瓶继续培养，待达到 80%时再正常传代。  1. 泡沫 箱内干冰量是否充足  2. 客户自行复苏，先复苏 1支，另一支放液氮罐 备用  3. 复苏后细胞状态拍照记录，有问题随时联系我们技术人员  收到细胞如何处理  Procell 细胞培养过程外因太多，所以我们的 售后保障期为 一周  超过 一周的细胞我们会酌情处理，但不提供免费更换服务。  细胞 出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么 ？  1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；  2. 细胞污染问题，请在收到产品 24小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；  3. 常温发货的细胞静置 24小时后，绝大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；  4. 干冰冻存发货的细胞复苏后，绝大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；  5. 干冰冻存发货的细胞复苏后 24小时或常温发货的细胞静置 4小时后并且未开封，出现污染，重发；  6. 细胞活性问题，请在收到产品 7天内给我们提出真实的实验结果（用台盼蓝染色法鉴定细胞活力），核实后予重发；  7. 视具体情况而定。  售后原则  Procell 细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些 ？  1. 客户 操作造成细胞污染，不重发；  2. 客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发；  3. 非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；  4. 细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前 3天的细胞状态照片，不重发；  5. 细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发；  6. 细胞收到 2天内，未告知的，不重发；  7. 视具体情况而定。  其他 服务政策  1. 细胞出现问题后，未能及时反馈并提交细胞质量问题反馈表的，不能免费重发，如需重发，客户需支付购买价 5.0折的费用。  2. 如客户收到细胞 8-30天之内，因处理不当造成细胞死亡或污染，我公司可以 5.0折优惠价重新提供该细胞株。  售后原则  Procell 售后原则  Procell 填写反馈表  售后人员了解相关情况  根据 情况进行售后  细胞学平台  整体课题  病毒包装平台  动物造模平台  分子生物学平台  免疫学平台  病理学平台  技术服务平台  Procell 分子生物学平台  载体构建  全基因合成  亚克隆  TA克隆  定点突变  载体改造  PCR检测  Realtime PCR检测  （ mRNA、 microRNA）  普通 PCR MSP甲基化检测  各类生化检测  SOD检测  MDA检测  CK检测  ALT、 AST检测  血脂谱 检测（ TG、 TC、 LDL）  血常规检测  技术服务平台  Procell 免疫学平台  Western blot检测  ELISA检测  技术服务平台  Procell 病理学平台  HE染色             EVG染色            油红 O染色  尼氏染色      PAS糖原染色        Masson染色吉姆萨染色     结晶紫染色     甲苯胺蓝染色  VG染色       番红固绿染色       Vankossa银染  维多利亚蓝染色      Trap染色     免疫组化 -组织标本  免疫组化 -细胞爬片  免疫荧光单 /双标 -组织标本  免疫荧光单 /双标 -细胞爬片  TUNEL检测  透射电镜 观察  扫描电镜观察  技术服务平台  Procell 细胞平台  细胞转染  质粒、慢 /腺病毒、 siRNA、mimics、 inhibitor等  细胞增殖能力检测  （ MTT、 CCK8、 EDU、 Brdu）  流式凋亡 /周期检测  Transwell迁移 /侵袭  克隆形成实验  粘附实验  血管形成实验  线粒体膜电位检测  双荧光素酶实验  （ miRNA靶基因验证 /启动子活性验证）  流式双标检测  流式周期检测  克隆形成实验  血管形成实验  HUEVC 病毒转染  hela 技术服务平台  Procell 我们可提供普通级和 SPF级动物饲养服务，主要饲养动物为 大鼠、小鼠、豚鼠、兔 。   目前我们已积累了大量动物造模的经验，已成功开展的动物模型：   裸鼠皮下成瘤、小鼠急性肺损伤、小鼠急性肝衰竭、再生障碍性贫血、骨髓移植、动脉周扬硬化、 II型糖尿病、紫癜模型、大鼠肝纤维化、类风湿关