大孔树脂--屠鹏飞.ppt

大孔吸附树脂在新药研究开发和生产中的应用及存在的问题 屠鹏飞北京大学中医药现代研究中心 概述 中药有效成分的不断阐明中药现代化的要求当前用于中药纯化的主要技术 溶剂法 沉淀法 色谱法 大孔吸附树脂 离子交换树脂 聚酰胺 葡聚糖凝胶等超临界流体萃取法 超滤法 结晶法 一 树脂简介 1 常用树脂的类型凝胶树脂大孔树脂离子交换树脂 2 离子交换树脂 离子交换树脂的种类 种类活性基团1强酸性磺酸基 SO3H 2弱酸性磷酸基 PO3H2 羧酸基 COOH 3强碱性 型 三甲基胺 N CH3 3 型 二甲基乙醇胺 N CH3 2C2H4OH4弱碱性伯氨基 NH2 仲氨基 NHR 叔氨基 NR2 5两性强碱 弱酸弱碱 弱酸 3 大孔吸附树脂 大孔吸附树脂的结构示意图 目前国产树脂的主要类型 致孔剂 甲苯 石蜡 溶剂汽油 煤油 碳醇 聚乙烯醇等 国产大孔吸附树脂的主要型号 性能 生产企业 型号性能生产企业D 101非极性天津晶莹提取树脂有限责任公司D 201弱极性天津晶莹提取树脂有限责任公司D 301极性天津晶莹提取树脂有限责任公司HPD 100非极性河北沧州宝恩化工有限公司HPD 300弱极性河北沧州宝恩化工有限公司HPD 600极性河北沧州宝恩化工有限公司X 5非极性南开大学化工厂AB 8弱极性南开大学化工厂NKA 9极性南开大学化工厂 三菱化学的大孔吸附树脂 聚苯乙烯系列合成树脂 Diaion HP20 HP21Sepabeads SP825 SP850Sepabeads SP70 SP700修饰的聚苯乙烯系列合成树脂 Sepabeads SP207异丁烯系列合成树脂 Diaion HP2MG 大孔吸附树脂的主要理化性质 颜色 白色 乳白色至微黄物理化学性质稳定 不溶于任何酸 碱及有机溶剂 加热不溶 可在150 以下使用含水量 60 80 堆积密度 0 6 0 9 影响树脂性能的主要因素及国产树脂存在的主要问题 交联度比表面积吸附容量粒度分布强度 二 大孔吸附树脂的预处理 1 树脂预处理的方法回流提取法渗漉法水蒸气蒸馏法2 树脂预处理的溶剂乙醇丙酮异丙醇2 5 盐酸2 5 氢氧化钠 3 渗漉法纯化树脂 色谱柱 不锈钢柱 径高比为1 3 1 7装柱 湿法装柱洗脱溶剂 乙醇 2 5 盐酸 2 5 NaOH 水 甲醇 2 5 盐酸 2 5 NaOH 水 混合溶剂 2 5 盐酸 2 5 NaOH 水洗脱方法 乙醇法 乙醇浸泡12h 2BV洗脱 浸泡3 5h 2BV洗脱 浸泡3 5h 3 5BV洗脱 浸泡3 5h 3 5BV洗脱 2 3BV盐酸浸泡2 4h 洗脱 水洗脱 2 3BVNaOH浸泡2 4h 洗脱 水洗脱 混合溶剂法 混合溶剂浸泡12h 2BV洗脱 浸泡3 5h 2BV洗脱 浸泡3 5h 3 5BV洗脱 2 3BV盐酸浸泡2 4h 洗脱 水洗脱 2 3BVNaOH浸泡2 4h 洗脱 水洗脱 新方法 乙醇浸泡3 5h 3 5BV乙醇洗脱 2 3BV盐酸浸泡2 4h 洗脱 水洗脱 2 3BVNaOH浸泡2 4h 洗脱 水洗脱 4 乙醇法纯化树脂有机残留物检测 未处理树脂的气相色谱图 EtOH 1的气相色谱图 EtOH 31气相色谱图 NaOH洗脱的气相色谱图 三 大孔吸附树脂的再生 再生溶剂的选择 乙醇 50 95 甲醇 50 100 异丙醇 