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2020 2 15 第四章高效液相色谱法 一 高效液相色谱法的特点二 流程及主要部件三 流动相的选择四 高效液相色谱法的应用 2020 2 15 液相色谱是以液体为流动相的色谱分析方法 英文缩写 LC 按其固定相的不同 又可分为液固色谱 LSC 和液液色谱 LLC 液相色谱简介 2020 2 15 气相色谱只适合分析较易挥发 且化学性质稳定的有机化合物 而HPLC则适合于分析那些用气相色谱难以分析的物质 如挥发性差 极性强 具有生物活性 热稳定性差的物质 现在 HPLC的应用范围已经远远超过气相色谱 位居色谱法之首 在所有色谱技术中 液相色谱法是最早 1903年 发明的 但其初期发展较慢 在液相色谱普及之前 纸色谱法 气相色谱法和薄层色谱法是色谱分析法的主流 到了20世纪60年代后期 将已经发展得比较成熟的气相色谱的理论与技术应用到液相色谱上来 使液相色谱得到了迅速的发展 特别是填料制备技术 检测技术和高压输液泵性能的不断改进 使液相色谱分析实现了高效化和高速化 具有这些优良性能的液相色谱仪于1969年商品化 从此 这种分离效率高 分析速度快的液相色谱就被称为高效液相色谱法 highperformanceliquidchromatography HPLC 也称高压液相色谱法或高速液相色谱法 液相色谱的发展 2020 2 15 液相色谱的分类广义地讲 固定相为平面状的纸色谱法和薄层色谱法也是以液体为流动相 也应归于液相色谱法 不过通常所说的液相色谱法仅指所用固定相为柱型的柱液相色谱法 通常将液相色谱法按分离机理分成吸附色谱法 分配色谱法 离子色谱法和凝胶色谱法四大类 2020 2 15 表5 1液相色谱分类 返回 2020 2 15 液相色谱仪 1 2020 2 15 液相色谱仪 2 2020 2 15 液相色谱仪 3 2020 2 15 液相色谱仪 4 2020 2 15 一 高效液相色谱法的特点 特点 高压 高效 高速高沸点 热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法 2020 2 15 二 流程及主要部件 1 流程 2020 2 15 2 主要部件 1 高压输液泵主要部件之一 压力 15 35 106Pa 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相 10 m 液体的流动相高速通过时 将产生很高的压力 因此高压 高速是高效液相色谱的特点之一 应具有压力平稳 脉冲小 流量稳定可调 耐腐蚀等特性 2020 2 15 选择流动相时应注意的几个问题 1 尽量使用高纯度试剂作流动相 防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加 2 避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子 如使固定液溶解流失 酸性溶剂破坏氧化铝固定相等 3 试样在流动相中应有适宜的溶解度 防止产生沉淀并在柱中沉积 4
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