7蛋白质合成后的折叠与修饰加工.ppt.Convertor.doc

第三节 蛋白质合成后的折叠与修饰加工加工过程包括前体加工（切除信号肽）、蛋白质的化学修饰（磷酸化、糖基化） 和蛋白质的剪接等。一. 蛋白质合成后的正确折叠是其行使功能的基础一般认为，多肽链自身氨基酸顺序储存着蛋白质折叠的信息，即一级结构是空间构象的基础。新生肽链的折叠在肽链合成中、合成后完成，新生肽链N端在核蛋白体上一出现，肽链的折叠即开始。可随着序列的不断延伸肽链逐步折叠，产生正确的二级结构、模序、结构域到形成完整的空间构象。 “蛋白质折叠异常与疾病” 分子病（Pauling）：蛋白质分子发生变异所导致的疾病举例-镰刀状红细胞性贫血:亚基N端的第6号氨基酸残基发生了变异，GluVal,这种变异来源于基因上遗传信息的突变。镰刀状细胞贫血病-反应了蛋白质氨基酸序列在决定其高级结构和生物学功能方面的重大作用；致死性疾病；红细胞数目为正常人一半,且形状不正常.谷氨酸被及氨酸替代,谷氨酸为酸性氨基酸, 而缬氨酸为疏水氨基酸；从三级结构看,等于在血红蛋白分子表面安了一个疏水侧链. 血红蛋白的氧亲和 力其实不受这种变化的影响, 但是血红蛋白分子之间可依靠疏水作用相互聚集沉淀,沉淀压迫细胞膜使之变形.CJD: Creutzfeld-Jakob disease 学名：克罗伊茨费尔德雅各布氏症简称克雅氏症俗名：疯牛病 临床症状 ：出现痴呆或神经错乱，视觉模糊，平衡障碍，肌肉收缩等。 神经病理检查 ：病人的脑神经发生海绵状变性 朊病毒（Prion):不含核酸，完全由蛋白质构成的病毒。 最初推测朊病毒是像普通病毒一样的微粒，只是缺乏核酸。但是实际与预期的相反，朊病毒很快被证明可由细胞自身染色体的基因编码。这个基因称为PRNP，它可以表达正常的脑组织并且编码一种命名为PrPc的蛋白质，存在于神经细胞的表面。PrPc精确的功能到现在仍未发现。但是这种蛋白质的新的形式目前在人脑中发现，这就是CJD。PrPc与 PrPSc的比较 PrPcPrPSc分子状态单体分子集合成纤维状态溶解性可溶不溶对蛋白酶抗性弱，极易被破坏很强蛋白质稳定性稳定不稳定蛋白质三级结构几乎全部由-螺旋组成 大约45%为-折叠片层致病性正常致病Alzheimers disease (AD)学名：阿尔茨海默氏病临床症状：以遗忘为最早期、最突出的症状。继而出现反应迟钝、判断力和理解力下降，重复语言和无意义的重复动作等。随着疾病进展，最终严重痴呆，卧床不起，出现并发症。 很多迹象表明AD是由一种分子的沉积物引发的，称为淀粉体-肽（A）。最初它是淀粉前体蛋白（APP）的一部份，APP可跨越神经细胞的细胞膜。A多肽是由APP分子释放出来的这2种多肽存在的可溶形式，主要由-螺旋组成，但是，A42具有重新折叠的趋势，使它的结构含有相当多的-折叠片层。只有A42分子形式具有致病的潜力，因为它趋向于自我联合并且形成不溶的纤维状沉淀，导致神经细胞的死亡。 细胞内蛋白质正确折叠的保障机制分子伴侣（molecular chaperon）；是细胞内一类保守蛋白质，可识别多肽链的非天然构象，促进各功能域和整体蛋白质的正确折叠。分子伴侣在帮助蛋白质折叠后,自身并不作为最终结构的一部分.1. 封闭暴露出来的疏水区段,为蛋白质的折叠创造一个无干扰的隔离环境.2. 防止新生肽链在未完成折叠之前相互聚合,帮助蛋白质获得最初的正确结构.3. 