丙酮 50 100 碱性乙醇溶液 2 5 盐酸 2 5 NaOH 洗脱方法 正洗脱 逆流洗脱 四 大孔吸附树脂在新药研究中的应用 1 适用的新药类型 中药有效成分的粗分和精制单味中药有效部位的制备中药复方有效部位的制备注意 性质相似成分可混煎后一起制备 各味药所含成分性质差别较大的复方应单独提取后 再制备 单味药有效成分性质差别较大的应分别制备 2 成分的类型与树脂的选择 脂溶性成分包括甾体类 二萜 三萜 黄酮 木脂素 香豆素 生物碱等 应选择非极性或弱极性的树脂 如D101 AB 8 HPD100等皂苷和生物碱苷类成分 应选择弱极性或极性树脂 如D201 D301 HPD300 HPD600 AB 8 NKA 9等黄酮苷 蒽醌苷 木脂素苷 香豆素苷等 应选择合成原料中加有甲基丙烯酸甲酯或丙烯氰的树脂 如D201 D301 HPD600 NKA 9等环烯醚萜苷类成分 应选择极性树脂 如D301 HPD600 NKA 9等 3 树脂用于新药研究应考察的内容 1 树脂型号的选择 比吸附值考察 分离性能考察 2 药材 树脂比例的考察 3 色谱柱的径高比考察 4 洗脱溶剂的考察 5 吸附流速和洗脱流速考察 6 收集洗脱液量考察 7 树脂的使用寿命考察 8 工艺放大试验 4 树脂分离条件的正交试验 表头的设计 因素药材 树脂色谱柱洗脱流速收集洗脱水平比例径高比BV h液量11 11 31321 21 52531 31 737 实例一 某中药中苯乙醇苷类成分的分离 精制 该中药所含的成分 苯乙醇苷类 环烯醚萜及其苷类 木脂素及其苷类 多元醇 水溶性生物碱 单糖 双糖 氨基酸等 1 树脂型号的考察 2 树脂用量和吸附次数的考察 3 洗脱液乙醇浓度的考察 乙醇浓度20 40 60 80 洗脱量9倍5倍4倍3倍检出杂质脂溶性脂溶性成分成分 4 收集洗脱液量的考察 第一次洗脱 第二次洗脱 洗脱溶剂水洗脱40 乙醇洗脱收集量45TLC检测未检出糖难检出苯乙醇苷 洗脱溶剂水洗脱40 乙醇洗脱收集量34TLC检测未检出糖难检出苯乙醇苷 实例二 某中药中黄酮苷类成分的分离 精制 1 树脂型号的考察 2 洗脱溶剂用量考察 水 5 乙醇 3 洗脱条件的正交试验 5 成品中有机残留物的限量检查 检查方法 气相色谱法检查成分 应根据树脂合成中所接触的有机成分确定检查成分测定方法 顶空进样或溶剂法含量限度 苯 2ppm 其它 20ppm方法学考察 溶剂的气相色谱检测 基线噪音和最低检测限的测定 对照品的测定 供试品的测定 标准的书写格式 色谱条件和系统适用性试验 对照品溶液的制备 供试品溶液的制备 测定法 起草说明 五 大孔吸附树脂在中药及植物提取物生产中的应用 1 槐花米中黄酮苷类成分的分离 纯化 槐花花穗9 9kg MeOH提取36L HP20吸附 MeOH溶解50 10L 100 10L LH 20吸附MeOH溶解 CHP20P吸附50 EtOH流份 ODS层析分离45 MeOH洗脱 3 4 5 7 四羟基黄酮 3 葡萄糖酸苷 2 大孔树脂在绞股蓝总皂苷精制中的应用 绞股蓝水煎液 D101树脂 水洗脱 弃去 95 乙醇洗脱 收集洗脱液浓缩得总皂苷 3 大孔树脂在贯叶金丝桃提取物制备中的应用 贯叶金丝桃80 乙醇提取物 正己烷脱脂 乙酸乙酯提取黄酮和双萘醌 残渣溶于水 D101树脂 水洗脱除去杂