识别错误折叠的蛋白质,帮助其复性或降解.分子伴侣除帮助蛋白质折叠外,对于蛋白质的组装,运输和讲解都是必须的和未完全折叠的蛋白质的疏水部分结合,防止蛋白质之间的非特异性聚合.hsp70家族 (热休克蛋白 hot shock protein) Hsp70为单体蛋白,可与还在核糖体上的新生肽链结合,识别暴露在外的疏水基团,与之结合防止疏水区域的非法聚集.维持多肽链的去折叠结构,直到正确的结构能够生成.伴侣蛋白伴侣蛋白为大的多亚基蛋白,可形成笼状结构,将部分折叠的蛋白质彼此隔离,提供一种理想的折叠环境,使他们各自独自折叠,不会相互聚集 蛋白质二硫键异构酶(PDI)肽链内或两条肽链间的二硫键是在肽链形成后-SH 基被氧化而形成的。二硫键在形成蛋白质的空间结构中起着重要作用。蛋白二硫键异构酶 (protein disulfide isomerase)在内质网腔活性很高，可在较大区段肽链中催化错配二硫键断裂并形成正确二硫键连接，最终使蛋白质形成热力学最稳定的天然构象。肽-脯氨酸顺反异构酶(PPI)脯氨酸为亚氨基酸，多肽链中的肽酰-脯氨酸间的肽键绝大部分为反式构型。肽-脯氨酸顺反异构酶可促进顺反两种异构体之间的转换。 蛋白质翻译后的加工修饰方式(一) 一级结构的修饰(二) 空间结构的修饰1. N端甲酰蛋氨酸或蛋氨酸的切除：N端甲酰蛋氨酸或蛋氨酸残基，必须在多肽链折迭成一定的空间结构之前被切除。 去甲酰化： 去蛋氨酰基：2. 前体蛋白的加工有些新合成的多肽链要在专一性的蛋白酶的作用下切除部分肽段才能具有活性。例如(1). 酶原要切除部分肽段才能形成有活性的酶。(2). 信号肽的切除。(3).胰岛素原切除C肽。胰岛素前体-胰岛素原，经水解酶切，除去部分氨基酸（C肽，31个氨基酸）并在A链（21个氨基酸）和B链（30个氨基酸）两条肽链之间形成两对二硫键，在A肽链上形成另一对链内二硫键，使胰岛素分子具有特定的空间结构，从而表现其完整的生物活性。详见下页的两张图：3 剪接指蛋白质前体可以通过多肽的剪辑，剪除某些氨基酸片段，然后在以一定的顺序结合起来，最终形成成熟的、有活性的蛋白质的现象。内含肽,外显肽，一种蛋白质大小69KD从ORF推测119KD.其两端的序列与ORF推测的一致,单缺乏ORF中间的一段. 在蛋白质水平发生了拼接.催化其DNA转移到其他基因内部,传染分子.4 化学编辑（1）一级结构的修饰 个别氨基酸的修饰，包括羟基化、糖基化、磷酸化、酰基化、羧化作用、甲基化。 羟基化：肽链中某些氨基酸的侧链被修饰(modification)，这都是在翻译后的加工过程中被专一的酶催化而形成的。例如脯氨酸被羟基化生成羟脯氨酸，胶原蛋白在合成后，其中的某些脯氨酸和赖氨酸残基发生羟化。在X-Pro-Gly(X 代表除Gly 外的任何氨基酸)序列中的脯氨酸羟化为4-羟脯氨酸，也可生成3-羟脯氨酸，但较少。脯氨酸的羟化有助于胶原蛋白螺旋的稳定。 糖基化：在多肽链合成过程中或在合成之后常以共价键与单糖或寡糖侧链连接，生成糖蛋白。这些糖可连接在天冬酰胺的酰胺上(N-连接寡糖)或连接在丝氨酸、苏氨酸或羟赖氨酸的羟基上(O-连接寡糖)，糖基化是多种多样的，可以在同一条肽链上的同一位点连接上不同的寡糖，也可以在不同位点上连接上寡糖。糖基化是在酶催化反应下进行的。糖蛋白是一类重要的蛋白，许多膜蛋白和分泌蛋白均是糖蛋白。N-连接糖链、O-连接糖链糖链和蛋白质的功能、蛋白质的半衰期、分子的识别相关.如Ig的糖链缺失一个糖基,免疫系统不能识别,产生抗体,抗原抗体结合沉淀在关节腔,风湿性关节炎. 磷酸化：酶、受体、介体(mediator)、调节因子等蛋白质的可逆磷酸化是普遍存在的蛋白质细胞生长和代谢调节中有重要功能。磷酸化发生在翻译后，由各种蛋白质激酶催化，将磷酸基团连接于丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的羟基上。在磷酸酯酶的作用则发生脱磷酸作用。 酰基化：蛋白质的乙酰化普遍存在于原核生物和真核生物中。乙酰化有两个类型：一类是由结合于核糖体的乙酰基转移酶将乙酰-CoA 的乙酰基转移至正在合成的多肽链上，当将N-端的甲硫氨酸除去后，便乙酰化，例如卵清蛋白的乙酰化便是如此；另一类型是在翻译后由细胞质的酶催化发生乙酰化，例如肌动蛋白和猫的珠蛋白。此外，细胞核内的组蛋白的内部赖氨酸也可以乙酰化。 羧化作用：一些蛋白质的谷氨酸和天冬氨酸可发生羧化作用。例如，血液凝固蛋白酶原(prothrombin)的谷氨酸在翻译后羧化成-羧基谷氨酸，后者可以与Ca2+螯合。这依赖于维生素K 的羧化酶的催化作用。 甲基化：在一些蛋白质中赖氨酸被甲基化。如肌肉蛋白和细胞色素c 中含有一甲二甲基赖氨酸。大多数生物的钙调蛋白含有三甲基赖氨酸。有些蛋白质中的一些谷氨酸链羧基也发生甲基化。高级结构的修饰 亚基之间、亚基与辅基之间的聚合：具有四级结构的蛋白质由几个亚基组成，因此必须经过亚基之间的聚合过程才能形成具有特定构象和生物功能的蛋白质。对于结合蛋白来说，含有辅基成分，所以也要与辅基部分结合后才能具有生物功能。.有些蛋白质还要与辅基(prosthetic groups)相结合： Cytochrome C只有与血红素（heme）相结合才有功能。此外，Acetyl-CoA羧化酶常与Biotin分子相结合。有些蛋白质必须经蛋白酶切割后才有功能。有些蛋白质只有在形成二硫键之后才有功能。第三节蛋白质合成后的转运真核细胞中新合成的多肽被送往溶酶体、线粒体、叶绿体胞核等细胞器。所以新合成的多肽的输送是有目的、定向地进行的。(蛋白质的分拣和靶向)各种细胞器都有特定的蛋白质,因此蛋白质的运送必须是准确无误的运送才能保证生命活动的正常进行.不同类型的核糖体合成不同的蛋白游离核糖体合成的蛋白质一般属于胞浆蛋白,或进入各种细胞器；膜结合核糖体合成的蛋白质则属于膜蛋白或分泌蛋白.蛋白需要靶向输送.蛋白质的转运可分为两大类:共翻译机制:蛋白质的合成和转运是同时发生的-信号肽理论翻译后机制:蛋白质从核糖体上释放后才发生转运-导肽理论(一) 信号肽理论定义:所有靶向输送的蛋白质结构中存在分选信号，主要为末端特异氨基酸序列，可引导蛋白质转移到细胞的适当靶部位，这一序列称为信号序列（signal sequence）。作用:使核蛋白体与内质网上的受体结合;肽链进入内质网后经其运至靶器官,后经信号肽酶切除.结构:由1335个氨基酸组成,分为三个区: N端为亲水区,含有碱性氨基酸,提供正电荷；中间为疏水区,为中性或疏水性氨基酸(1015个)；C端 小分子氨基酸（信号肽酶裂解部位）蛋白质定位的信息存在与蛋白质自身结构中,而且会和膜上相应受体结合,在膜上产生通道, 允许这段多肽在延长的同时穿过膜结构,从而引导蛋白质的定位，边翻译边转运.信号肽的特征信号肽序列通常在被转运多肽链的N端，这些序列在1040个氨基酸残基范围，氨基端至少含有一个带正电荷的氨基酸，在中部有一段长度为1015个氨基酸残基的由高度疏水性的氨基酸组成的肽链，常见的为丙氨酸、亮氨酸、缬氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸。这个疏水区极重要，其中某一个氨基酸被非极性氨基酸置换时，信号肽即失去功能。在信号肽的C端有一个可被信号肽酶识别的位点，此位点上游常有一段疏水性较强的5肽，信号肽酶切点上游的第一个(1)及第三个(3)氨基酸常为具有一个小侧链的氨基酸(如丙氨酸)。 常见分泌型蛋白质的信号肽序列分泌性蛋白质进入内质网需多种蛋白成分的协助：1、信号肽识别颗粒（SRP）：结合信号肽、核蛋白体2、SRP受体（ SRP对接蛋白 DP ）：可与 SRP结合3、核蛋白体受体：与核蛋白体大亚基结合使其与ER膜稳定结合4、肽转位复合物：形成新生肽链跨ER膜蛋白通道信号肽引导真核分泌蛋白进入内质网 根据信号肽假说,分泌蛋白的合成起始于结合核糖体,当翻译进行到50-70个氨基酸残基后,信号肽开始从核糖体中露出, 被内质网膜上的受体SPR识别,并与之结合, SPR作为一种双接头分子,一方面可与信号肽结合,另一方可与SPR受体结合.同时核蛋白体受体与大亚基结合,起到稳定作用,肽转位复合物打开,与核糖体上多肽离开通道对接,多肽链通过通道进入内质网腔.共翻译运输对于大多数通过共翻译途径转移的蛋白质来说,内质网腔并非其终点,在进入内质网后还要向下游转移(高尔基体,溶酶体,细胞膜,孢外等等,)相邻的站点通过小泡运送的方式进行.蛋白质的合成和转运高尔基体常被称作细胞的交通警察, 能加各种蛋白进行分类,并且引导致合适的位置.高尔基体膜的厚度和化学成分介于内质网膜与细胞膜之间。在活细胞中，这三种膜可以互相转变。 (二) 导肽假设除了分泌蛋白外,体内还存在一种跨膜蛋白质,如线粒体,叶绿体等细胞器膜蛋白.这些膜蛋白与共翻译运输的分泌蛋白不同,它们运输时由导肽牵引,是合成后在分选运输的.属于翻译后途径.导肽定义:位于蛋白质前体N端,引导该蛋白质前体通过细胞膜,进入线粒体、叶绿体等细胞器的一段约含2080个氨基酸的特异性肽段。特征：1 带正电荷的碱性氨基酸（Arg）含量丰富，分散于不带电荷的氨基酸残基之间。 2 缺失带负电荷的酸性氨基酸残基。 3 羟基氨基酸含量较高。 4 有形成两条-螺旋结构的能力。细胞色素C1的导肽共含有61个氨基酸,其中7个为酸性氨基酸,19个中性氨基酸,35个碱性氨基酸.将35个碱性氨基酸的DNA与小鼠二氢叶酸还原酶融合,该融合蛋白进入线粒体基质.将54氨基酸的DNA与小鼠二氢叶酸还原酶融合,该融合蛋白定位于线粒体内、外膜之间。导肽序列中每一肽段均含有各自的导向信息。（三）分子伴侣定义：能与其它构象不稳定的蛋白质结合并使之稳定的一类蛋白质，它们通过与多肽结合来帮助被结合多肽在体内的折叠、组装、转运或降解等，在完成任务后又从多肽链上释放下来，它是蛋白质折叠和组装的重要调节者。Hsp70和Hsp60Hsp70能结合尚未离开核糖体的新生肽链或正在穿膜的肽链，防止这些肽链因疏水区外露而发生凝集，从而有利于肽链的正确折叠。Hsp60分子具有桶状结构，能协助尚未完成折叠或已发生错误折叠的多肽链成为正确折叠的活性分子